呼吸道合胞病毒对支气管炎的变化分析范文
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摘要:目的通过检测RSV毛细支气管炎患儿血清GRα、GRβ水平，探讨GR亚型表达对RSV毛细支气管炎严重程度的影响。方法采用ELISA法测定和比较不同程度RSV毛细支气管炎组(轻度42例，重度24例)和对照组(48例)患儿血清中GRα、GRβ水平变化，同时对RSV毛细支气管炎严重程度与GRα/GRβ比值之间进行相关性分析。结果与对照组比较，轻度和重度RSV毛细支气管炎组血清GRα、GRβ水平均显著升高(P＜0．01);与轻度组比较，重度RSV毛细支气管炎组血清GRα、GRβ水平显著升高(P＜0．01);GRα/GRβ比值在重度组显著低于轻度组和对照组(P均＜0．01)，后两组比较差异无统计学意义。通过相关分析发现，RSV毛细支气管炎严重程度与GRα/GRβ比值之间呈显著负相关(r=－0．588，t=5．816，P＜0．05)。结论RSV毛细支气管炎患儿表现为血清GRα、GRβ水平的高表达，在重度患儿中表现更为明显;GRα/GRβ比值则在重度RSV毛细支气管炎中明显降低，而且RSV毛细支气管炎严重程度与GRα/GRβ比值之间呈显著负相关。
毛细支气管炎是导致婴幼儿住院的常见原因，有超过50%住院的毛细支气管炎患儿将发展成为哮喘［1］。其中呼吸道合胞病毒(RSV)是引起毛细支气管炎最重要的病原体，也是引起5岁以下儿童哮喘发作的高危因素［2］。由于RSV毛细支气管炎的发病机制尚未完全明确，因此临床上缺乏有效的治疗手段，尤其对糖皮质激素(GC)的应用存在较大争议，大多数的研究认为临床应用GC并不能从中获益［3～6］。由于GC只有通过糖皮质激素受体(GR)才能发挥其生物学效应，因此研究GR亚型表达的异常才能深入了解GC抵抗的发生机制［7］。本研究通过对RSV毛细支气管炎患儿血清GRα、GRβ水平的检测，探讨GR亚型表达的漂移与重症RSV毛细支气管炎的关系，同时为揭示RSV毛细支气管炎患儿的GC抵抗机制提供研究方向。
资料与方法
1．一般资料:
选择2014年11月～2016年10月在笔者医院住院的RSV毛细支气管炎和肺炎患儿为研究对象。RSV毛细支气管炎入选标准:①经ELISA法检测(试剂盒购自美国雅培公司)血清中RSV－IgM阳性;②毛细支气管炎诊断符合《中华儿科杂志》诊断标准［8］;③首次发病，病程在5天内;④无基础心肺疾病及免疫缺陷或血液系统疾病史。符合标准的病例共66例，其中男性38例，女性28例，患儿年龄3～14个月，平均年龄5．8±2．1个月。RSV毛细支气管炎严重程度的诊断参照Larranaga等［9］的评分标准:7～14分为重度组，共24例;0～6分为轻度组，共42例。另选取同期住院的斜疝、隐睾等非感染性小儿外科术前患儿48例作为对照组，其中男性32例，女性16例，年龄5～15个月，平均年龄8．4±3．8个月。所有研究对象均无特应性及过敏性疾病家族史，1个月内无类固醇激素或其他免疫抑制剂应用史，近2周内无呼吸道感染病史。本研究取得入选研究对象监护人的知情同意并获笔者医院医学伦理委员会的批准同意。
2．方法:
所有患儿均于入院当日抽取静脉血3ml，对照组为清晨8点抽取静脉血，静置1h，1500r/min离心，提取血清后置－70℃冰箱保存待检。采用ELISA法检测血清中GRα、GRβ水平，GRα试剂盒(货号GD－S0740)和GRβ试剂盒(货号GD－S0739)购自上海古朵生物科技有限公司。
3．血清GRα、GRβ水平测定:
①微滴定孔中加100μl样品;②室温孵育30min;③以washingbuffer洗板5次;④加入50μl酶标偶合液;⑤室温孵育30min;⑥以washingbuffer洗板5次;⑦加入50μl底物A和50μl底物B;⑧室温避光孵育15min;⑨加反应终止液50μl;⑩酶标仪读取450nm波长吸光度;瑏瑡制定标准曲线，标本读数。
4．统计学方法:
采用SPSS17．0统计学软件对数据进行统计分析，数据用均数±标准差(x±s)表示，多个样本均数比较采用单因素方差分析，两样本均数之间的比较采用q检验，相关性研究采用直线相关分析法，以P＜0．05为差异有统计学意义。
结果
1．疾病严重程度对RSV毛细支气管炎患儿血清GRα、GRβ水平的影响:与对照组比较，轻度和重度RSV毛细支气管炎组血清GRα、GRβ水平均显著升高(P＜0．01);与轻度组比较，重度RSV毛细支气管炎组血清GRα、GRβ水平显著升高(P＜0．01);GRα/GRβ比值在重度组显著低于轻度组和对照组(P均＜0．01)，后两组比较差异无统计学意义(P＞0.05)，见表12．RSV毛细支气管炎严重程度与GRα/GRβ比值之间的关系:直线相关分析发现，RSV毛细支气管炎严重程度与GRα/GRβ比值之间呈显著负相关(r=－0．588，t=5．816，P＜0．05)。
讨论
RSV毛细支气管炎是婴幼儿时期最常见的毛细支气管炎类型，主要病理改变是毛细支气管的黏膜水肿、黏液分泌增加、上皮细胞脱落后管腔堵塞，在临床上表现为气急、喘息、低氧血症等症状，严重者可以出现呼吸衰竭。虽然目前的研究表明［10，11］，RSV毛细支气管炎的发病过程与多种细胞炎性因子的参与和免疫应答反应有关，而且RSV感染后可导致哮喘发病的易感性增高，但其具体的发病机制尚未完全阐明，因此在治疗上尤其是对GC的应用存在分歧［12］。国内的很多研究认为，GC可以有效改善毛细支气管炎患儿的临床症状，缩短住院时间，预防其反复喘息［13～15］。国外的研究却认为，应用GC并不能改善RSV毛细支气管炎的临床症状和自然病程，在RSV毛细支气管炎中存在着GC抵抗现象，具体机制目前尚不明确［16］。GC主要通过与细胞质内的GR结合发挥作用，目前发现的GR包括GRα和GRβ两类亚型，研究表明，GRβ可能是一种潜在的内源性GC效应的拮抗因子，GRβ的表达增高可降低机体对GC的反应性，使机体出现内源性的GC抵抗现象，因此，笔者推测在RSV毛细支气管炎患儿中是否也存在着GRβ的高表达，导致GC治疗RSV毛细支气管炎疗效不佳，从而成为疾病发生、发展的一个重要诱因［17］。本研究发现，与对照组比较，轻度和重度RSV毛细支气管炎组血清中GRα、GRβ水平均明显升高(F分别为44．57、144．58，P均＜0．01)，而与轻度组比较，则重度RSV毛细支气管炎组血清GRα、GRβ水平升高更为显著(P均＜0．01)，说明在RSV毛细支气管炎患儿中存在着GR水平的表达增强，而在重度患儿中更为明显，这与文献报道一致［18］。GRβ是GRα的内源性的拮抗因子，由于疾病引起的GRα/GRβ比例失衡将导致GC敏感或GC抵抗的发生，即GRα/GRβ比值增大表现为GC敏感，GRα/GRβ比值减小将出现GC抵抗，因此，观察两者表达比例的变化能更真实的反映GC抵抗现象的发生［19］。笔者发现，重度RSV毛细支气管炎组GRα/GRβ比值较对照组和轻度组明显降低，而后两者比较差异无统计学意义，说明在重度RSV毛细支气管炎患儿中相对于GRα的表达，存在着GRβ的过度表达，从而导致这部分患儿对内源性GC的不敏感或抵抗，进而在临床上表现为更为严重的症状，这也可以部分揭示RSV毛细支气管炎中GC抵抗的发生机制。同时，笔者对RSV毛细支气管炎严重程度与GRα/GRβ比值之间进行相关性分析，笔者发现，随着RSV毛细支气管炎症状加重，GRα/GRβ比值越低，两者之间呈显著负相关(t=5．816，P＜0.05)，说明在RSV毛细支气管炎的发展过程中，GRα与GRβ之间的平衡失调是导致疾病严重程度的一个重要原因，因此，笔者认为血清GRα/GRβ比值可以作为预测RSV毛细支气管炎严重程度的一个有效的标志物。综上所述，在RSV毛细支气管炎患儿中表现为GRα、GRβ水平表达增强，但在不同程度的毛细支气管炎患儿中两者之间存在着表达失衡，主要表现为随着症状加重，GRα/GRβ比值降低，两者存在显著的负相关，因此这可以作为早期预测疾病严重度的一个重要标志物，也可以部分解释在RSV毛细支气管炎中存在GC抵抗的原因，同时为研究重症RSV毛细支气管炎的发生机制和GC的合理应用提供了一个新的方向。由于GC抵抗的发生机制非常复杂，而且本研究样本量较少，尚需临床开展大样本深入研究。
参考文献
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8《中华儿科杂志》编辑委员会，中医学会儿科学分会呼吸学组．毛细支气管炎诊断、治疗与预防专家共识［J］．中华儿科杂志，2015，53(3):168－171
10栾大丽，马桐生，黄玉克．毛细支气管炎的免疫学研究进展［J］．职业与健康，2015，31(9):1286－1289
11邵勤，刁玉巧．TGF－β和IL－10在呼吸道合胞病毒毛细支气管炎患儿外周血中的含量及表达意义［J］．中国生化药物杂志，2014，34(9):96－98
13曾科学．糖皮质激素在毛细支气管炎治疗中的应用［J］．实用中西医结合临床，2015，15(12):30－31
14徐大琴，张影菊．丙酸氟替卡松预防婴幼儿毛细支气管炎后喘息的临床观察［J］．临床肺科杂志，2016，21(11):2036－2037，2043
15王学珍．布地奈德联合特布他林对小儿毛细支气管炎的治疗效果探究［J］．中国医药指南，2017，15(20):126－127
作者：姚欢银 章杭湖 刘伟荣 李华浚 陈啸洪 马兰 单位：绍兴市人民医院