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《中国卫生检验杂志》2015年第二十四期
摘要:
目的探讨间接免疫荧光法抗核抗体(ANA)阴性而印迹法抗干燥综合征A抗体(SS-A)阳性的临床意义。方法分析本院5471例患者中54例抗SS-A抗体阳性而ANA阴性的患者,并分析总结其与临床诊断的关系。结果在5471例患者中,出现ANA阴性而抗SS-A抗体阳性共54例,阳性率为0.99%(54/5471)。其中类风湿性关节炎占42.59%(23/54);特发性血小板减少性紫癜占16.67%(9/54);系统性红斑狼疮占9.26%(5/54);肾炎和干燥综合征各占5.56%(3/54);肝炎、肺炎和眩晕各占3.70%(2/54);肺癌、胃炎、湿疹、外伤和高血压各占1.85%(1/54)。结论单独抗SS-A抗体阳性而荧光法ANA阴性结果可见于RA、SS、肺癌和高血压等多种疾病,并非SS及其他自身免疫病特异性抗体。
关键词:
抗核抗体;抗干燥综合征A抗体;自身免疫性疾病
抗核抗体(ANA)是抗细胞内所有抗原成分的自身抗体的总称,主要存在于血清中,也可存在关节滑膜液、胸腔积液和尿液中,可以在多种自身免疫性疾病中检测到,无种属和器官特异性,是自身免疫性疾病的筛查项目,间接免疫荧光法(IIF)是检测ANA的经典方法。抗干燥综合征A抗体(抗SS-A)作为抗核抗体谱(ANAs)中的抗体之一,对特异性诊断自身免疫性疾病具有重要的临床价值[1]。
1资料与方法
1.1资料选取2013年1月-2014年12月本院门诊与住院患者共5471例,检测发现ANA阴性而抗SS-A抗体阳性结果的患者有54例,其中男性13例,女性41例;年龄为13岁~79岁,平均年龄为(43.11±2.34)岁;门诊患者20例,住院患者34例。
1.2仪器与试剂德国LEICADM5500B荧光显微镜。间接免疫荧光法和免疫印迹法试剂盒(批号:F141216UH、D140924AG)均购自德国欧蒙(杭州)医学实验诊断有限公司。
1.3方法
1.3.1标本采集患者正常饮食,空腹8h~12h,清晨抽取静脉血2ml~3ml,静置0.5h后,离心分离血清(3000r/min离心10min)。当日不能及时检测的血清标本置于-20℃冰箱保存。
1.3.2检测方法采用间接免疫荧光法(IIF),检测ANA荧光显微镜观察结果,抗体滴度≥1∶100为阳性,为尽量消除主观因素,每个标本均由本实验室经验丰富的两名工作人员分别报告结果。采用免疫印迹法检测ANAs,共检测抗nRNP/Sm抗体、抗Smith抗体、抗SS-A抗体、抗Ro-52抗体、抗干燥综合征B抗体、抗DNA拓扑异构酶-1抗体、抗阻氨酰tRNA合成酶抗体、抗着丝点B抗体、抗双链DNA抗体、抗核小体抗体、抗组蛋白抗体和抗核糖体P蛋白抗体12种不同抗原IgG类抗体,每次试验均设阴性、阳性对照,操作严格按照试剂盒提供的说明书进行。
2结果
在5471份标本中,出现ANA阴性而抗SS-A抗体阳性的共54例,阳性率为0.99%(54/5471)。其中类风湿性关节炎23例,占42.59%(23/54);特发性血小板减少性紫癜9例,占16.67%(9/54);系统性红斑狼疮5例,占9.26%(5/54);肾炎和干燥综合征各3例,均占5.56%(3/54);肝炎、肺炎和眩晕各2例,均占3.70%(2/54);肺癌、胃炎、湿疹、外伤和高血压各1例,均占1.85%(1/54)(图1)。
3讨论
抗SS-A抗体是目前已知的ANAs中分布最广且最常见的一种抗体[2],是临床诊断SS的标准之一[3],但其特异性欠佳[4],常和ANA、抗SS-B抗体一起诊断SS,以提高诊断特异性。抗SS-A抗体在临床最常见的荧光染色模型为核颗粒型,分裂间期HEP-2细胞核浆呈细颗粒型荧光染色,细胞浆荧光染色阴性或弱的荧光染色。但SS-A抗原在细胞核中含量远高于在细胞浆中的含量,当患者体内的自身抗体为胞浆型的抗SS-A抗体时,在荧光法检测ANA时会表现为HEP-2细胞核浆呈荧光染色阴性、细胞浆弱的荧光染色。这时往往会导致荧光法检测ANA为阴性结果。
ANA是自身免疫性疾病(AID)的重要血清学标志,而IIF是检测ANA的金标准[5],是检测自身抗体的主要方法[6],也是目前应用最广泛的自身抗体筛查试验。IIF检测ANA采用的是HEP-2细胞,其包含的核抗原种类丰富,因此具有其他检测方法不可替代的优势。但是HEP-2细胞中某些抗原的含量较低,所以个别情况下会导致检测灵敏性不够,出现ANA荧光法阴性,特异性靶抗原检测结果阳性。ANA阴性而抗SS-A抗体阳性的情况在抗核抗体谱检测结果中较为少见。一项调查结果显示,ANA阴性而ANAs中特异性抗体阳性的检测率为10.17%[7]根据本院检测结果回顾性分析,ANA阴性而抗SS-A抗体阳性的检测率为0.99%。出现率不高,且该模式主要出现在RA、血小板减少、SLE等自身免疫性疾病中。因此,在临床工作中如遇到ANA阴性而抗SS-A抗体阳性时,首先在排除操作错误的前提下该情况是可以出现的,且主要出现在类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、特发性血小板减少性紫癜等自身免疫性疾病。
参考文献
[1]AframianDJ,KonttinenYT,CarrozzoM,etal.Urbanlegends-series:Sjgren’ssyndrome[J].OralDis,2013,19(1):46-58.
[2]TanEM.Antinuclearantibodies:diagnosticmarkersforautoimmunediseasesandprobesforcellbiology[J].AdvImmunol,1989,44(1):93-151.
[3]KobakS,OkselF,AksuK,etal.Thefrequencyofsiccasymp-tomsandSjgren’ssyndromeinpatientswithsystemicsclerosis[J].IntJRheumDis,2013,16(1):88-92.
[4]蔡逸婷,刘庆中,赵超,等.联合检测抗α-胞衬蛋白、抗SSA和抗SSB抗体在干燥综合征诊断中的应用[J].现代免疫学,2012,32(2):152-155.
[5]MeroniPL,SchurPH.ANAscreening:anoldtestwithnewrecom-mations[J].AnnRhrumDis,2010,69(8):1420-1422.
[6]郭大文,张英辉,单娜,等.抗核抗体核型与条带免疫抗体谱相关性分析[J].中华实用诊断与治疗杂志,2012,26(6):560-562.
[7]胡朝军,李俊,张道强,等.间接免疫荧光法筛查抗核抗体与特异性抗体检测的相互关系[J].中华临床免疫和变态反应杂志,2011,5(3):179-185.
作者:曹新春 何志强 李永伟 单位:河南省中医院检验科