妥曲珠利微晶体的制备范文

本站小编为你精心准备了妥曲珠利微晶体的制备参考范文，愿这些范文能点燃您思维的火花，激发您的写作灵感。欢迎深入阅读并收藏。

《中国兽医学报》2014年第七期

1材料与方法

1．1Tol微晶体的制备称取0．3g纤维素衍生物溶解于100mL蒸馏水中，4℃条件下溶胀过夜，备用。称取Tol1g溶解于20mL乙腈中，纤维素衍生物溶液置于冰水浴中，不断搅拌条件下，将Tol乙腈溶液缓慢加入100mL纤维素衍生物溶液中，待完全加入后立即过滤得到沉淀，真空干燥研磨后得Tol微晶体。

1．2Tol微晶体显微形态将Tol微晶体和Tol分别分散于载玻片上，置于生物显微镜下观察其形态特征。

1．3Tol微晶体体外溶出速率分别称取0．5g的Tol微晶体和Tol原药，分置于100mL容量瓶中，蒸馏水定容，25℃水浴中连续振荡，分别于5、10、15、20、30、40、50、60、90、120min时取样1mL，再补充1mL蒸馏水（25℃），取出的1mL样品用0．22μm的滤膜过滤，取20μL于高效液相色谱仪测出峰面积，代入标准曲线方程（S＝42921C＋5639，R2＝0．9996）计算出溶液中Tol浓度。

1．4血浆中Tol含量测定方法的建立

1．4．1色谱条件色谱柱为KromasilC18柱（4．6mm×250mm，5μm）；流动相为乙腈∶0．1％乙酸溶液（55∶45），流速为1．0mL／min；柱温为25℃；紫外检测波长为240nm；进样量为20μL。

1．4．2血样处理准确吸取0．2mL血浆样品于1．5mL的离心管中，加入0．3mL乙腈，涡旋混合器混合1min，12000r／min离心10min，吸取上清液用0．22μm微孔滤膜过滤，取滤液20μL作HPlC分析。

1．4．3方法专属性按照1．7．2的方法处理空白血浆、空白血浆加入Tol样品及家兔口服Tol和微晶体后的血浆样品，比较色谱图的差异。

1．4．4标准曲线和最低检测限精密称取20．0mgTol原药，置于50mL容量瓶中，加入甲醇溶解后定容，配置成400mg／L的Tol储备液。吸取一定量的Tol储备液用甲醇配置成2．0、4．0、8．0、16、32、64、128、256mg／LTol对照液。取0．18mL空白血浆，加入各浓度的Tol对照液0．02mL，使血浆中的Tol的质量浓度为0．2、0．4、0．8、1．6、3．2、6．4、12．8、19．2、25．6mg／L。按照1．7．2的血浆处理方法处理，进样20μL分析。以血浆中Tol浓度（C）为横坐标，以峰面积（S）为纵坐标，做出标准曲线，得到回归方程和相关系数。用空白血浆制成低溶度的药物样品，经处理后测定，将引起3倍基线噪音的药物质量浓度定义为最低检测限。

1．4．5精密度和回收率试验取空白血浆0．18mL，加入0．02mL不同质量浓度的Tol对照液配置成0．8、3．2、25．6mg／L高、中、低3个质量浓度的血浆样品5份，并按照1．7．2的血浆处理方法处理。取同一高、中、低样品一日内测定5次，连续测定5日，计算出日内和日间精密度。测定高、中、低5份样品，以标准曲线测得量与Tol加入量的比值计算回收率。

1．5Tol与微晶体的药代动力学参数测定

1．5．1给药及血样采集家兔在试验前用不含药物的家兔专用饲料饲养10d，给药前禁食12h，随机分为2组。将Tol和微晶体分别加入适量的蒸馏水制成混悬液，一次性给家兔灌胃，给药剂量均为10mg／kg。于给药前及给药后0．25、0．5、1、2、4、8、12、24、36、48h和3、5、7、10d，分别从各只家兔耳缘静脉采血，采血量为1mL，肝素钠抗凝，4000r／min离心取上层血浆，置于－20℃冰箱中备用。

1．5．2样品测定及数据处理按1．7．2项的方法，测定各血浆样品中Tol含量。所得数据用DAS2．0药动学软件处理，进行各种药代动力学模型拟合，计算各自数据的药代动力学参数；用SPSS（19．0）分析血药浓度和相关药代动力学参数的差异性。

2结果

2．1Tol微晶体显微形态Tol微晶体及原药的显微形态特征见图1。Tol原药呈10～30μm不等的针状晶体；将Tol制成微晶体之后，晶体大小明显减小，呈2～5μm不等的不规则晶体。

2．2Tol微晶体体外溶出速率Tol及微晶体的体外溶出速率见图2。由图可知，微晶体的溶出速度大于Tol原药，说明Tol制成微晶体后，由于粒径减小，其溶出速率得到明显改善。

2．3方法专属性色谱图在选定的色谱条件下，色谱图见图3。由图可知，羟丙基－β－环糊精对药物测定无干扰，血浆中内源性物质与Tol分离良好，Tol的保留时间在7．8min左右。

2．4标准曲线和线性范围按照1．7．4的方法得标准曲线方程为S＝16626C＋19394，R2＝0．9996，表明血浆中的Tol质量浓度在0．2～25．6mg／L范围内线性关系良好，最低检测限为0．05mg／L。

2．5精密度和回收率试验精密度和回收率试验结果见表1。

2．6Tol及其微晶体在家兔体内的药代动力学结果家兔灌胃给与Tol和微晶体后药时曲线见图4，数据采用DAS2．0药代动力学软件进行模型拟合，以AIC值最小，R2值最大为判断依据，结果符合一级吸收二室模型，其模拟方程分别为C（TOl）＝20．296e－0．038t＋4．524e－0．015t－23．439e－0．067t；C（微晶体）＝32．925e－0．089t＋3．167e－0．015t－29．485e－0．082t。具体药代动力学参数的比较见表2，Tol和Tol微晶体的Cmax分别为（8．925±0．360）mg／L和（12．510±0．525）mg／L，tmax均为24h，AUC（0－∞）分别为（411．605±20．918）mg／L•h和（578．650±11．664）mg／L•h，Tol微晶体相对生物利用度为140．6％。

3讨论

3．1Tol微晶体显微特征及体外溶出微细化的药物晶体可达几微米至几纳米，可以明显增加药物的溶出速率和在机体内的生物利用度，且无需载体材料，是近十几年的药剂学研究热点［8］。微晶体的制备方法有沉淀法、高压均质法、喷雾干燥法、蒸发沉淀法、乳化法、超临界流体结晶法等［9－11］，其中反溶剂沉淀法以操作简单、成本低、制得粒子粒径小分布窄等优势，受到广泛的运用。Douroumis等［12］用沉淀法制备了卡马西平纳米晶体，明显增加了卡马西平的溶出速率。张智亮等［13］采用高压均质技术将伊曲康唑制成超细晶体颗粒，溶出速率提高了13倍。现在西罗莫司、阿瑞吡坦、非诺贝特等多种采用晶体微粒化技术生产的新药在美国已经上市［10］。本试验采用反溶剂法制备Tol微晶体，由于反溶剂中有大量高分子材料吸附在晶体表面，与Tol形成氢键，且不断地搅拌，阻碍了晶体的生长，使晶体大小明显小于Tol原药［12］。体外溶出速率试验中，由于微晶体晶体大小较原药明显减小，使得溶出速率增加，此外，制备微晶体中有少量的高分子材料附着在微晶体表面，增加了晶体表面的亲水性，使得溶出速率进一步增加。但是由于晶体类型并没有改变，其溶解度并没有明显的差异，试验结果与祁雯雯等［4］报道相近。

3．2血浆样品的处理据报道，采用二甲基亚砜和乙腈联合处理血浆样品萃取效率较高，但是由于二甲基亚砜有较强的紫外吸收，使得溶剂峰较高，且有一定的拖尾，影响到药物峰检测［14］。根据文献［15－16］报道和试验验证，本试验采用乙腈沉淀蛋白法测定血浆中的Tol方法操作简单，专属性强，精密度高，溶剂峰较低，不影响药物的测定，平均萃取回收率达90％以上，符合生物供试品分析要求。

3．3药代动力学分析从药代动力学参数可知，Tol和微晶体在家兔体内均属于一级吸收二室模型，与国内外文献［16－18］报道Tol在多种动物体内药动学模型相同。吸收速率常速（Ka），达峰时间（tmax）、达峰浓度（Cmax）、药时曲线下面积（AUC）是衡量药物吸收速率和程度的重要参数，因此比较了原药和微晶体的Ka、tmax、Cmax、AUC（0－∞）的差异性，其中Ka、Cmax、AUC（0－∞）差异极显著。由于Tol在体内的代谢时间较长，增加吸收速率是增加其生物利用度的关键。从药动学参数来看，原药的吸收速率为（0．067±0．007）／h，而微晶体的吸收速率增加到了（0．082±0．005）／h。由于微晶体只是改变了晶体的大小，并未改变晶体类型，故达峰时间与原药均为24h，与Kim等［18］的结果相近。但是由于晶体粒径减小和表面亲水性的增加，使药物更容易溶出，微晶体的达峰浓度（12．510±0．525）mg／L较原药达峰质量浓度（8．925±0．360）mg／L明显增加。原药和微晶体AUC（0－∞）分别为（411．605±20．918）mg／（L•h）和（578．650±11．664）mg／（L•h），计算得相对生物利用度为140．6％，Tol制成微晶体后在家兔体内的生物利用度有很大的提高。高缘等［19］将黄芩素制成纳米混悬液，并研究了其在大鼠体内的药动学特征，结果表明黄芩素纳米混悬液明显的提高黄芩素的生物利用度，与本试验的结论相符，说明药物制成微晶体后能有效的提高其生物利用度。

作者：卢朝成符华林张伟金超周涛刘梦娇张艳丽曹航罗莉单位：四川农业大学动物医学院动物疫病与人类健康四川省重点实验室