植物源抑菌物质的筛选范文

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《现代畜牧兽医杂志》2014年第七期

1材料与方法

1.1试验结果判定标准。

1.2最佳致死量的测定将5×109cfu/mL的O1、O2、O78菌悬液分别稀释10倍、100倍。将12日龄鸡分为3组，每组10只，以5×109、5×108和5×107cfu/mL3种剂量胸肌注射，0.5mL/只。观察结果：5×109cfu/mL的菌悬液组12h死亡7只，24h又死亡3只；5×108cfu/mL的菌悬液组12h死亡4只，24h又死亡1只；5×107cfu/mL的菌悬液组24h死亡2只。因此确定最佳致死量为每只鸡胸肌注射0.5mL菌液[6]。由于体外试验得到初步的试验结果，因此将验证各药物样品体内试验效果。

1.3动物体内临床试验筛选出抑菌试验结果明显的物质进行药物安全试验及体内临床攻菌验证。试验动物采用韩伟鸡场提供1日龄健康蛋公鸡，自由采食至15日龄开始试验。于胸肌注射由本实验室保存的鸡源大肠杆菌O1、O2、O78，500μL/羽，即5×108cfu/mL。灌喂药品为黄芩、连翘、夏枯草、黄连、金银花，每天1g/mL生药原液0.5mL灌喂。感染试验组统一饲养，空白对照组单独饲养，但饲养条件一致。

2结果与分析

2.112种中药对标准菌株的抑菌效果从初筛结果来看，不同的原料提取液表现很大的抑菌活性和抑菌谱，其中，黄连、夏枯草、黄芩、连翘、石榴皮具有较好的抑菌效果，为广谱抑菌作用；绵马贯众、大黄、白术抑菌效果较差且抑菌谱窄；茯苓则无抑菌作用。所以，筛选得到黄芩、黄连、夏枯草、石榴皮、连翘材料作为进一步研究材料。

2.25种单味中药对霉菌的抑菌效果根据初步试验结果确定有5种中药水提取物对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌有明显抑菌效果。对青霉、黄曲霉、黑霉、毛霉的抑菌效果明显的是黄芩和黄连，所以将其正交配伍后看其混合效果。

2.3临床试验结果从表4可以看到，感染对照组死亡率为95%，可以看出此次人工诱发鸡大肠杆菌病的模型接近期效果，攻毒后第2天有死亡鸡只，可能是攻菌量过大，但经过给药治疗后，发现黄芩、夏枯草、连翘和金银花组攻毒保护率高于感染对照组5%～10%。

3讨论

大肠杆菌一直是困扰畜禽业的一大难题，尤其是鸡大肠杆菌病是大肠杆菌引起的一种常见病，可导致机体出现腹膜炎、滑膜炎、眼炎等多种疾病，对养禽业危害较大。大肠杆菌对猪的感染主要引起仔猪黄白痢、仔猪水肿，主要表现为肠炎、肠毒血症。由于猪样本过大，所以只做了鸡的临床攻菌试验。

本研究利用传统的、安全的植物源中草药为原料，提取并浓缩后进行体内和体外的试验研究，旨在开发出一系列新型抗生素替代物，以减少抗生素耐药性及残留对环境、生物造成的不良影响。本研究结果表明，所用的植物源物质具有一定的抗大肠杆菌及霉菌作用。从单味药物水提取抑菌试验可得：黄连、夏枯草、黄芩、连翘、石榴皮对鸡源O1、O2、O78，猪源O139、O141及金黄色葡萄球菌具有较好的抑菌效果；且黄连和黄芩对青霉、黄曲霉、黑霉、毛霉具有明显的抑菌效果，效果最好的是黄芩。临床试验中可以明显看到金银花组的攻菌保护率高于其他组。对比体内和体外试验，可能由于动物体内环境复杂，且鸡只个体差异等原因造成试验结果不一致，所以其作用机理还需继续探讨和研究。本试验主要采用植物源中草药水提取来测定其抑菌效果，可以考虑抑菌与提高免疫力相复合成为研发新型抗菌药物提供新的思路及垫定基础，为畜牧兽医疾病防治开启新篇章。

由于药物提取物中某些有效成分可能不溶于水或遇热易破坏，同时提取物抑菌试验前需经过高压灭菌，这些操作过程可能会导致某些药物的抑菌能力及药理活性下降，但是此方法所需设备简单，操作方法简便。还发现通过试验鸡人工感染大肠杆菌造模试验可得不同日龄的鸡对大肠杆菌的抵抗力有所不同，可能是因为自身抗体和抵抗力不同，对造模也有一定的影响。本试验过程中，操作严格认真，定量准确，且药物粘稠度等因素对试验影响较小，所以试验结果经过多次验证较为可靠，可作为进一步筛选和研究的参考资料，至于其具体的作用效果、提取物在体内的抗菌活性如何及配伍组方时各个药物中成分的协同或拮抗作用如何，尚需进一步研究。

作者：曹艳子林洋高丽刘中原梅冬雪江国托单位：大连三仪动物药品有限公司