小鼠免疫调节的实验研究范文

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《临床医学工程杂志》2014年第八期

1方法

1．1动物分组、造模方法及给药方法取4批NIH雄性小鼠，每批按体重随机分为6组，每组10只，分别为正常对照组、模型对照组、匹多莫德分散片组（0．267g•kg－1）、参芍葡萄籽提取物方剂高（1g药材＋80mgGSE•kg－1）、中（0．5g药材40mgGSE•kg－1）、低（0．25g药材＋20mgGSE•kg－1）剂量组。正常对照组腹腔注射10mL•kg－1生理盐水，除正常对照组外，其余免疫抑制小鼠腹腔注射环磷酰胺100mg•kg－1，每周1次，连续4周。各给药组按剂量灌胃给予相应药物20mL•kg－1，每天1次，连续30天。

1．2对免疫抑制小鼠免疫器官重量的影响末次给药后1h脱颈椎处死小鼠，取胸腺、脾脏称重，计算胸腺指数、脾脏指数［1］。

1．3对2,4－二硝基氯苯诱导免疫抑制小鼠迟发型超敏反应的影响给药第3周，各组小鼠均背部脱毛，7％DNCB丙酮溶液50μL于脱毛处均匀涂抹致敏。末次给药后1h，用1％DNCB丙酮溶液20μL涂抹于小鼠右耳两面进行攻击，24h后脱颈椎处死小鼠，用8mm金属打孔器打下小鼠左、右耳片，称重，以右耳减去左耳重量差值作为迟发型超敏反应值［2］。

1．4对免疫抑制小鼠半数溶血值HC50的影响具体如下［3］：给药第24天，除正常对照组外每只小鼠腹腔注射0．2mL2％（v／v）SRBC进行免疫。6天后，摘除眼球取血，2000rpm离心10min，取血清用SA缓冲液稀释（500倍），取稀释后的血清1mL置试管内，对照管取1mLSA缓冲液，依次加入10％（v／v）SRBC0．5mL，1∶8SA稀释的豚鼠血清1mL。置37℃水浴中孵育20min后，冰浴终止反应。2000rpm离心10min。取上清液1mL，加都氏试剂3mL，同时取10％（v／v）SRBC0．25mL加都氏试剂至4mL于另一支试管内，充分混匀，放置10min后，于540nm波长测定各管吸光度值。

1．5对免疫抑制小鼠碳粒廓清能力的影响具体如下［1］：末次给药后1h，小鼠尾静脉注射墨汁10mL•kg-1（墨汁∶生理盐水为1∶4）。注入墨汁后2min、15min，小鼠眼眶后静脉丛取血20μL，加到2mL0．1％Na2CO3溶液中。675nm波长处测吸光度值，以Na2CO3溶液作空白对照。同时将小鼠处死取脾脏和肝脏，按下式计算吞噬指数K和吞噬系数α。

1．6统计方法结果以均值±标准差表示，采用单因素方差分析，组间均数两两比较用S－N－K法，由SPSS15．0完成。

2实验结果

2．1对免疫抑制小鼠免疫器官重量的影响表1表明，与正常对照组比较，模型对照组小鼠胸腺指数、脾脏指数均显著降低（P＜0．01）。与模型对照组相比，参芍葡萄籽提取物方剂高、中、低剂量组小鼠胸腺指数、脾脏指数均明显增大（P＜0．01）。

2．2对2,4－二硝基氯苯诱导免疫抑制小鼠迟发型超敏反应的影响表1表明，与正常对照组比较，模型对照组小鼠迟发型超敏反应值显著减小（P＜0．01）。与模型对照组相比，参芍葡萄籽提取物方剂高、中、低剂量组小鼠迟发型超敏反应值明显增大（P＜0．01）。

2．3对免疫抑制小鼠半数溶血值HC50的影响表2表明，与正常对照组比较，模型对照组小鼠半数溶血值HC50显著减小（P＜0．01）；与模型对照组相比，参芍葡萄籽提取物方剂高、中、低剂量组小鼠半数溶血值HC50明显增大（P＜0．01）。

2．4对免疫抑制小鼠碳粒廓清能力的影响表2表明，与正常对照组比较，模型对照组小鼠K值、α值均显著减小（P＜0．01）；与模型对照组相比，参芍葡萄籽提取物方剂高、中、低剂量组小鼠K值、α值均明显增大（P＜0．01）。

3讨论

免疫系统是机体必需的防御系统，脾脏和胸腺是主要的免疫脏器，是淋巴细胞分化、居留、增殖和产生免疫应答的场所。脾脏指数和胸腺指数在一定程度上可反映机体非特异性免疫功能。环磷酰胺作为一种免疫抑制剂，能抑制动物的体液和细胞免疫应答，造成免疫抑制。本试验腹腔注射CTX4次后，模型对照组小鼠的胸腺指数和脾脏指数显著低于正常对照组，说明免疫抑制小鼠模型复制成功。实验结果显示，各剂量组的参芍葡萄籽提取物方剂均可增加免疫抑制小鼠的胸腺指数和脾脏指数，具有免疫增强活性，且呈一定的剂量相关性。迟发型变态反应是细胞免疫反应，当致敏T淋巴细胞再次接触相同的抗原时，能引起迟发型变态反应，T淋巴细胞释放出多种细胞因子，产生以单核细胞浸润为主的炎症，表现为皮肤红肿、硬结等。参芍葡萄籽提取物方剂各剂量组能使小鼠耳肿胀反应值水平较模型对照组显著升高，表明参芍葡萄籽提取物方剂可增强小鼠细胞免疫功能。血清溶血素水平可反映体液抗体形成水平［5］，反映机体的体液免疫作用的状态。用SRBC免疫小鼠后，产生抗SRBC抗体（溶血素IgM），在补体参与下导致红细胞溶解，释放出血红蛋白使溶液颜色产生变化，反映红细胞的溶血量。红细胞溶血与免疫后血清中产生的抗体含量有关，测定HC50可评价血清中抗体数量，进而反映小鼠体液免疫功能。吞噬细胞的吞噬能力是衡量机体非特异性免疫功能的指标之一，非特异性免疫是机体免疫系统的重要组成部分，当细菌、异物等抗原性物质进入机体后，可迅速被单核巨噬系统吞噬和清除，碳粒廓清法测定单核巨噬细胞功能是经典的观察单核巨噬细胞吞噬能力的方法［8-9］，可反映小鼠非特异性免疫的状态。

在本实验中，参芍葡萄籽提取物方剂能通过非特异性免疫调节作用，明显增加免疫抑制小鼠胸腺指数和脾脏指数；提高免疫抑制小鼠迟发型超敏反应值和HC50值，具有提高细胞免疫及体液免疫的作用；提高吞噬细胞的吞噬能力，具有增强机体非特异性免疫的功能；提示参芍葡萄籽提取物方剂对CTX所致免疫抑制小鼠具有增强免疫功能的作用［10］。以酿酒过程中产生的葡萄籽为原料，提取富含多酚类物质的葡萄籽提取物，不仅能为葡萄的综合利用开辟新途径，而且还可带来巨大的经济效益和社会效益。历经几十年的研究与开发，葡萄籽提取物（GSE）优越的抗氧化活性已为人们认可，并在食品、药品及化妆品等领域得到了广泛应用。基于国内外研究基础，结合使用中药及GSE，有望开发成为具增强免疫功能的保健品。

作者：梁政娆梁菊单位：广东省肇庆市中医院