抗凝血多肽Hirulog-S的稳定性研究范文

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《军事医学杂志》2015年第十二期

［摘要］

目的考察抗凝血多肽hirulog-s原料药及冻干剂的稳定性，为该药临床应用及保存条件的制定奠定基础。方法采用高效液相色谱法，通过影响因素实验、加速实验和长期稳定性实验测定Hirulog-S原料药及冻干剂的含量及有关物质的变化。结果影响因素实验结果表明，温度、湿度对Hirulog-S原料药、冻干剂的含量及有关物质变化影响不大;加速实验(40℃，RH75%)、24个月室温及4℃长期稳定性实验显示，Hirulog-S原料药及冻干剂含量及有关物质均无显著变化。结论Hirulog-S原料药及冻干剂具有较高稳定性，原料药室温避光密封保存、冻干粉4℃避光密封保存，暂定有效期2年。

［关键词］

抗凝剂;硬脂酸链修饰多肽;Hirulog-S;稳定性;色谱法，高压液相

Hirulog-S［序列:D-FPRP-GK(stearicacid)GG-QGDFEPIPEDAYDE-NH2］是本实验室设计的新型抗凝血多肽，含有修饰的硬脂酸侧链［1］。与临床药物比伐卢定(bivatrudin，Hirulog-1，D-FPRPGGGGNGDFEE-IPEEYL)相比具有显著优点［2～6］:①Hirulog-S的体内抗凝活性为现有抗凝药物比伐卢定的10倍以上，半衰期适中(3．5h，Hirulog-1为16min)，且作用平缓，不造成APTT高峰，出血性小;②不良反应低，小鼠急性毒性实验表明，Hirulog-S高于有效剂量100～200倍未发现明显毒性症状，脑、脏器等未出现异常或出血现象;③1～2次/d静脉注射就可保持很高的抗凝活性，用量仅为比伐卢定的1/10，能克服比伐卢定用量大(250mg/瓶)、药物峰值浓度高、半衰期短、连续静脉注射的缺点。本研究基于前期建立的Hirulog-S质量分析方法［7］以及《中国药典》2010年版［8，9］，研究其原料药、冻干剂的稳定性，为其临床应用制定保存条件。

1仪器与试剂

Agilent1200高效液相色谱系统，ChemStationB．04．02处理软件(安捷伦科技有限公司)。pH计(PE-10)、CP324S电子天平(德国Sartorius)，VotexGenie1振荡器(美国ScientificIndustries)，Alpha-2LD冻干机(CHRIST)，SHH-GSD系列综合药品稳定性试验箱(重庆市永生实验仪器厂)。Hirulog-S对照品(批号:20100304，经HPLC峰面积归一化法计算纯度≥99．65%)，新型抗凝血多肽Hirulog-S原料药样品(批号为20100301，20100302，20100303)均为成都圣诺生物制药有限公司产品;新型抗凝血多肽Hirulog-S冻干剂样品(生物工程研究所，批号为20100901、20100902、20100903，每瓶冻干剂含Hirulog-S25mg，甘露醇12．5mg，冻干前用0．5mol/L碳酸钠调节pH值至5．1～5．5)。乙腈(Fisher公司)，甲醇(Honeywell公司)，TFA(Acros公司，纯度为99%)均为色谱纯，磷酸和浓氨水及其他试剂均为市售分析纯，去离子水(自制)。

2方法与结果

2．1影响因素实验

2．1．1光照实验原料药(批号:20100303)及冻干剂样品(批号:20100902)置于敞口西林瓶并放入药品稳定性试验箱。冻干剂样品取2瓶，样品暴露放置于药品稳定性试验箱，光照强度5000±500LUX(温度25℃)放置10d，于第0、5、10天时取样，考察其含量及有关物质变化(水份含量及三氟乙酸含量未计，下同)。结果表明，Hirulog-S原料药对光稳定，含量及有关物质均无明显变化;Hirulog-S冻干剂的含量在第10天略有下降，有少量杂质产生，建议避光保存。

2．1．2高温实验同前取样，置于药品稳定性试验箱，分别于40、60℃放置10d，于0、5、10d时取样，考察其含量及有关物质变化。结果表明，Hirulog-S原料药在高温条件下稳定，Hirulog-S冻干剂在40℃高温条件下稳定，含量无明显变化，在60℃高温条件下含量略有下降，有少量杂质产生，结果见表2、表3。

2．1．3高湿实验同前取样，置于药品稳定性试验箱，分别于相对湿度(RH)75%、RH92．5%(温度25℃)放置10d，于0、5、10d时取样，考察其含量及有关物质变化。结果表明，Hirulog-S原料药及冻干剂在高湿条件下稳定，结果见表4、表5。

2．2加速实验3批原料药样品(批号:20100301、20100302、20100303)及3批冻干剂样品(批号:20100901、20100902、20100903)模拟上市包装，置于RH75%、40℃条件的药品稳定性试验箱中放置6个月，于第0，1，2，3，6个月取样，考察其含量及有关物质变化。结果表明，Hirulog-S原料药及冻干剂均较为稳定，6个月加速实验含量没有显著变化(表6)。

2．3长期试验3批原料药样品(批号:20100301，20100302，20100303)模拟上市包装，置于室温和4℃冰箱中避光保存，定期取样分析;3批冻干剂样品(批号:20100901，20100902，20100903)模拟上市包装，置于4℃冰箱中避光保存，定期取样分析(表7、表8)。结果表明，Hirulog-S原料药在室温及4℃条件下放置2年稳定，含量无明显变化，3年后含量略有下降;Hirulog-S冻干剂在4℃条件下放置2年稳定，含量无明显变化。

3讨论

本研究采用HPLC方法学分析Hirulog-S原料药及冻干剂样品［6］，该法快速简便，结果准确可靠，重复性好。影响因素实验研究结果表明，Hirulog-S对光照、温度(40℃)及湿度稳定(吸湿除外)。6个月加速实验及长期留样考察实验表明，Hirulog-S原料药及其冻干剂针剂稳定性很好，该药原料药在室温下储存有效期达2年以上。该药冻干粉在4℃避光保存条件下有效期可达2年以上。一般来说，多肽类药物稳定性不好，需要低温保存(如4℃)。然而Hirulog-S的原料药不仅在4℃条件下长期保存十分稳定，且在室温下保存2年也十分稳定，其含量及有关物质变化与4℃保存的结果差别不大，这在多肽药物中非常少见，这一特性使其储存十分方便，减少了储存及运输成本。

【参考文献】

［1］戴秋云，黄园园，董铭心，等．一类抗凝血多肽及其用途:中国，ZL200710120685［P］．2011－03－23，InternationalPCTPa-tentApplicationNumber:PCT/CN2008/001881，2010－05－20．

［2］YuZ，HuangYY，WangY，etal．Constructionandcharacteriza-tionofnovelhirulogvariantswithantithrombinandantiplateletfunctions［J］．ProtPepLett，2014，21(1):69－74．

［3］MalikN，GershlickAH．Theclinicalandeconomicimpactofbivalirudinforpercutaneouscoronaryintervention［J］．ExpertRevPharmacoeconOutcomesRes，2013，13(6):699－706．

［4］ScholleJM，WhiteCM．Bivalirudin:areviewofpharmacologyandtherapeuticuse［J］．ConnMed，2010，74(10):595－597．

［5］张艳，韩国柱，吕莉，等．新型合成水蛭肽Hirulog-s抗家兔弥散性血管内凝血的作用［J］．中国新药杂志，2012，21(6):611－615．

［6］LiuZG，YuZ，HuangYY，etal．Anovelstearicacid-modifiedhirudinpeptidomimeticwithimprovedpharmacokineticpropertiesandanticoagulantactivity［J］．SciReports，2015，5:14349．

［7］郭会芹，王于，付超，等．新型抗凝血多肽Hirulog-S的质量分析［J］．药物分析杂志，2011，31(10):1930－1933．

［8］国家药典委员会．中华人民共和国药典2010年版二部附录ⅤD高效液相色谱法［S］．北京:中国医药科技出版社，2010:29－30．

［9］国家药典委员会．中华人民共和国药典2010年版二部附录ⅪⅩC原料药与药物制剂稳定性试验指导原则［S］．北京:中国医药科技出版社，2010:199－200

作者：余硕 郭会芹 董铭心 戴秋云 单位：军事医学科学院生物工程研究所