氟康唑立方液晶凝胶的评价范文

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《军事医学杂志》2015年第十二期

［摘要］

目的对氟康唑立方液晶凝胶进行表征，建立氟康唑含量测定方法。方法以甘油单油酸酯(GMO)为液晶材料制备氟康唑立方液晶凝胶，偏光显微镜及小角X衍射仪(SAXS)对氟康唑立方液晶凝胶进行表征;采用高效液相色谱法测定立方液晶凝胶中氟康唑的含量。结果立方液晶凝胶在偏光显微镜(PLM)下为暗视野;SAXS显示空白立方液晶凝胶中出现2个信号峰，分别是q1(0．83209nm－1)和q2(1．017nm－1);氟康唑立方液晶凝胶中出现2个信号峰，分别是q1(0．81888nm－1)和q2(0．95095nm－1)。高效液相色谱法测定立方液晶凝胶中氟康唑在20～500μg/ml范围内线性关系良好。结论PLM及SAXS适宜于立方液晶凝胶表征，高效液相测定方法可用于氟康唑立方液晶凝胶的质量控制和评价。

［关键词］

氟康唑;立方液晶凝胶;显微镜检查，偏振;小角X衍射仪;色谱法，高效液相

氟康唑(fluconazole，FLZ)分子式为C13H12F2N6O，具有三唑环类的化合物，纯品为白色或类白色结晶或结晶性粉末，在甲醇中易溶，在乙醇中溶解，在二氯甲烷、水或醋酸中微溶，在乙醚中不溶。其分子结构如图1所示。目前由于氟康唑的疏水性［1］限制了其在外用经皮给药制剂的应用，而立方液晶凝胶作为一种新剂型，具有独特的内部双水道结构，构成了三维延伸的双连续的类似“蜂窝状”结构，能同时增溶亲水、亲脂及两亲性分子［2］，此外，它还可包载大量的药物，特别是疏水性药物［3］，因此考虑将其作为氟康唑一种理想的载药体系。本研究尝试以甘油单油酸酯(GMO)为液晶材料，对制备的氟康唑立方液晶凝胶进行表征，并建立HPLC方法测定立方液晶凝胶中氟康唑的含量。

1仪器与试药

LC-10ATVP高效液相色谱仪，包括SPD-10AVP型紫外检测器(日本岛津公司);梅特勒－托利多AB-104电子天平(瑞士);恒佳牌DT-1000E电子天平(常熟市佳衡天平仪器有限公司);TU-1810紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司);QL-901涡旋仪(海门市其林贝尔仪器制造有限公司);KQ5200超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);HH-4数显恒温水浴锅(江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司);LEICADM2500P偏光显微镜(PLM，北京同舟同德仪器仪表有限公司);SAXSess小角X衍射仪(SAXS，奥地利AntonPaar公司)。氟康唑原料药(浙江金伯士药业有限公司，纯度98．96%，批号140601);氟康唑对照品(中国食品药品检定研究院，含量:99．8%，批号100314-201204);GMO(丹麦丹尼斯克公司惠赠，纯度≥90%，批号116703);甲醇(色谱纯，安徽时联特种溶剂股份有限公司，批号6508FU01)，无水乙醇(国药集团化学试剂有限公司，批号20140910)。水为纯化水，其他试剂均为分析纯。

2方法与结果

2．1氟康唑立方液晶凝胶的制备称取适量氟康唑原料药加入一定量融化后的GMO中，放置后涡旋加入纯化水，然后水浴放置1h，最后于常温放置1周后即得。立方液晶凝胶中氟康唑的最终质量分数为10．0mg/g。制备的氟康唑立方液晶凝胶最终呈无色、透明凝胶状。

2．2氟康唑立方液晶凝胶的表征

2．2．1偏光显微镜取少许样品均匀涂布于载玻片上，盖上盖玻片，置于PLM下观察，可发现其在PLM下无偏光，视野为暗黑色，这与立方液晶分子排列为各向光学同性相符［4］。

2．2．2小角X衍射仪(SAXS)将氟康唑立方液晶凝胶取适量放置于直径1mm的石英毛细管中，用环氧树脂密封，进行小角X散射［X射线源为Cu-Kα辐射(0．1542mn)，管压和管流分别为50kV和40mA］，样品的照射时间为15min，背景散射对样品的影响已扣除。散射根据公式S=2sinθ/λ=q/2π，其中S为散射矢量，q为散射因子，θ为散射角，将散射强度对散射因子作图即得到SAXS图谱(图3)。由图3A可见，空白立方液晶凝胶中出现2个散射峰，散射因子分别为q1(0．83209nm－1)和q2(1．017nm－1)，散射因子的比值为q1∶q2槡槡=2∶3，属于典型的立方液晶SAXS峰特征，其内部结构对应的为双菱形晶格(Pn3m)结构［5，6］;根据图3B可知，氟康唑立方液晶凝胶中出现2个散射峰，散射因子分别为q1(0．81888nm－1)和q2(0．95095nm－1)，散射因子的比值为q1∶q2槡槡=6∶8，这也是典型的立方液晶SAXS峰特征，其内部结构对应的为螺旋型晶格(Ia3d)结构［7，8］。因此可以看出，随着药物氟康唑的加入，氟康唑参与立方液晶内部结构的形成，使得立方液晶内部晶型从Pn3m变成了Ia3d结构。

2．3氟康唑立方液晶凝胶的含量测定方法

2．3．1色谱条件和系统适用性实验WondasilC18-WR色谱柱(4．6mm×250mm，5μm);流动相:甲醇－磷酸盐缓冲液(pH7．0)(45∶55);流速:1．0ml/min;检测波长:261nm;进样量:10μl。在此色谱条件下，理论塔板数应不低于3000。

2．3．2溶液的配制

2．3．2．1对照品溶液精密称取氟康唑对照品10．00mg，置于10ml容量瓶中，加入甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，配成1．0mg/ml溶液作为对照品储备液;精密吸取该储备液1．0ml置10ml容量瓶，加甲醇至刻度，摇匀后作为对照品溶液。

2．3．2．2供试品溶液精密称取氟康唑立方液晶凝胶0．10g(本品为1%氟康唑立方液晶凝胶)，加入5ml甲醇，超声10min，溶解，并用甲醇定容至10ml容量瓶中，用0．22μm微孔滤膜过滤后即得供试品溶液。

2．3．2．3阴性对照溶液称取空白立方液晶凝胶0．10g，精密称定，按2．3．2．1制备阴性对照品溶液。

2．3．3专属性实验精密量取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。由图4可见，辅料GMO不干扰氟康唑的含量测定，说明方法专属性良好。

2．3．4线性关系的考察精密量取氟康唑对照品储备液5．0ml置10ml量瓶中，加甲醇稀释并定容至刻度，摇匀，得500μg/ml溶液。将上述溶液用甲醇稀释成浓度分别为20、80、100、200、500μg/ml的系列标准溶液。分别精密量取10μl进样，记录色谱图。以氟康唑的浓度C(μg/ml)对峰面积A作标准曲线，线性回归方程为:A=585．34C+206．54，相关系数r=0．9999。结果表明，氟康唑在20～500μg/ml浓度范围内线性关系良好。

2．3．5精密度实验精密量取2．3．2．1项下氟康唑对照品溶液10μl，按2．3．1项下色谱条件，连续进样6次。分别测定峰面积，RSD为0．92%(n=6)，表明仪器精密度良好。

2．3．6重复性实验取同一批氟康唑立方液晶凝胶(批号:20150417)6份，按2．3．2项下分别制备6份样品溶液，分别进样10μl，按含量测定项下相同色谱条件下测定并计算含量。平均含量为99．65μg/ml，RSD为1．55%(n=6)，表明方法重复性良好。

2．3．7稳定性实验取一份氟康唑立方液晶凝胶(批号:20150417)，按2．3．2．2项下制备样品溶液，分别于0、2、4、8、12和24h进样10μl，记录色谱图。测得供试品溶液峰面积RSD为1．83%，表明供试品溶液放置室温24h内稳定。

2．3．8加样回收率实验分别精密称取9份已知含量的同一批立方液晶凝胶(批号:20150417)各约0．1g，同时精密量取2．3．2．1项下氟康唑对照品溶液各0．8、1．0、1．2ml，置10ml容量瓶中(平行样品3份)，按2．3．2．2项下方法制备溶液，按“2．3．1”项下色谱条件测定氟康唑含量，回收率结果见表1。

2．3．9样品的含量测定取3批不同批号的样品，按2．3．2．2项下方法制备样品溶液，按2．3．1项下色谱条件分别进样10μl测定，结果见表2。

3讨论

立方液晶凝胶中的基质GMO为高分子聚合物，不溶于水相，本制剂用流动相稀释以后变成半透明状胶体混悬液，采用高速离心和0．22μm滤膜过滤均过滤不掉胶体基质。考虑到样品可能会造成色谱柱堵塞，甚至损坏仪器，在进高效液相分析前必须完全溶解样品中的GMO。本实验采用甲醇溶解样品，即可得到无色透明的溶液，该法很好地避免了大分子基质对色谱柱的影响。立方液晶的独特结构使其在医药领域的应用具有很多优点，除了可持续释放内部包载的药物，它还可提供优良的生物相容性和完整的生物降解能力［9］。GMO内部三维扩展的脂质双分子层以及两个独立的水通道，厚度和直径＜10nm，这些独特的结构适合包载药物分子，特别是水不溶性药物。Zhang等［10］报道，当它作为药物经皮给药的载体，可明显提高药物的透皮效果［11］，说明立方液晶在皮肤经皮给药方面发挥重要作用。

通常立方液晶常见有3种晶格结构:螺旋型晶格(Ia3d，CG)、双菱形晶格(Pn3m，CD)和体心立方型晶格(Im3m，CP)。药物的加入会引起立方液晶在几种不同的晶格结构之间变化，在立方液晶中，Ia3d的临界堆积参数约为1．2，小于Pn3m(约为1．3)。本实验因为氟康唑为疏水性药物，易与脂类分子极性区域作用，使得脂类分子的平均极性头基面积增大，从而使堆积参数减小，导致体系更易形成Ia3d的立方液晶［12］。本研究通过PLM和SAXS等方法表征立方液晶凝胶的内部结构，成功制备出氟康唑立方液晶凝胶，并采用HPLC方法很好地检测和控制氟康唑含量，为氟康唑外用经皮给药制剂的研究提供了新的思路和方法。

作者：陈熙 付桂英 胡巧 陈珊珊 单位：安徽医科大学解放军307临床学院 军事医学科学院附属医院药学部