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《承德医学院学报》2016年第4期
摘要:
目的:采用高效液相色谱法测定不同厂家益心酮片中牡荆素葡萄糖苷等6种成分的含量。方法:采用HPLC法，色谱柱为AgilentZORBAXSB-C18(4.6mm×250mm，5μm);流动相:0.1%甲酸溶液-乙腈-四氢呋喃梯度洗脱;流速1.0ml/min;检测波长350nm;柱温30℃;进样量10μl。结果:绿原酸、牡荆素葡萄糖苷、牡荆素鼠李糖苷、牡荆素、芦丁和金丝桃苷的线性范围分别是12.5-400、25-800、31.25-1000、9.38-300、2.50-80和9.38-300μg/ml，加样回收率为99.3%-100.6%(RSD＜2.0%)。结论:不同厂家益心酮片中6种成分的含量差异较大(RSD:36.90-71.43%），提高中药的质量控制具有重要意义。
关键词:
益心酮片;含量测定;HPLC
益心酮片是以山楂叶提取物为原料制成的中成药制剂，收载于《中国药典》2015年版一部，具有活血化瘀、宣通血脉的功效[1]。山楂叶是蔷薇科植物山楂CrataeguspinnatifidaBge.的干燥叶，夏秋二季采收，具有活血化瘀、理气通脉、化浊降脂的作用，主要含黄酮类和有机酸类成分[2-3]。2015年版《中国药典》采用HPLC法仅测定了益心酮片中牡荆素葡萄糖苷的含量，基于中药多成分、多靶点的作用特点，多指标成分同时测定的质量评价模式能更全面反应中药的质量。为此，本研究在文献[4-5]的基础上采用RP-HPLC法同时测定益心酮片中牡荆素鼠李糖苷、牡荆素葡萄糖苷、牡荆素、芦丁、金丝桃苷和绿原酸6种成分的含量，以期为进一步提高益心酮片的质量提供依据。
1仪器与试药
1.1仪器
Agilent1200Series高效液相色谱仪(G1311A四元泵、G1329A自动进样器、G1322A在线脱气机、G1316A柱温箱、G1315D二极管阵列检测器)，AgilentChemstation色谱工作站，KQ-700型超声波清洗器，HC-2062高速离心机，AG-245型十万分之一电子分析天平。
1.2试药
对照品牡荆素鼠李糖苷(111668-200602）、牡荆素(111687-200602）、芦丁(100080-200707）、金丝桃苷(111521-201004）、绿原酸(110753-200413），中国药品生物制品检定所(供含量测定用）;对照品牡荆素葡萄糖苷(A0513），成都曼思特生物科技有限公司(纯度＞99%）。乙腈(FisherScientific，USA）、四氢呋喃(MredaTechnologyInc，USA），色谱纯;水，娃哈哈纯净水;其他试剂均为分析纯。
1.3益心酮片
益心酮片共18批:山西省恒山中药有限责任公司5批，山西振东泰盛制药有限公司4批，海南天煌制药有限公司3批，山西昂生药业有限责任公司3批，湖南方胜制药股份有限公司3批。
2方法与结果
2.1色谱条件
色谱柱:AgilentZORBAXSB-C18(4.6mm×250mm，5μm）;流动相:0.1%甲酸水溶液（A）-乙腈(B）-四氢呋喃(C），梯度洗脱(程序见表1);检测波长350nm;柱温30℃;流速1.0ml/min;进样量10μl。供试品溶液色谱图见附图。
2.2溶液的制备
2.2.1对照品溶液的制备:精密称取牡荆素葡萄糖苷、牡荆素鼠李糖苷、牡荆素、芦丁、金丝桃苷和绿原酸适量，用甲醇制成每ml含牡荆素葡萄糖苷0.80mg、牡荆素鼠李糖苷1.00mg、牡荆素0.3mg、芦丁0.08mg、金丝桃苷0.3mg、绿原酸0.4mg的混合对照品溶液。
2.2.2供试品溶液的制备:精密称定益心酮片0.3g，置25ml量瓶，用70%甲醇定容，称定重量，超声提取20min，用70%甲醇补足失重，过滤，取续滤液离心10min(12000r/min），上清液用0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。
2.3方法学考察
2.3.1线性关系考察:精密量取2.2.1中的混合对照品溶液5ml置10ml量瓶，甲醇定容，摇匀，作为2号溶液，按倍比稀释法制备3、4、5、6号溶液。取系列溶液分别进样10μl，按2.1的色谱条件测定峰面积，以浓度(X)为横坐标，峰面积(Y）为纵坐标进行线性回归，结果见表2:
2.3.2精密度试验:精密吸取2号混合对照品溶液10μl，按2.1的色谱条件连续进样6次，计算6种成分的峰面积，RSD均＜2.0%，说明仪器精密度良好。
2.3.3重复性试验:取批号131101益心酮片6份，每份0.3g，按2.2.2的方法制备供试品溶液，按2.1的色谱条件进行测定，计算6种成分的含量，RSD均＜2.0%，表明方法重复性良好。
2.3.4稳定性试验:取批号131101益心酮片供试品溶液，按2.1的色谱条件分别在0、4、8、12、16、24h进样测定，计算6种成分的含量，RSD均＜2.0%，表明供试品溶液在24h内稳定。
2.3.5加样回收率试验:取已知含量的益心酮片(山西省恒山中药有限责任公司，批号131101）6份，每份0.15g，精密称定，分别精密加入对照品适量，按2.2.2的方法制备供试品溶液，按2.1的色谱条件测定，结果6种成分的平均回收率分别为:100.4%、100.0%、100.6%、99.9%、100.6%、99.3%，RSD均＜2.0%。
2.4含量测定
分别精密称取实验用18批益心酮片，按2.2.2的方法制备供试品溶液，按2.1的色谱条件分别测定益心酮片中6种成分的含量，结果见表3:不同厂家益心酮片中6种成分的含量差异较大(RSD:36.90-71.43%）。
3讨论
本研究应用的是常规高效液相色谱法，为了保证6种成分含量测定结果的准确性，色谱条件的优化是关键，实验前期对检测波长、流动相的组成和比例、色谱柱进行了系统考察，本研究所采用的色谱条件保证了主要成分峰的数目和良好的分离度。本研究同时测定了18批益心酮片成品中6种成分的含量，结果显示不同厂家益心酮片中6种成分的含量相差较大(RSD:36.90-71.43%），可能是由于不同产地的药材或是生产过程中的工艺差别所导致的。因此，提高中药的质量控制具有重要意义。
参考文献：
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部）[S].2015年版.北京:中国医药科技出版社，2015.1402.
[2]郭琦丽，吕武清.山楂叶的研究进展[J].中国药业，2007，16(22):60-62.
[3]耿慧春，满莹，赵智勇.山楂叶化学成分和药理作用研究进展[J].中国现代医生，2009，47(26):12-13.
[4]潘海峰，王领弟，李艳荣，等.HPLC测定山楂叶7种成分的含量[J].中药材，2012，35(6):925-927.
[5]于淼，原源.HPLC法测定益心酮片中四种黄酮类成分的含量[J].东南国防医药，2015，17(2）:157-159，165.
作者:杨明宇 王领弟 杜义龙 赵胜男 李艳荣 潘海峰 单位:河北省中药研究与开发重点实验室 承德医学院中药研究所 承德医学院附属医院药剂科