儿童型蛋白质粉免疫力增强研究范文

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摘要:目的评价某儿童型蛋白质粉增强免疫力的作用。方法将受试样品按0.825、1.650、3.300g/(kg•BW)3个剂量给予小鼠连续灌胃30d后进行免疫试验。试验项目为细胞免疫功能试验、体液免疫功能试验、单核－巨噬细胞吞噬功能试验和NK细胞活性测定方法。结果1.650、3.300g/(kg•BW)两个剂量组ConA诱导的小鼠淋巴细胞增殖能力较溶剂对照组明显增强，差异有统计学意义(P＜0.05)，3.300g/(kg•BW)剂量组单核－巨噬细胞碳廓清能力及小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞功能均明显高于溶剂对照组，差异均有统计学意义(P＜0.05)，1.650、3.300g/(kg•BW)两个剂量组小鼠NK细胞活性(数据转换值)明显高于溶剂对照组，差异有统计学意义(P＜0.05)，1.650g/(kg•BW)剂量组小鼠抗体生成细胞数明显高于溶剂对照组，差异有统计学意义(P＜0.05)。结论某儿童型蛋白质粉具有增强免疫力作用。

关键词:儿童型蛋白质粉;免疫功能;小鼠

多数蛋白质粉是以大豆分离蛋白质为主材料，加上乳清蛋白等辅助蛋白一起加工而成的一类蛋白食品。该类食品不仅服用方便，而且脂肪含量低［1］。大豆分离蛋白的氨基酸构成较为合理，含有大量人体必需氨基酸，为优质植物性蛋白质。大豆分离蛋白还含有多种对人体生理机能有特殊作用的功能性成分，如大豆异黄酮、皂甙、膳食纤维等，能够预防诸多“现代文明病”的发生［2－5］。乳清蛋白由于含有免疫球蛋白，能够刺激人体免疫系统。乳铁蛋白可以促进铁的吸收，是一种具有多种生物活性功能的铁结合蛋白，还具有抗氧化、增强免疫调节等功能［6－8］。不同于动物蛋白，大豆分离蛋白和乳清蛋白对动物不会产生高血脂、高胆固醇等副作用。本儿童型蛋白质粉将大豆分离蛋白质、乳清蛋白和乳铁蛋白组成混料，由于多种蛋白必须氨基酸互补作用，可以使其功能互补，增强其营养价值。目前国内未见儿童型蛋白质粉增强免疫功能的相关报道。本次研究按照《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)的相关要求，探讨了某儿童型蛋白质粉增强免疫力的作用。

1材料与方法

1.1受试物某儿童型蛋白质粉，淡黄色粉末，由国内某公司提供。厂家推荐摄入量为10g/(人•d)，换算成单位体重推荐摄入量为0.33g/(kg•BW)(儿童体重按照30kg计算)。用蒸馏水配制成试验所需浓度。

1.2实验动物健康成年SPF级昆明小鼠200只，雌性，体重范围18.5～22.0g。购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司，实验动物生产许可证号为SCXK(湘)2016－0002。

1.3动物饲养环境屏障环境，温度为21～23℃，湿度为42%～66%。实验动物使用许可证号为SYXK(湘)2017－0001。辐照灭菌清洁级饲料，由北京科澳协力饲料有限公司提供。饲料生产许可证号为SCXK(京)2014－0010。

1.4主要仪器与试剂超净工作台、CO2培养箱、离心机、酶标仪、723分光光度计、分析天平、SA缓冲液(美国Gibco公司)、Hank's液(美国Gibco公司)、RPMI1640培养基(美国Gibco公司)、小牛血清(HYCLONE公司)、刀豆蛋白A(美国Sigma公司)、噻唑蓝(美国Sigma公司)。

1.5剂量选择将实验动物按体重随机分为5个大组，用Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ标识，每组40只动物。其中Ⅰ组动物开展NK细胞活性测定实验和ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验，Ⅱ组动物完成脏/体比值计算、血清溶血素测定和抗体生成细胞检测，Ⅲ组动物开展迟发型变态反应实验，Ⅳ组动物开展碳廓清实验，Ⅴ组动物开展小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验。每一大组动物按体重随机分为4组，每组10只动物，分别为溶剂对照组以及低、中、高3个剂量组。实验设0.825、1.650、3.300g/(kg•BW)3个剂量组(分别相对于人体推荐量的2.5倍、5倍和10倍)。各剂量组用蒸馏水配制，按0.2ml/(10g•BW)每天灌胃一次，溶剂对照组给予等体积的蒸馏水。连续灌胃30d后对实验动物的各项免疫指标进行测定。

1.6免疫指标的测定脏器/体重比值计算，ConA诱导小鼠脾淋巴细胞转化实验(MTT法)，迟发型变态反应实验(DTH法)，抗体生成细胞检测实验(Jerne改良玻片法)，血清溶血素测定实验(血凝法)，小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验，小鼠碳廓清实验，以及NK细胞活性测定实验，均按照规范方法进行［9］。

1.7实验数据统计采用SPSS15.0软件包对实验数据(或转换值)进行方差分析，检验水准选择α=0.05。

2结果

2.1蛋白质粉对小鼠免疫器官胸腺和脾脏的脏器/体重比值影响低、中、高3个剂量组小鼠胸腺/体重和脾脏/体重值与溶剂对照组比较，差异均无统计学意义(P＞0.05)(见表1)。2.2蛋白质粉对小鼠细胞免疫功能的影响中、高剂量组ConA诱导小鼠脾淋巴细胞转化能力明显高于溶剂对照组，差异有统计学意义(P＜0.05);低、中、高3个剂量组小鼠足跖肿胀度与溶剂对照组比较，差异无统计学意义(P＞0.05)(见表2)。

2.3蛋白质粉对小鼠体液免疫功能的影响中剂量组小鼠抗体生成细胞数明显增多，与溶剂对照组比较，差异有统计学意义(P＜0.05);低、中、高3个剂量组小鼠抗体积数与溶剂对照组比较，差异均无统计学意义(P＞0.05)(见表3)。

2.4蛋白质粉对小鼠单核－巨噬细胞吞噬功能的影响高剂量组单核－巨噬细胞碳廓清能力增强，并且巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬率和吞噬指数均升高，与溶剂对照组比较，差异均有统计学意义(P＜0.05)(见表4)。

2.5蛋白质粉对小鼠NK细胞活性的影响中、高剂量组小鼠NK细胞活性(数据转换值)明显升高，与溶剂对照组比较，差异均有统计学意义(P＜0.05)(见表5)。

3讨论

免疫是维持机体不患感染性疾病的稳态状态，是一系列复杂的生理学机制，使个体识别、区分外来物，并进行中和或清除。机体的免疫系统可分为非特异性免疫系统和特异性免疫系统。非特异性免疫又称为固有免疫，一般包括机体的组织屏障、固有免疫细胞和固有免疫分子3类，具有可遗传、作用范围广等特点。特异性免疫又称为获得性免疫，包括细胞免疫和体液免疫，具有特异性和免疫记忆等特点。免疫功能的评价包括固有性免疫应答和获得性免疫应答的评价，固有性免疫应答评价包括单核－巨噬细胞吞噬功能测定和NK细胞活性的测定，获得性免疫应答的评价包括细胞免疫功能测定和体液免疫功能测定。单核－巨噬细胞的吞噬能力是衡量机体非特异性免疫功能的标志之一，当细菌、异物等抗原物质进入机体后可迅速被其吞噬和清除，因而巨噬细胞廓清指数的多少可以反映其吞噬功能的强弱［10－13］。本次实验结果显示，儿童型蛋白质粉可以明显增强小鼠单核－巨噬细胞吞噬功能和NK细胞活性，对机体非特异性免疫有较强的促进作用。获得性免疫是机体对外界物质刺激后形成的一种特异性反应，比如胸腺是T细胞的主要生成场所，通过细胞免疫反应来调节机体免疫平衡［14－20］。本次实验结果还显示儿童型蛋白质粉可以明显增强细胞免疫功能，对机体特异性免疫有较强的促进作用。本次实验结果表明:该儿童型蛋白质粉可以增强小鼠的细胞免疫功能、单核－巨噬细胞的吞噬功能以及NK细胞活性，所以具有增强免疫力的功能。本次体液免疫功能评价中仅发现中剂量组溶血空斑数增加，低、高剂量组无影响，并且各剂量组抗体积数无明显变化，故该产品不能增强小鼠的体液免疫功能。有报道显示［21］，蛋白质粉可以明显增强小鼠体液免疫功能，与本次研究结果不完全一致，可能与儿童型蛋白质粉配方具有一定的关系，有待进一步研究。

参考文献

［1］卢文婷，王安.蛋白质粉急性经口毒性及致突变作用研究［J］.实用预防医学，2011，18(2):333－335.

［2］刘志胜，李里特，辰巳英三.大豆蛋白营养品质和生理功能研究进展［J］.中国食物与营养，1999，19(4):21－23.

［3］臧学丽，刘娟.大豆分离蛋白改性技术的研究进展［J］.吉林农业，2018，30(1):62.

［4］尹秀莲，赵瑜辉，管明，等.大豆分离蛋白提取及其凝胶制备影响因素研究［J］.食品与发酵科技，2017，45(6):62－66.

作者：胡雄飞 余晓巍 吴军 胡楚元 熊志军 单位：湖南省职业病防治院