黄芪多糖对活疫苗免疫的影响范文

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《畜牧与兽医杂志》2014年第六期

1材料与方法

1.1外周血淋巴细胞增殖的测定MTT法。将抗凝血用Hanks’液稀释1倍，小心加在淋巴细胞分离液上层，2000r/min离心20min，吸取中间云雾状白细胞层，用无血清RPMI1640营养液洗2遍，1500r/min离心10min。活细胞计数后，RPMI1640培养液调整细胞浓度为5×106个/mL，加入到96孔细胞培养板中，80μL/孔，每孔再加20μLConA作为刺激原，每个样品重复4孔，同时设细胞调零孔对照，然后置于37℃、5%CO2条件下培养44h，取出每孔加MTT20μL，继续培养4h后，吸去上清液，每孔加DMSO100μL，将细胞板置于微量震荡器上震荡5min使沉淀完全溶解，用酶联免疫仪上在570nm处检测其吸光度(A570值)，作为T淋巴细胞增殖的指标。

1.2血清抗体效价测定β－微量法。在96孔微量血凝板上，先每孔加50μLPBS液，然后每排的第1孔加入50μL待检血清，依次倍比稀释至第11孔，每孔加入50μL4单位新城疫抗原和50μL1%鸡红细胞悬液，震荡混匀后置37℃温箱中感作30min。同时设阳性血清、阴性血清及空白对照孔。红细胞沉淀时观察，以100%抑制凝集的血清最大稀释度为该血清的HI抗体效价。1.5数据分析数据以Means±SD表示，用SPSS软件进行Duncan''''s多重分析。

2结果

2.1淋巴细胞增殖试验在D7和D14，各APS组和专用稀释液组的A570值显著高于对照组，0.5%APS组显著高于0.25%APS组和专用稀释液组(P＜0.05);在D21，各APS组和专用稀释液组的A570值显著高于对照组，0.5%APS组显著高于其他APS组和专用稀释液组(P＜0.05)。见表1。

2.2血清抗体的变化在D7、D14和D21，0.5%APS组的血清特异性抗体显著高于0.25%APS组和专用稀释液组(P＜0.05)，0.5%APS组与1%APS组的血清特异性抗体差异不显著(P＞0.05)。见表2。

2.3血清IL－2的变化在D7和D21，0.5%APS组的血清IL－2含量显著高于0.25%APS组和专用稀释液组(P＜0.05)，0.5%APS组与1%APS组含量差异不显著(P＞•102•AnimalHusbandry＆VeterinaryMedicine2014Vol.46No.60.05);在D14，0.5%APS组的血清IL－2含量显著高于0.25%APS组、1%APS组和专用稀释液组(P＜0.05)。见表3。

3讨论

目前市场上的疫苗稀释液产品较多，但大多数产品的主要成分仅为缓冲剂和染色指示剂，不能很好地保护疫苗中的抗原活性，使畜禽在免疫接种过程中抗原活性损失过快，甚至导致免疫失败。本研究采用黄芪多糖作为新城疫疫苗稀释剂取得了较好的免疫效果。抗感染免疫是动物机体抵抗病原体感染的能力，特异性免疫(疫苗接种)在消除病原体作用中占重要的地位。特异性免疫包括体液免疫和细胞免疫，其中体液免疫的抗感染作用是通过抗体来实现的，抗体在体内可发挥中和作用、对病原微生物生长的抑制作用、抑制病原体黏附细胞的作用、免疫溶解作用、免疫调理作用、抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用。

淋巴细胞增殖及其分泌细胞因子含量是反映细胞免疫的指标之一。T细胞的功能与机体的抗病能力有相关性，能促进白介素和干扰素等细胞因子的生成，辅助B细胞的抗体生成;IL－2主要由TH1型细胞分泌产生，可以辅助CTL细胞表达杀伤功能。本试验结果显示，黄芪多糖疫苗稀释液组在免疫后各时间点的淋巴细胞增殖、IL－2含量均高于专用疫苗稀释液组，表明黄芪多糖有较强增强细胞免疫的作用，这与APS用于猪瘟活疫苗稀释液提高细胞免疫的研究结果是一致。也有研究证明APS对IL－2、IFN－γ和TNF－α的mRNA表达有显著增强作用，APS能促进脾淋巴细胞Th1型细胞因子mRNA表达来整体调节促进细胞免疫。

机体的免疫状态可以由体液免疫和细胞免疫的状态来反映。抗体效价的高低直接反映机体的体液免疫状态，在本试验中，0.5%APS组的血清特异性抗体显著高于0.25%APS组和专用稀释液组。施志玉等在研究黄芪多糖及其硫酸化产物对雏鸡免疫法氏囊疫苗的影响时发现，与对照组比较，黄芪多糖可以显著提高法氏囊疫苗的血清特异性抗体效价。本试验中，APS三个组的疫苗佐剂活性与其剂量存在一定的量效关系，0.5%剂量的APS疫苗稀释液的疫苗增强作用多显著高于0.25%剂量组，但1%剂量组多与0.5%剂量间差异不显著或弱低于后者，该研究结论与郑铁锁等的报道相符，中药的增强免疫作用发挥最佳的效果不是剂量越高则越好，而是在一个合适的剂量范围内。综合评价，0.5%APS作为疫苗稀释液的疫苗佐剂活性最好，但具体机理还需进一步研究。

作者：杜立中马霞刘永录张国祖单位：河南省九安牧业有限公司河南牧业经济学院药物工程系