大肠杆菌基因型检测及耐药性分析范文

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《经济动物学报》2014年第二期

1材料

1．1菌株质控菌:大肠杆菌ATCC25922，购自中国兽医药品监察所;临床菌株:来源于扎龙自然保护区。

1．2药品阿莫西林/克拉维酸(A/C)、氨苄西林(AMP)、头孢他定(CAZ)、头孢曲松(CRO)、头孢噻肟(CTX)、头孢噻吩(CEF)、环丙沙星(CIP)、氨曲南(AZT)、庆大霉素(GEN)、卡那霉素(KAN)、氟哌酸(NOR)、恩诺沙星(EN)、氧氟沙星(OFX)、四环素(TET)、多西环素(DO)、氯霉素(CMP)、复方新诺明(SXT)、多粘菌素B(POL)，均购自杭州天和微生物试剂有限公司;头孢他啶/克拉维酸(CAZ/Clav)和头孢噻肟/克拉维酸(CTX/Clav)，购自北京天坛药物生物技术开发公司。安普霉素(APR)、氟苯尼考(FFC)药敏片购自Oxid公司。

2方法

2．1药敏试验采用K－B法检测40株鹤源大肠杆菌对17种抗菌药物的耐药性。

2．2ESBLs检测以大肠杆菌ATCC25922作阴性对照。按CLSI［4］标准操作和判断。以纸片扩散法进行初筛试验。通过表型确证试验，确认为产ESBLs菌株。根据试剂盒说明提取质粒DNA，进行基因检测。

3结果

3．1ESBLs检测结果对40株鹤源大肠杆菌进行ESBLs检测，在初筛试验中，有15株大肠杆菌检测为疑似产ES-BLs菌株。经确证试验，15株疑似菌株均为产ESBLs菌株，检出率为37．5%(15/40)。

3．2ESBLs基因型的检测结果以40株临床分离的鹤源大肠杆菌的质粒DNA为模板进行SHV、CTX－M、TEM、OXA不同基因型检测，具体见图1～4。TEM基因PCR检出的阳性率为40%;CTX－M基因检出的阳性率为33．33%;SHV基因检出的阳性率3．33%;OXA基因检出的阳性率为13．33%。

3．3药敏试验结果不同药物对40株鸡大肠杆菌耐药率见图5。对β－内酰胺类药物，15株产酶菌的耐药率均比25株不产酶菌高，其中产酶菌对AMP耐药率最高为60%。40株菌对A/C、AZT和FFC高度敏感，敏感率均达100%。

4讨论

各个国家和地区ESBLs检出率明显不同。在美国，肠杆菌科细菌产ESBLs菌株的检出率平均3%左右［5］。在中国，苑丽等［6］对河南省7个地区不同鸡场临床分离31株受试菌中有29株菌检出相关β－内酰胺酶基因，共检出TEM型21株，CTX－M型15株。本试验对40株临床分离鹤源大肠杆菌进行ESBLs检测，共检出15株为产ESBLs菌。TEM基因、SHV基因、CTX－M基因和OXA基因均检测出。PCR结果显示，40株鹤源大肠杆菌中TEM型扩增阳性率为40%，是扎龙自然保护区主要的β－内酰胺酶型别。这与许颖等［7］检出的产ESBLs大肠杆菌主要型别为TEM型，其对青霉素类抗生素具有较强的耐药性的结果相似。TEM型ESBLs最初仅存在大肠杆菌和肺炎克雷伯中，但由于耐药质粒的水平传播及耐药基因的转座、重组作用，近年来在多种细菌中同时检出TEM型。OXA型ESBLs国内外文献报道主要存在于铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌中［8］，但是本试验在黑龙江鹤源大肠杆菌中检出OXA型基因。原因可能是耐药质粒上所携带的OXA型基因通过水平传播给大肠杆菌。

为了降低养殖场畜禽感染的发生率，应合理应用抗菌药物，能用窄谱抗菌药物控制的感染尽量不用广谱抗菌药物，以减少耐药菌株和二重感染的发生。同时应加强对养殖场和自然保护区畜禽感染菌株耐药性监测，研究耐药基因分子流行病学规律，切断耐药质粒传播途径，严格控制抗菌药物使用，降低动物感染的发生率［9-10］。鉴于耐药菌耐药基因可通过接合、转化、转导等多种方式发生转移，最终导致耐药菌株的暴发流行，对疾病的预防和治疗带来极大困难，必须高度重视对产ESBLs菌的预防和控制。

作者：牛鑫鑫刘闯唐连友刘婷婷薛原华育平单位：东北林业大学野生动物资源学院