山牡荆总黄酮提取工艺范文

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《安徽农业科学杂志》2014年第二十五期

1方法

1．1供试品溶液制备方法。准确称取山牡荆粗粉30g，于1000ml烧瓶中，按要求加入提取溶剂，加热回流提取一定时间，过滤，减压回收溶剂，干燥，称重，得山牡荆干膏。精密称取在不同提取条件下所得山牡荆干膏10mg，于10ml容量瓶中，用60%乙醇溶解，定容后备用。

1．2标准品溶液制备方法。精密称取于120℃干燥至恒重芦丁对照品10mg，于100ml容量瓶中，加60%乙醇30ml，水浴微热使溶，放冷，60%乙醇定容至100ml，制成0．100mg/ml芦丁对照品溶液。1．3．3标准曲线制备。分别精密吸取芦丁对照品溶液0、1．00、2．00、3．00、4．00、5．00ml，分别于25ml容量瓶中，各加0．75ml亚硝酸钠溶液(50mg/ml)，摇匀，静置7min;再加0．75ml硝酸铝溶液(100mg/ml)，摇匀，静置7min;再加10ml氢氧化钠溶液(40mg/ml)，60%乙醇定容，摇匀，静置8min。于510nm波长处测吸光度，以吸光度A为纵坐标、芦丁浓度C为横坐标，进行线性回归，计算回归方程。

1．4精密度试验。精密吸取2．0ml芦丁对照液于25ml容量瓶中，按“1．3．3”方法，重复操作5次。

1．5稳定性试验。取适量供试品溶液，按“1．3．3”方法，于0、2、4、6、8h分别测定吸光度。

1．6重复性试验。取同一批药材，按照“1．3．1”方法制备供试品溶液，并按“1．3．3”所述方法测定吸光度，重复5次。

1．7回收率试验。精密移取6份已知含量供试品溶液各0．5ml，均精密加入芦丁标准品溶液，按“1．3．3”方法测定其吸光度，计算山牡荆总黄酮含量。

1．8供试品总黄酮含量测定。精密移取5ml供试品溶液，于25ml容量瓶中，按“1．3．3”方法测吸光度，并代入回归方程，计算总黄酮的含量。

1．9正交试验。应用正交试验设计，选择了乙醇浓度(A)、乙醇用量(B)、提取次数(C)和提取时间(D)作为考察因素，每个因素选择了3个水平(表1)，以总黄酮含量作为考核指标，按照L9(34)正交设计方案进行试验。

2结果与分析

2．1山牡荆中总黄酮的含量测定经计算，以吸光度A为纵坐标、芦丁浓度C为横坐标的标准曲线的回归方程为A=12．473C+0．0019(r=0．9996)，表明芦丁在0．005～0．049mg/ml浓度范围与其吸光度呈良好线性关系。精密度试验结果显示，5次吸光度值的相对标准偏差(RSD)为0．53%，表明该方法有良好精密度。稳定性试验发现，5次吸光度值的RSD为1．36%，表明在8h内测定供试品基本稳定。重复性试验中5次吸光度值的RSD为1．73%;回收率试验得出平均回收率97．59%，RSD=1．55%，表明该方法有良好重现性。

2．2山牡荆总黄酮提取工艺优化

2．2．1正交试验。极差分析表明(表2)，影响山牡荆总黄酮的提取主次因素依次为B＞A＞C＞D，即乙醇用量＞乙醇浓度＞提取次数＞提取时间;方差分析(表3)显示，乙醇浓度、乙醇用量对结果影响具有极显著性的意义，提取次数对试验结果影响有显著意义。正交设计结果(表2)显示，提取工艺A1B2C3D2为最佳，但D因素影响小，且3个水平相差不大，为了节省能源，选用D1。因此，最佳工艺确定为70%乙醇12倍量加热回流提取3次，每次1h。

2．2．2工艺验证试验。采用筛选后得到的最佳工艺，即A1B2C3D1提取3次，进行了验证试验，按“1．3．3”方法测吸光度，计算总黄酮的含量。结果发现，3批山牡荆总黄酮的含量分别为40．32、39．02、39．56mg/g，相对标准偏差RSD=1．65%(n=3)，表明该工艺路线是稳定可靠的。

3结论

笔者曾进行了山牡荆药材粒度、提取时间、乙醇用量、乙醇浓度、提取次数单因素的筛选试验，结果显示山牡荆粒度对提取效率的影响不大，因此选择对提取效率有较大影响的乙醇浓度、提取时间、提取次数、乙醇用量为考察因素，进行正交试验，优选其最佳提取工艺条件。经正交设计结果分析及方差分析，发现影响山牡荆总黄酮提取主次因素依次为乙醇用量＞乙醇浓度＞提取次数＞提取时间，经综合各种因素后，选定A1B2C3D1为山牡荆总黄酮的最佳提取方案，即70%浓度12倍量乙醇经加热回流提取3次，每次1h，按此条件提取，总黄酮含量较高。并按照最佳提取条件进行了验证试验，结果表明该提取工艺方法简单、高效、稳定。

作者：代现平班翠红韩景田单位：滨州医学院药学院