四逆散对水环境的影响范文

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1模型制备

水环境小平台站立法模型大鼠的复制，采用D．Suchecki多平台法(modifiedmultipleplatformmethod，MMPM)进行改良制作［4］，其将大鼠置于睡眠剥夺平台，进行连续部分睡眠剥夺14d，具体方法如下:①适应性饲养，购进动物先进行3d适应性饲养，在中医诊断动物研究实验室进行。40W日光灯照射(8∶00－20∶00)，室内温度控制在22．0～24．0℃，保持安静，大鼠第笼5只。常规鼠类饲料喂养。②一般训练，实验前3d，让大鼠适应水槽环境，即每天18∶00将小鼠置于平台，训练平台站立，水面距平台面约1.0cm，水温保持在20～22℃，每个水槽中随机分配一组大鼠(10只)，适应2h后放回鼠笼。每天训练60min，训练3。第3天结束时，剔除不适于游泳运动的大鼠。③水环境小平台站立，从第4天开始，进行部分睡眠剥夺(18∶00－9∶00)，9∶00以后将其从平台取下放入鼠笼进行饲养，连续处理14d。环境持续光照，水槽中水每日更换，保持水温为22℃左右。

1．1模型制作方法剥夺箱(110cm×60cm×40cm)中放置15个平台(直径6．5cm，高8．0cm)，在平台周边注满水，水温保持在22℃左右，水面低于平台表面1．0cm。将10只大鼠放置平台上，大鼠在平台上可自行饮食饮水，并可在平台间活动。当大鼠进入异相睡眠时，由于全身肌肉张力降低，节律性地垂头触水或落入水中觉醒，从而使动物始终不能进入异相睡眠。

1．2给药方案自造模第1天始，每天于睡眠剥夺后9∶00，四逆散高剂量组、中剂量、低剂量组，阳性对照药均按人体用药量换算成大鼠等效剂量统一作为用药量，药物浓度按10mL•kg－1灌胃容量用蒸馏水配制，约为每250g体质量2mL，根据大鼠体质量调整用药量，连续给药14d。空白对照组、模型组均灌服等体积蒸馏水。

2检测指标及方法

2．1旷场实验木质旷场箱(100cm×100cm×40cm)为立方形，由北京中医药大学神经免疫实验室提供。内侧壁及底面为灰色，用黑线划分为25格，每格形制均为20cm×20cm。沿侧壁的格称为外周格(16个周边正方形)，其余为中央格(9个中心正方形)。正中格正上方安置摄像头。剥夺14d时，于安静、遮光条件下进行旷场实验。实验前先置大鼠于测试实验室内适应10min。操作者握住大鼠尾根部1/3处，轻轻将大鼠放入旷场箱的正中格内，开始同步录像、计时。观察5min内大鼠活动情况。取出大鼠后，用毛巾蘸清水及低浓度乙醇彻底擦拭箱底及箱壁，并等待其挥发扩散，避免留有气味而干扰下一只大鼠的观察结果。

2．2检测指标①穿格次数(次);②站立次数(次);③修饰次数(次)。

3统计学方法

采用SPSS20．0软件进行统计学处理，计量资料采用均数±标准差(x珋±s)描述，正态分布的资料采用单因素方差分析，偏态分布的资料采用秩和检验检验。P＜0．05为差异有统计学意义。

4结果

各组大鼠旷场垂直活动、水平活动见表1，表2。

5讨论

本研究从中医发病机制出发，旨在从这一特殊角度揭示和发展“中医病因病机学”与“中医环境学”，并深入探究水环境小平台站立法大鼠模型的“劳倦”特性。大鼠在新环境中情绪变化要经历紧张、兴奋、探索、适应4个步骤。因此，大鼠兴奋程度常以跨格次数来反应。大鼠在兴奋状态下多表现为活动频繁，并留下自身的生物气息。现代研究认为，旷场实验中动物总运动距离和总穿格数、央区域运动距离与中央区域停留时间都具有良好相关性，重复性好，也证明了他们间的对应关系。然而大鼠总运动距离等新指标应能更直接地反应动物的兴奋程度，防止人为对实验动物造成的“二次应激”。根据研究结果分析发现，①模型组行为学指标均高于正常组，环境对照组略高于正常组且与模型组有差异，提示本研究的造模方法已达到理想的水平，符合造模要求;②阳性对照组各数值趋近并略高于正常组，由于行为学检测的误差，尚可提示对照组为有效性对照;③四逆散高剂量、中剂量、低剂量组数值均低于模型组，而趋近于正常组，提示水环境小平台站立法大鼠模型存在着心理情绪的异常改变［7］。水环境小平台站立法模型大鼠情绪变化较为显著，与中医“倦”的概念相吻合。同时，模型大鼠也出现进食量减少，体质量减轻，神情倦怠脾虚证症状，证明了“劳倦伤脾”理论［8］。《素问•本病论》曰:“人饮食劳倦即伤脾。”现代学者认为，狭义劳倦不包括饮食失宜，仅指过劳(劳力、劳神、房劳)，作为病因常以“饮食劳倦”形式出现［9］。所以，本研究从中医学“肝主疏泄”出发，立足于“改善神经心理异常”环节，完善心理情绪异常的治疗理念与方案，利用“疏肝理脾”代表方剂四逆散。四逆散出自《伤寒论》，由柴胡、白芍、枳实、甘草四味药组成，是疏肝解郁，调和肝脾的基础方。原方组成为柴胡、枳实、芍药、炙草各等分。《神农本草经》记载:柴胡主心腹肠，胃中结气，饮食停骤，寒热邪气，推陈致新;枳实除寒热结，止利等;芍药主邪气，腹痛，除血痹，破坚积，止痛，利小便;甘草主五脏六腑寒热邪气。方中柴胡，疏泄肝气。甘草，养肝健脾，有利于柴胡升散肝气之运化。枳实，降气、行气，与柴胡配伍一升一降，共调肝脾之气机。芍药，可入血分，枳芍配伍可助血行，血行可载阳气达四末。四者相合，共奏疏肝理脾、调和气血之功。

作者：马捷 刘晶 刘燕 李峰 宋月晗 韩晨霞 郭思媛 杨茜 单位：北京中医药大学