半枝莲总黄酮的实验研究范文

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《湘潭大学自然科学学报》2014年第二期

1实验方法

1．1标准品溶液的制备取恒重的芦丁对照品10mg于100mL容量瓶中，加70％乙醇溶解并定容，摇匀，即成标准品溶液．

1．2样品溶液的制备准确称取半枝莲干粉1．000g，加到100mL蒸馏瓶中，加70％乙醇45mL，加适量活性炭，回流，冷至室温，转入50mL量瓶中，加70％乙醇定容，摇匀，即得样品溶液．

1．3最大吸收波长的选择取3支10mL容量瓶，1号为空白对照，2、3号中分别加入1mL样品液和标准品溶液：依次加0．3mL5％NaNO2，溶解，静置；分别加0．3mL10％Al（NO3）3，摇匀，静置；再分别加4mL4％NaOH，用70％乙醇定容至10mL，摇匀，静置后，在400～600nm进行波长扫描．

1．4标准曲线的绘制精密吸取芦丁标准品溶液0．00、1．00、2．00、3．00、4．00、5．00mL于6个容量瓶中：分别加入0．3mL5％NaNO2，溶解，静置；然后分别加0．3mL10％Al（NO3）3，摇匀，静置；再分别加4mL4％NaOH，用70％乙醇定容，摇匀，静置15min后，最大吸收波长处测定其吸光度．以标准品的质量浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线．

1．5总黄酮的半仿生法提取提取工艺如下：原料→烘干→粉碎→脱脂（石油醚）→减压抽滤→称量→超声波辅助半仿生法提取→减压抽滤→脱色（活性炭）→定容→显色→测定黄酮类化合物的提取率．根据仿生学原理，模仿人体胃、小肠其pH值分别为2．0、7．5．准确称取1．0000g半枝莲样品，加适量石油醚脱脂，过滤．乙醇－水作为浸取剂．第一次提取：模拟人体胃pH值，用1mol／LHCl将浸取剂调pH为2．0，在一定提取时间、温度、料液质量比、乙醇浓度、超声功率下进行总黄酮的提取，过滤，保留虑液、滤渣．第二次提取：模拟人体小肠pH值，用磷酸氢二钠－柠檬酸缓冲溶液将浸取剂调pH为7．5，在第一次提取条件下用滤渣进行第二次总黄酮提取，过滤，保留虑液．合并2次提取液，加适量活性炭脱色，过滤，浓缩，定容．

1．6总黄酮提取率的计算式中：C为提取液中黄酮类化合物的浓度（mg／mL）；m为样品质量（g）；V为提取液定容体积（mL）；n为稀释倍数．

2结果与分析

2．1最大吸收波长

按1．3．3所述制备试样方式进行试样分光光度吸收波长扫描，测其吸光度，结果如图1所示：由图1可知，芦丁标准品溶液和半枝莲样品溶液在510nm处均具有最大吸收峰值，且光谱形状极为相似，形成的络合物在常温下稳定性较好，满足分光光度测定的基本要求．因此，实验选定510nm作为测定波长．

2．2标准曲线

按1．3．4所述制备芦丁标准品溶液进行分光光度吸收波长扫描，测其吸光度，结果如图2所示．对图2芦丁标准吸光度曲线进行线性回归，得线性回归方程y＝11．133x＋0．0066，R2＝0．9993．结果表明芦丁标准品在0．01～0．05mg／mL时，质量浓度与吸光度呈良好的线性关系．

2．3提取半枝莲总黄酮的影响因素

采用超声辅助半仿生法提取半枝莲总黄酮，其影响因素有超声功率、提取时间、料液质量比、提取温度和乙醇浓度等，下面通过实验确定这些影响因素的最佳参数．

2．3．1超声功率的影响称取半枝莲药品1．0000g，分别采用不同的超声功率50W、60W、70W、80W和90W，在提取时间25min、料液质量比1∶20、温度60℃、乙醇体积分数70％条件下进行2次提取，合并2次提取液，定容后测其吸光度，计算黄酮类化合物提取率，结果如图3．由图3可知，在50～60W超声功率条件下，总黄酮提取率随功率增大而增大，60W时提取率最大，之后总黄酮提取率下降，且下降趋势较大，故最佳超声功率为60W．

2．3．2提取时间的影响称取半枝莲药品1．0000g，采用不同的超声提取时间20min、25min、30min、35min和40min，在超声功率为60W、料液质量比为1∶20、提取温度为60℃、乙醇体积分数为70％条件下进行2次提取，合并2次提取液，定容后测其吸光度，计算黄酮类化合物提取率，结果如图4所示．由图4可知，提取时间由20min延长到25min时提取率增加且幅度较大，当提取率到30min时提取率达到最大，再延长时间，提取率下降但趋势缓慢．这可能是时间越长，超声波对细胞膜破碎作用进一步加大，粘液等杂质相应增加，使溶液粘度增大，影响了有效成分的溶出，故最佳提取时间为30min．

2．3．3料液质量比的影响称取半枝莲药品1．0000g，料液质量比（样品与溶剂质量比）分别为1∶15、1∶20、1∶25、1∶30和1∶35，在超声功率为60W、提取时间为30min、提取温度为60℃、乙醇体积分数为70％条件下进行2次提取，合并2次提取液，定容后测其吸光度，计算黄酮类化合物提取率，结果如图5所示．由图5可知，随着料液质量比增大，总黄酮提取率也不断增大，当料液质量比达到1∶30时，提取率达到最高．提取过程实质就是原料中的成分溶解并扩散到溶剂主体的过程，料液质量比大，有利于溶解、扩散，但溶剂量太大，过滤和溶解回收消耗动力过大，造成浪费，故选择料液质量比选择1∶30为最佳．

2．3．4提取温度的影响称取半枝莲药品1．0000g，提取温度分别为40℃、50℃、60℃、70℃和80℃，在超声功率为60W、提取时间为30min、料液质量比为1∶30、乙醇体积分数为70％的条件下进行2次提取，合并2次提取液，定容后测其吸光度，计算黄酮类化合物提取率，结果如图6．由图6可知，总黄酮提取率在40～60℃随温度升高而增大，这可能是由于温度升高加快黄酮类化合物的溶解扩散速度，增加其在溶剂中的溶解量．继续升温总黄酮提取率有所降低，这可能是由于温度过高，乙醇挥发严重而影响提取率．温度为60℃时，黄酮类化合物提取率最高，故最佳提取温度为60℃．

2．3．5乙醇浓度的影响称取半枝莲药品1．0000g，乙醇体积分数分别为40％、50％、60％、70％和80％，在超声功率60W、提取时间30min、料液质量比1∶30、提取温度60℃的条件下进行2次提取，合并2次提取液，定容后测其吸光度，计算黄酮类化合物提取率，结果如图7．由图7可知，40％～50％乙醇浓度时总黄酮提取率逐渐增大，但趋势平缓，当浓度达到60％时总黄酮提取率最大，随着乙醇浓度继续增大，总黄酮提取率反而下降．这可能是总黄酮（包括黄酮甙和甙元）黄酮甙在水和乙醇中易溶解，但甙元水溶性较差，而60％乙醇对黄酮甙和甙元都有较好的溶解性．乙醇浓度高而总黄酮提取率下降，这可能是乙醇浓度越高挥发性越大，不能较好进行提取，考虑经济效益，故选择60％乙醇浓度为最佳提取浓度．

3结论

采用超声波辅助半仿生法对半枝莲总黄酮的提取实验条件参数进行了研究，最佳提取实验参数为：超声功率60W、提取时间为30min、料液质量比为1∶30、提取温度为60℃、乙醇浓度为60％，在此条件下半枝莲总黄酮提取率达2．14％．

作者：陈桂刘跃进肖翠单位：怀化学院化学与化学工程系湘潭大学化工学院