酶联免疫实验对食品分析的重要性范文

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1实施过程及具体实验步骤

根据笔者的教学经验，该综合性实验约需教学时数，10～12学时，具体操作过程如下。

(1)带教老师讲述ELISA的原理，应用及注意事项。

(2)通过观看酶联免疫吸附实验操作视频，了解整个实验流程及操作要点。

(3)将学生分组，每组3人，开展ELISA综合实验。

(4)实验操作结束，带教老师与学生共同讨论分析实验结果。

具体的实验操作步骤如下：以测定牛奶和鱼肉中的氯霉素为例，采用酶标抗原的直接竞争法，介绍本实验具体实验步骤。

(1)包板：将抗体用包被液稀释一定的倍数，加入96孔酶标板中，100μL/孔。37℃孵育，过夜。

(2)封板：洗板两次，加入封闭液120μL/孔，37℃孵育，3小时。

(3)样品前处理：封板时，分别对样品牛奶和鸡肉进行前处理。

(4)烘干：将封闭好的板倒掉封闭液，37℃烘干。

(5)加样：加标准品/样本50μL/孔，然后加入酶标记物50μL/孔，再振荡混匀，用封板膜盖板，37℃条件下反应30min。

(6)显色：洗板4～5次，每次浸泡30s，拍干。每孔加入底物缓冲液50μL，再加底物液50μL，轻轻振荡混匀，37℃或室温环境避光显色10min。

(7)测定：每孔加入终止液50μL，轻轻振荡匀，设定酶标仪于450nm处测定吸光度值。

(8)结果判定：以标准品百分吸光率为纵坐标，以氯霉素标准品浓度（ng/mL）的半对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中氯霉素实际浓度。

2结语

ELISA实验是一个综合性实验，涉及到有机化学，食品化学，生物化学以及免疫学等方面的相关知识。因此，学生通过本实验，可以取得以下效果：（1）巩固理论识，加强对相关知识的理解，并对该技术在食品安全检测领域的重要性有一定的认识。（2）结合视频及具体实验操作，了解整个实验的操作流程。（3）学生之间分组进行实验，加强相互协作及团队意识。在食品科学与工程、食品营养、食品质量与安全、生物工程等专业的食品分析实验课中，我们为部分同学开设了ELISA综合实验，检测过的对象包括氯霉素、盐酸克伦特罗、三聚氰胺、和孔雀石绿等。本实验内容丰富充实，实验现象生动有趣，深受学生的欢迎。

作者：沈玉栋李瑞婷单位：华南农业大学食品学院