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《食品科技杂志》2014年第八期
1方法
1.1动物分组和衰老小鼠造模将小鼠分为5组,每组16只(雌雄各半)。各组小鼠颈背部皮下注射10%D-半乳糖,1次/d,连续28d,建立亚急性衰老模型小鼠,并每天称重。
1.2动物给药各组小鼠在注射D-半乳糖7d后开始灌胃给药。按下列分组给药:NS组生理盐水、Sang组西洋参注射液(50mg/mL)、Gln组谷氨酰胺(200mg/mL)、Ⅰ组豆丹高浓度水提液(200mg/mL)、Ⅱ组豆丹低浓度水提液(100mg/mL)。自由摄食和饮水,连续灌胃21d。
1.3负重游泳实验及力竭游泳时间的测定[7]末次给药1h后,所有组均进行负重游泳运动,将小鼠放入恒温水缸中(水深>30cm)、水温(25±1)℃,当鼠头沉入水中5s不能抬起并不能完成翻正反射计时停止,为力竭游泳时间。在整个实验过程中使每只小鼠四肢不停运动,如果小鼠漂浮在水面停止活动,可用木棒在其附近轻轻搅动是指继续活动。在每只小鼠尾部系上相当于自身体重10%的铁片。
1.4爬绳耐力实验及爬绳耐力时间的测定[8]末次给药后30min后,将小鼠放在两端固定在高度1m架子的绳子中央处,使绳子中央低垂,呈V型,避免小鼠轻松爬至绳的两端。使小鼠肌肉处于静力紧张状态。将绳子中央低垂出下方放置一水温15℃、水深10cm的水盆,第3次落水时终止实验,累计记录3次小鼠因肌肉疲劳而从绳子上跌落的时间。
1.5LD和BUN含量测定[9]小鼠连续灌胃21d,末次灌胃30min后,将其置于游泳池中不负重游泳30min,水温(30±1)℃。泳后休息30min眼球取血,室温静置2h,3000r/min、10min离心取上清液,并按试剂盒说明书所述的方式测定LD和BUN含量。
1.6OD含量测定同上述过程。眼球取血后,脱颈椎死,立即取出肝脏,用生理盐水漂洗,滤纸吸干称重,用0.9%的生理盐水制备10%组织匀浆。10000r/min、10min离心取上清液,并按试剂盒说明书所述的方式测定OD含量。
2结果与分析
从实验开始至结束,各实验组与对照组体重无显著性差异(P>0.05),说明豆丹对小鼠体重无显著影响。连续灌胃生理盐水(阴性对照组)、西洋参(阳性对照组)、谷氨酰胺(阳性对照组)、豆丹高浓度水提液(200mg/mL)、豆丹低浓度水提液(100mg/mL)21d后,各实验组的小鼠负重力竭游泳时间均明显长于NS组,也明显高于Sang组和Gln组。其中Ⅰ组差异极显著(P<0.01),游泳时间最长,与NS组相比,延长率高达212.56%;Ⅱ组差异显著(P<0.05),与NS组相比,延长率高达129.15%。可见豆丹水提液能延长小鼠负重游泳时间,提高小鼠的体能。连续灌胃21d后,各实验组的小鼠力竭爬绳时间均明显长于NS组,差异显著(P<0.05)。Ⅱ组爬绳时间最长,与NS组相比,延长率达291.41%。可见豆丹水提液能延长小鼠爬绳时间,提高小鼠的耐力。实验结果显示,各实验组小鼠肝糖原含量均明显高于对照组,差异显著(P<0.05),Ⅱ组效果最佳,说明豆丹水提液可提高小鼠运动后肝糖原的含量。各实验组小鼠尿素氮的含量均低于对照组,其中Ⅰ组差异极显著(P<0.01),Ⅱ组差异显著(P<0.05),说明豆丹水提液能明显减少小鼠运动后体内尿素氮的含量。各实验组小鼠血乳酸的含量均明显低于对照组,其中Ⅰ组差异极显著(P<0.01),Ⅱ组差异显著(P<0.05),说明豆丹水提液能减少小鼠运动后体内血乳酸的含量,从而延缓疲劳。
3结论
本实验采用衰老模型,探究豆丹水提液对老年小鼠抗疲劳的影响。体力疲劳的评估方法主要有两个方面:运动耐力实验和生化指标的检测。运动耐力实验从整体上反映受试物对动物耐力的影响,是对各个系统的综合作用[10]。力竭游泳实验和爬绳实验表明,豆丹高、低浓度水提液剂量组均能延长游泳时间和爬绳时间,从而提高小鼠的运动耐力,具有显著的抗疲劳作用。生化指标如肝糖原、血乳酸、血尿素氮等的改变具有代表性,也是检测疲劳最常用的指标。在持续剧烈运动过程中,由于肌糖原的分解供能无法满足机体对于能量的需求,从而促使肝糖原分解供能。随着运动时间的进一步延长,蛋白质也参与到代谢供能过程中,蛋白质通过分解产生尿素氮,从而导致生物体内的尿素氮大量富集[11-12]。因此,在机体运动过后,血乳酸、尿素氮、肝糖原的含量以及负重游泳时间能客观系统地评价机体的抗疲劳能力的强弱,血乳酸含量越低,肝糖原含量越高,尿素氮的清除率越高,负重游泳时间越长表明抗疲劳能力越强。本实验结果显示,豆丹水提液能够降低运动后小鼠的乳酸和尿素氮的含量,提高肝糖原的储备,并有显著效果。可以从数据上证明豆丹水提液具有抗疲劳作用。抗疲劳作用的有效剂量为豆丹高浓度水提液(200mg/mL)、低浓度水提液(100mg/mL)剂量组。豆丹作为一种地方广受欢迎的食品,含有丰富的蛋白质、氨基酸、脂肪类物质,且来源广泛,天然无毒,作为昆虫源蛋白质具有巨大的开发潜力。本研究结果表明豆丹具有较好的抗疲劳作用,为开发成强身健体及抗疲劳保健食品提供依据,有良好的开发前景。
作者:徐乐孔德瑛李一婧李丽陈凤凌王晶单位:武汉大学药学院