气相色谱法测定甜蜜素的研究范文

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1试验方法

1.1气相色谱条件色谱柱：HP-5毛细管色谱柱（30m×0.25mm×0.25μm）；固定液：（5%苯基）-甲基聚硅氧烷；程序升温：柱温80℃保持3min，升温速率6℃/min，终止温度150℃保持3min；气化室温度：150℃；检测器温度：150℃；进样方式：分流进样，分流比5:1；柱流速：1.5mL/min，氢气：30mL/min；空气：300mL/min。

1.2质谱条件传输线：250℃，电子电离源温度：200℃，溶剂延迟时间：3min；扫描范围：50~600，全扫描。

1.3甜蜜素衍生物定性试验采用气相色谱和质谱2种方法定性，相互确证了甜蜜素衍生物中的目标峰和干扰峰。气相色谱定性采用对本底检测和本底加标检测，然后对比目标峰和干扰峰的保留时间以及峰面积的变化达到定性目的。质谱法定性采用ThermoPolarisQ气质联用仪离子全扫描方法定性，通过NIST（2005）谱库对质谱图进行自动检索。

1.4绘制标准曲线甜蜜素标样处理完后，立即将标准提取液进样1μL~5μL于气相色谱仪中，即甜蜜素含量分别为1μg、2μg、3μg、4μg、5μg，根据响应值绘制标准曲线。

1.5进样时间对回收率的影响对质量浓度为1mg/L标样进行分析，每隔8h进样1次，计算回收率，绘制环己醇亚硝酸酯回收率随时间变化趋势图。

2结果与分析

2.1甜蜜素衍生物定性甜蜜素在硫酸介质中、低温状态下与亚硝酸钠反应，生成环己醇，环己醇在酸性条件下又继续与亚硝酸钠反应生成环己醇亚硝酸酯。因此，我们推断甜蜜素衍生物的干扰物可能为环己醇，目标物环己醇亚硝酸酯不稳定，会随着时间的推移慢慢转化成环己醇，造成甜蜜素检测结果的不稳定和重复性较差等问题。为了确定干扰物的成分，我们首先将环己醇标样加入之前的正己烷提取物中，发现干扰物峰面积明显增加，出峰时间保持一致。正己烷提取物中加入环己醇前后对照见图1。然后用气质联用仪对干扰物定性，NIST（2005）谱库自动检索结果显示，SI值为912，RSI值为933，与环己醇匹配率为83%。

2.2标准曲线的绘制从色谱图（图1）上可以看出，甜蜜素衍生产物呈2个色谱峰，分别为目标峰和干扰峰，目标峰即环己醇亚硝酸酯。标样处理完成后，将正己烷提取产物立即用气相色谱仪分析，以目标峰峰面积计算，做出的标准曲线在1mg/L~5mg/L范围内线性关系良好，相关系数为0.9983，如图2，且回收率在90%以上。

2.3环己醇亚硝酸酯回收率随时间的变化趋势为了研究时间的变化和甜蜜素2个衍生产物之间转化的规律，每隔8h分析一次标样，浓度为1mg/L，通过目标峰的峰面积计算环己醇亚硝酸酯的回收率。环已醇亚硝酸酯回收率随时间的变化趋势见图3。结果显示，随着时间的推移，目标峰逐渐变小，干扰峰逐渐变大，环己醇亚硝酸酯的回收率越来越低。通过图3绘制的曲线可以看出，在最初的24h之内，目标物回收率相对稳定，在85%~95%之间，受干扰物的影响较小；到了24h之后，目标物就会逐渐转化成干扰物，回收率明显减少；到了72h，回收率基本为零。因此，检测食品中甜蜜素含量时，应该在样品处理完24h内完成检测，才能保证检测结果准确可靠。

3结论

国家标准方法中规定的甜蜜素的检测方法为，在硫酸介质中甜蜜素与亚硝酸钠反应，生成环己醇亚硝酸酯，通过环己醇亚硝酸酯的色谱峰对甜蜜素进行定性和定量，标准中并未提出检测时间的问题。但实际工作中，我们发现甜蜜素衍生产物在色谱图上呈现2个色谱峰，除了环己醇亚硝酸酯外还有一个干扰峰，而且环己醇亚硝酸酯会随着时间的变化逐渐减少，影响了检测结果的稳定性和准确性。本文通过研究，首先定性了甜蜜素衍生物的2个色谱峰，即目标峰为环己醇亚硝酸酯，干扰峰为环己醇，生成的环己醇亚硝酸酯会逐渐转化成环己醇。其次通过对不同时间段的目标产物回收率进行分析，表明样品处理完之后应在24h之内上机检测，才能确保检测结果的准确可靠。因此本文对国标中甜蜜素检验方法的完善和发展具有一定意义，为今后甜蜜素检验的创新奠定基础。

作者：赵小珍庞小刚张洪单位：山西省分析科学研究院