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《轻工科技杂志》2015年第五期
1实验方法
1.1样品采集与处理四种水果均用蒸馏水反复冲洗干净,取日常食用部位,捣碎,5000r/min离心15min,离心所得上清液即为所需样品。
1.2抑制超氧阴离子自由基能力测定利用黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子自由基(O2-•),当加入电子传递物质及gress氏显色剂后,反应溶液体系呈现紫红色,在550nm下测定其吸光度。当被测样本中含有O2-•抑制剂时,则比色时测定管吸光度低于对照管吸光度,而如果被测样本中含有产生O2-•物质时,则比色时测定管的吸光度值高于对照管的吸光度值,这样通过以维生素C做标准,可计算出被检测物质对O2-•的影响力。本试验以0.15mg/mL维生素C作为样品对照,以蒸馏水做空白对照,具体操作过程按照试剂盒说明进行。定义:在反应系统中,每毫升样品在37℃下反应40min所能抑制的超氧阴离子自由基相当于1mg的维生素C所能抑制的超氧阴离子自由基的变化值为一个活力单位。
2结果与分析
2.1抑制超氧阴离子自由基最佳取样质量浓度确定不同水果的最佳取样质量溶度不同,一般最佳取样质量浓度在百分抑制率45%-55%之间。由图1至图4可分别计算出四种水果抑制超氧阴离子自由基的最佳取样质量浓度为1000mg/mL、500mg/mL、300mg/mL、700mg/mL。
2.2四种水果对超氧阴离子自由基抑制率比较及活力比较由图5可知,四种水果对超氧阴离子自由基的抑制能力与其质量浓度呈正比,但是,在同一质量浓度下,抑制超氧阴离子自由基能力的顺序为柠檬>西柚>芦柑>葡萄。通过图6可以看出,四种水果中,柠檬抑制超氧阴离子自由基的能力最强,抑制能力为2642.86U/mL,而葡萄抑制超氧阴离子自由基的能力最弱,抑制能力为750U/mL,西柚和芦柑的抑制能力分别为1592.86U/mL和1193.88U/mL。
2.3四种水果间协同抑制超氧阴离子自由基比较在最佳取样质量浓度条件下,采用两两组合方式对四种水果抑制超氧阴离子自由基的协同作用进行比较。由图7中可以看出,四种水果任意两两组合后,其抑制能力均比单一存在情况下高。对于葡萄,其抑制超氧阴离子能力的顺序为葡萄-柠檬>葡萄-芦柑>葡萄-西柚>葡萄,柠檬对葡萄的正协同作用最为明显,且两两组合之间的协同增效作用显著(P<0.05)。对于西柚,其抑制超氧阴离子能力的顺序为西柚-柠檬>西柚-芦柑>西柚-葡萄>西柚,柠檬对西柚的正协同作用最高,但两两组合之间的协同增效作用不显著。对于柠檬,其抑制超氧阴离子能力的顺序为柠檬-西柚>柠檬-芦柑>柠檬-葡萄>柠檬,西柚对柠檬的正协同作用最为有效,且所有两两组合之间表现出显著的协同增效作用(P<0.05)。对于芦柑而言,其抑制超氧阴离子能力的顺序为芦柑-柠檬>芦柑-葡萄>芦柑-西柚>芦柑,柠檬对芦柑的正协同作用最为明显,两两组合间的协同增效作用同样显著(P<0.05)。在所有两两组合中,柠檬-西柚的组合抑制超氧阴离子的效果最好。
3讨论
实验结果表明,四种水果对超氧阴离子自由基均具有抑制作用,其中柠檬的抑制能力最高,其次是西柚、芦柑、葡萄。它们对O2-•的半抑制率IC50分别为1313mg/mL、596mg/mL、368mg/mL、698mg/mL。在抗氧化协同作用上,在最佳取样质量浓度条件下,采用任意两两组合后,其抑制能力均表现出正协同作用,协同增效作用可能是两种不同水果复合使用后,提高了抗氧化酶的活性,从而导致其抑制能力提高;也可能是产生藕联氧化反应,使各自的抗氧化活性物质在体系中更合理的分布,从而起到正协同作用。抗氧化协同作用是一个复杂的体系,其机理有待于后续进一步的实验研究。
4结论
(1)从实验结果来看,四种水果中柠檬对超氧阴离子自由基抑制能力最强,柠檬-西柚组合抑制超氧阴离子自由基协同效果最好,建议消费者日常可多食用。(2)四种水果均表现出一定的抑制超氧阴离子自由基的能力,因此,作为功能性食品,研究其抗氧化作用,对开发天然的抗氧化产品具有重要的指导意义.
作者:谢志新 陈琳琳 单位:泉州医学高等专科学校实验中心