PCR技术在食用油检测中的可行性范文

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1结果与分析

1．118SrDNA扩增结果本试验研究了各样品DNA真核生物内源18SrDN段的pcr扩增，结果发现:所有食用油样品的扩增均为阳性，空白对照为阴性(图1)。表明已提取到检测样品DNA，可用于PCR检测。

1．2鸡、牛肝脏DNA的梯度PCR扩增结果本试验通过梯度PCR研究了鸡、牛源性DNA扩增的最佳退火温度，结果发现:鸡源成分的扩增，53．5℃下条带模糊、杂带较多表明有一些非特异性扩增，55．2℃、56．6℃、57．5℃退火温度下条带均集中且杂带较少，都可以作为PCR扩增的退火温度(图2);牛源性成分的扩增，4个退火温度下目的条带的扩增效果都不错(图3)。故选择较高的退火温度(57℃)扩增鸡源性DNA，选择较高的退火温度(55℃)扩增牛源性DNA，以使PCR扩增的特异性更强。

1．318SrDN段的扩增结果本试验采用上述建立的PCR方法对提取的6份食用油样品的DNA进行鸡、牛源性成分检测。由图4、图5可以看出阴性对照(7号条带)未出现条带，阳性对照(8号条带)出现条带，表明PCR检测是可行的。鸡源成分PCR检测结果表明，食用油5、6的鸡源成分扩增结果为阴性，食用油1～4的扩增结果为阳性，由此说明食用油1～4含鸡源成分，而食用油5、6不含鸡源成分。牛源成分PCR检测结果表明，食用油4、5扩增结果为阴性，食用油1～3和食用油6扩增结果为阳性，由此说明食用油1～3和食用油6均含有牛源性成分，而食用油4和5不含有牛源成分。

2结论

试验在成功提取到DNA的条件下，对待测的油样首先进行真核PCR真核生物内源18SrDN段的PCR扩增，以确定已经提取到的DNA可以扩增且没有假阳性。然后分别进行鸡、牛源性成分的检测，由结果可以看出只有食用油5中同时不含有鸡、牛源性成分，而食用油1、2、3同时含有鸡、牛源性成分，食用油4含有鸡源性成分，食用油6含有牛源性成分。表明PCR技术在食用油中动物源性成分检测中的应用是可行的。

提取到DNA是用PCR方法检测油脂中动物源性成分的前提，而油脂中的DNA大部分已经破坏难以提取，Papul等认为精炼油中已没有遗传物质存在，而仅在粗制油中有DNA残留，但实验证明精炼油中遗传物质仍然存在。试验过程中由于个人操作等原因会导致提取效果不理想或者提取失败，因此在已有的方法上进行不断地探索以提高动物油脂DNA的提取率是值得再研究的课题。邵碧英等提出加入担体共沉淀方法能保证从油脂中提取到DNA。而运用不同的DNA提取技术如核酸吸附方法，也可以提供较高质量的DNA。同时对PCR产物可以进行酶切，二重PCR进行验证以确保结果的准确性。

作者：黄治国赵斌冯治平邓杰刘燕梅单位：四川理工学院酿酒生物技术及应用四川省重点实验室