普法履职报告范文

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第1篇

【摘要】 目的制备氢醌脂质体并测定含量及包封率。方法采用蒸发超声法制备氢醌脂质体，高效液相色谱（HPLC）法检测氢醌含量及包封率。结果色谱条件下氢醌与辅料、溶剂峰分离良好，氢醌在5.0～50.0 μg/ml范围内线性关系良好。3组氢醌脂质体包封率分别为83.26%，89.13%，80.75%。结论氢醌脂质体制备工艺可行，质量控制方法简单、准确。

【关键词】 氢醌； 脂质体； 高效液相色谱法

Abstract：ObjectiveTo prepare and determine the content and entrapment efficiency of Hydroquinone liposome.MethodsHydroquinone liposome was prepared by evaporating and ultrasound method， determined the concentration and the entrapment efficiency of Hydroquinone liposome by HPLC. ResultsHydroquinone had a good linear relationship in a range of 5.0 ～50.0 μg/ml. The entrapment efficiency of Hydroquinone liposome in three groups reached 83.26%， 89.13%， 80.75% respectively.ConclusionThe technology of preparing Hydroquinone liposome was feasible and the method of quality control was simple and accurate.

Key words：Hydroquinone; Liposome; HPLC

氢醌制剂临床上主要用于治疗色素性皮肤病，如黄褐斑、雀斑、黑变病、炎症后色素沉着等，是一种有效的临床药物［1，2］。国内制剂氢醌霜，化学性质不稳定，易氧化变色，限制了其应用［3］。笔者制备了氢醌脂质体制剂，以期达到促进皮肤渗透，防止氧化，减少不良反应等目的。

1 试剂与仪器

紫外可见分光光度计（美国Biogate公司）；高效液相色谱仪，色谱C18柱(4 μm， 150 mm ×3.9 mm) (日本岛津公司)；超声波分散仪(Meico Fisher Scientific公司)；冷冻真空干燥机(美国LABCONCO公司)；激光粒度分析仪(英国马尔文公司)；恒温磁力搅拌器(金坛市富华仪器有限公司)；电子天平(湖南湘仪医疗器械厂)；旋转蒸发仪（上海青浦沪西仪器厂）；循环水真空泵（上海亚荣生化仪器厂）；高速搅拌机（IKA WERKE公司）。

大豆卵磷脂(纯度>95% ，上海化学试剂公司) ，胆固醇(上海化学试剂公司) ， 氢醌对照品(甲醇精制，铈量法测得含量达99.8%) ， 氢酯原料药(沈阳市试剂五厂) ，葡聚糖凝胶G－50 (上海化学试剂公司，进口分装) ，甲醇(江苏汉邦有限责任公司，色谱纯)，曲拉通X-100（上海化学试剂公司），乙醚（上海化学试剂公司，分析纯），三蒸水（自制）。

2 方法与结果

2.1 配方设计与制备方法氢醌脂质体以磷脂和胆固醇为膜材，加入三蒸水终体积为10 ml。将氢醌原料药、磷脂、胆固醇按比例混匀，再加入适量乙醚溶液充分溶解，真空减压，去除有机溶剂，得均匀干膜。加入三蒸水，在25℃下高速搅拌，充分水化，获得粗脂质体。然后将获得的样品，转入超声波乳化器，在一定超声强度下持续超声10 min，得到粒径均匀的脂质体，充氮气，分装，真空冷冻干燥。

2.2 色谱条件与系统适应性色谱柱为C18柱，以甲醇：水( 1∶3) 为流动相，柱温为室温，检测波长为280 nm ，流速为0.8 ml/min，进样量为20 μl。采用外标法。在选定的色谱条件下，以氢醌计算理论塔板数为7 622，符合《中国药典》高效液相色谱分析方法的要求。

2.3 色谱行为取氢醌对照品溶液、空白脂质体破乳溶液（破乳采用曲拉通X-100）和氢醌脂质体各20 μl进样分析，得色谱图1～3。由图可见，氢醌的保留时间约为6.3 min，空白脂质体只在5 min以前有色谱峰，表明辅料对氢醌的测定无干扰。

图1 空白脂质体色谱图（略）

图2 氢醌对照品色谱图（略）

图3 氢醌脂质体色谱图（略）

2.4 标准曲线　取干燥至恒重的氢醌对照品50 mg ，精密称定，置50 ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。精密量取对照品溶液0.5 ，1.0 ，2.0 ，3.0 ，4.0 和5.0 ml，分别置100 ml量瓶中，各三蒸水稀释至刻度，摇匀。按上述色谱条件，进样20 μl/次，实验结果表明，当氢醌在5～50 μg/ml的浓度范围内，以对照品峰面积 (Y) 为纵坐标，对照品浓度(X) 为横坐标作图， 得一直线。回归方程为Y=2 920.6X+17.8072，r=0.992 7。

2.5 精密度测定取上述浓度为5.0，10.0，20.0，30.0，40.0，50.0 μg/ml的氢醌对照品溶液， 于1d和1周内重复进样5次，进样量为20 μl，测定日内精密度和日间精密度。日内差异RSD为0.92% (n=5)， 日间差异RSD为1.01 %(n=5)。

2.6 回收率测定按处方比例加入0.5 ml空白脂质体混悬液至1～5号100 ml棕色容量瓶中，依次准确加入氢醌对照品贮备液0.5 ，1.0 ，2.0 ，3.0 ，4.0 和5.0 ml，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀即得浓度范围为5～50 μg/ml的样品溶液，分别进样20 μl，测定峰面积，连续5次，计算回收率，结果平均回收率为97.58%(n =6) ，RSD为0.75 %。

2.7 脂质体中氢醌的含量测定精密吸取氢醌脂质体0.5 ml(相当于氢醌0.5 mg)，置于25 ml棕色容量瓶中，曲拉通X-100破乳，加入流动相稀释对刻度，摇匀，作为供试液;准确配制浓度为20.0 μg/ml的氢醌对照品溶液。取上述溶液各20 μl进行分析，记录色谱图。按外标法计算出供试品中氢醌的含量。不同批号氢醌脂质体中药物含量测定结果见表1。

表1 含量测定结果（略）

2.8 氢醌脂质体包封率的测定取氢醌脂质体100 μl于5 ml褐色容量瓶，补充甲醇至刻度，摇匀， HPLC测定药物含量，乘以稀释倍数即得全药浓度。取相应氢醌脂质体1 ml，采用葡聚糖G-50凝胶柱，以蒸馏水为洗脱液，流速1 ml/min，过滤分离氢醌脂质体及游离氢醌，收集所有氢醌脂质体准确测量其体积， HPLC测定药物含量。包封率（%）=（C脂/C总）×100%。测定3个批号脂质体的包封率分别为83.26%，89.13%，80.75%。

2.9 氢醌脂质体粒径大小测定室温下用激光粒度仪测定其平均粒径，入射角度90°，设定样品温度为25℃时进行测量，每个样品连续测量3次。测得氢醌脂质体粒径均匀，粒径为(220±35)nm。

3 讨论

自20世纪60年代脂质体作为药物载体应用以来，目前世界上已有多个脂质体制剂得到批准应用。本研究采用蒸发超声法制备的脂质体粒径均匀，分布范围窄，药物含量稳定，包封率达80%以上。由于氢醌极不稳定，所有操作最好在暗室中进行，实验中使用棕色容器，且避免高温。冻干时加用海藻糖作为保护剂。氢醌制剂含量测定采用铈量法和紫外分光光度法，但操作繁琐费时，本研究采用高效液相色谱测定法，通过提高流动相中水的比例，使保留时间延长，由于色谱柱的差异，可适当调整流动相的比例，以满足含量测定的要求。此法可用来测定本品含量，结果准确可靠，重现性好。

参考文献

［1］ 王建华，雷 帆，崔景荣. 20种中药对酪氨酸酶抑制作用的研究［J］.中国药学杂志，2000，35(4):232.

第2篇

【摘要】

目的建立高效液相色谱法测定杜仲愈伤组织和悬浮细胞中绿原酸含量。方法利用Hypersil C18-ODS柱(250 mm×4.6 mm， 5μm)色谱柱，乙腈-水-磷酸溶液(12∶87.9∶0.1)为流动相，检测波长为327 nm，流速1.0 ml/min，柱温为25℃。结果绿原酸在2.216～55.4 μg/ml范围内线性关系良好，r=0.998 1，愈伤组织和悬浮细胞中绿原酸的平均加样回收率分别为100.69%和97.62%，RSD分别为2.42%和2.71%。结论该方法快速简便，准确可靠。杜仲愈伤组织和悬浮细胞中绿原酸含量分别为1.528 mg/g和3.949 mg/g。

【关键词】 杜仲 愈伤组织 悬浮细胞 绿原酸 高效液相色谱法

Abstract：ObjectiveTo establish an HPLC method for the determination of chlorogenic acid in callus and suspension cells of Eucommia ulmoides Oliv. MethodsThe separation was performed on Hypersil C18-ODS (250mm×4.6mm，5μm) column， using acetonitrile-water-H3PO4 (12∶87.9∶0.1)as mobile phase， detected at 327 nm. The flow rate was 1.0 ml/min， the column temperature was 25 ℃.ResultsThe linear range of chlorogenic acid was 2.216～55.4 mg/ml， r=0.998 4， the average recovery of chlorogenic acid in casllus and suspension cells were 100.69% and 97.62%， RSD were 2.42% and 2.72%， respectively. ConclusionThe method is rapid， simple， accurate and stable. Chlorogenic acid content in callus and suspension cells of Eucommia ulmoides Oliv are 1.528 mg/g and 3.949mg/g respectively.

Key words：Eucommia ulmoides Oliv; Callus; Suspension cell; Chlorogenic acid; HPLC

杜仲Eucommia ulmoides Oliv为杜仲科杜仲属植物，为我国名贵中药材，具有补肝肾、强筋骨、安胎、降血压之功效［1］。近年来，我国的制药工业、保健品生产以及工业材料等方面对杜仲的需求不断增加［2］。人们为了追求短期经济效益，无计划人工砍伐开采杜仲资源，加之杜仲生长缓慢，自然环境的破坏等原因，杜仲野生资源日趋枯竭，已经不能满足人们的需要。因此除充分利用现有野生杜仲资源外，利用杜仲愈伤组织和细胞的大规模培养来获得高含量药用成分的材料提供给杜仲工业市场已成为一种发展趋势。绿原酸是杜仲中一种重要的活性成分， 具有抗菌、抗病毒、保肝、降压等药用功效，2005版《中国药典》将其量的高低定为评价杜仲药用价值的主要技术指标之一［3］。利用HPLC法测定杜仲绿原酸的研究已有大量报道［4，5］。为了配合杜仲愈伤组织和细胞培养的研究，本研究建立了测定杜仲愈伤组织和悬浮细胞中绿原酸的HPLC方法，并利用HPLC法对愈伤组织和由杜仲疏松愈伤组织建立的悬浮细胞系下培养所得的细胞中绿原酸进行了含量测定，从而为利用细胞工程方法生产绿原酸提供一定的实验依据。

1 材料与仪器

Agilent 1100高效液相色谱仪(配备四元泵，VWD检测器，真空脱气机，柱温箱)，Hpchem工作站，KQ-500DB数控超声清洗器，Sartorius万分之一电子天平，0.45μm过滤器，冷冻干燥系统。绿原酸对照品由中国药品生物制品检定所提供。杜仲愈伤组织按文献［6］方法进行诱导和继代培养，愈伤组织2周继代1次，继代3次后，将愈伤组织取出，真空冷冻干燥后供样品制备用。悬浮细胞是按考献［7］方法筛选所得疏松愈伤组织在本实验室优化所得的液体培养基下，置于摇床中进行悬浮培养所得。培养1周后，将其取出真空冷冻干燥供样品制备用。样品提取所用甲醇为分析纯，HPLC用乙腈、磷酸为色谱纯，水为三蒸水。

2 方法

2.1 色谱条件色谱柱Hypersil C18-ODS柱(250 mm×4.6 mm，5μm)，流动相为乙腈-水-磷酸溶液(12∶87.9∶0.1)；检测波长为327 nm；流速1.0 ml/min；柱温为25℃；进样量为10μl，采用面积外标法。

2.2 对照品溶液的制备精密称取绿原酸对照品2.77 mg，置50 ml容量瓶中，甲醇溶解并稀释至刻度，得含绿原酸0.0554 mg/ml的标准溶液。分别精密吸取标准溶液0.2，0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 ml，置于5 ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品储备液。

2.3 样品溶液的制备精密称取杜仲愈伤组织和悬浮细胞干粉各0.2 g于置10 ml容量瓶中，准确加入50%甲醇9 ml，置超声清洗器中超声提取60 min，取出放冷至室温，摇匀，过滤，取续滤液定容到10 ml容量瓶中，用0.45 μm微孔滤膜过滤即为样品溶液。

3 结果

3.1 绿原酸的色谱分析在“2.1”项色谱条件下，绿原酸标准品、杜仲愈伤组织及悬浮细胞溶液的色谱分析见图1~3。样品中绿原酸峰与其他非被测成分峰能够达到基线分离，可根据标准品洗脱峰所得保留时间确定样品溶液中绿原酸的峰。

图1 绿原酸标准品HPLC图谱（略）

图2 愈伤组织中绿原酸HPLC图谱（略）

图3 悬浮细胞中绿原酸HPLC图谱（略）

3.2 标准曲线的制备取按“2.2”项方法制备的储备液进行标准曲线的制备。每个对照品储备液进样10 μl，测定峰面积。以峰面积值（Y）为纵坐标，其对应进样质量浓度(X， μg/ml)为横坐标，进行回归计算，得线性方程为：Y=71.904X-40.479，r=0.998 1。表明绿原酸浓度为2.216～55.4 μg/ml范围内具有良好的线性关系。

3.3 精密度实验 精密吸取对照品溶液重复进样5次，每次10 μl ，分别测定峰面积，绿原酸峰面积的RSD(相对标准偏差)为0.8%。表明仪器精密度和进样方法良好。

3.4 重复性实验准确称取杜仲愈伤组织和悬浮细胞样品各5份，每份0.2 g，按“2.3”项下方法制备样品溶液，进样分析，测定绿原酸峰面积，外标法计算含量。杜仲愈伤组织和悬浮细胞样品中绿原酸含量的RSD分别为1.8%和2.4%。表明样品处理方法重复性好。

3.5 加样回收率实验准确称取已知绿原酸含量的愈伤组织和悬浮细胞样品各5份，每份0.2 g，分别加入适量绿原酸对照品，按“2.3项”下操作制备样品溶液，进样10 μl， 测定绿原酸含量，计算加样回收率。结果见表1和表2。

表1 愈伤组织中绿原酸加样回收实验结果（略）

表2 悬浮细胞中绿原酸加样回收实验结果（略）

3.6 样品测定结果根据上述条件对愈伤组织和绿原酸样品进行含量测定，每样品3份。结果见表3。绿原酸的含量在愈伤组织和悬浮细胞中有较大的差别。悬浮细胞中绿原酸的平均含量为愈伤组织中的2.6倍，说明在悬浮细胞中绿原酸的积累更有优势。

表3 杜仲愈伤组织和悬浮细胞绿原酸含量（略）

4 讨论

4.1 提取方法的选择目前提取杜仲中活性成分（绿原酸）主要包括超声、回流和冷浸等方法，提取相一般为水和有机溶剂［8］。本文以杜仲愈伤组织为材料对提取方法进行考察，比较了甲醇的含量及提取时间对提取效率的影响。以水、20%甲醇、50%甲醇、80%甲醇为溶剂，超声提取60 min，结果以50%甲醇为溶剂时，色谱峰分离效果最佳，而且提取完全；比较l5，30，60，90 min的超声提取效果，结果60 min时提取效率最高。

4.2 绿原酸测定方法的建立实验采用HPLC测定杜仲愈伤组织和悬浮细胞中绿原酸的含量，结果准确，精密度高，重复性好，平均加样回收率分别为100.69%和97.62%，RSD为2.42%和2.71%。说明该方法可用于杜仲愈伤组织和悬浮细胞规模生产中活性成分的定量分析。

4.3 杜仲的愈伤组织和细胞培养由于野生资源的匮乏，通过愈伤组织和细胞培养生产所需要的目标产物愈来愈引起人们的重视与关注。实验表明来源于杜仲种子诱导产生的愈伤组织和悬浮细胞都能够产生绿原酸，质量分数为1.528 mg/g和3.949 mg/g。同野生杜仲叶中报道的绿原酸相比，愈伤组织和悬浮细胞中含量还有待提高［9］。我们将进一步通过高产细胞株系的筛选和培养条件的探索与优化，使其达到或超出天然来源的含量［10，11］。利用杜仲细胞的大规模悬浮培养生产有关活性代谢产物将具有广阔的前景。

参考文献

［1］ 管淑玉， 苏薇薇. 杜仲化学成分与药理研究进展［J］. 中药材， 2003， 26(2): 124.

［2］ 程光丽. 杜仲有效成分分析及药理学研究进展［J］. 中成药， 2006， 28(5): 723.

［3］ 国家药典委员会. 中国药典，Ⅰ部［S］. 北京: 化学工业出版社， 2005: 114.

［4］ 刘圣金， 狄留庆， 康， 等. 高效液相色谱法测定杜仲中绿原酸的含量［J］. 中国中医药信息杂志， 2006， 13(1): 44.

［5］ 石少澜， 王祝举， 邵爱娟， 等. 高效液相色谱法测定杜仲皮中绿原酸的含量［J］. 中国中药杂志， 2005， 30(9): 715.

［6］ 邱晓芳， 朱 笃， 张志斌，等. 杜仲愈伤组织继代培养基抑制褐化的研究［J］. 食品科学， 2007， 28(8): 307.

［7］ 邱晓芳， 朱 笃， 张志斌， 等. 杜仲疏松愈伤组织诱导条件的优化筛选［J］. 食品科学， 2006， 27(11): 375.

［8］ 刘辉琳， 唐明林， 安莲英， 等. 杜仲药用有效成分提取方法研究［J］. 天然产物研究与开发， 2002， 12(6): 47.

［9］ 尉 芹， 景谦平， 马希汉. 杜仲叶中绿原酸的提取工艺条件研究［J］. 林产化学与工业， 2001， 21(4): 27.

第3篇

一、以法宣工作为中心，狠抓了普法依法治理工作

年初，我们针对普法依法治理工作实际，拿出了一些切实可行的办法和措施。首先，我们制定了普法依法治理工作要点。明确了今年的工作目标和作务。我们今年把迎接全市全省“五五”普法验收列为重中之重。我们为此专门制作了反映我区“五五”普法成果的专题片。我们还精心排练了一场大型的文艺演出。面对我区基层五五普法工作薄弱的实际情况，我们制定了区五五普法验收考评标准。加强了对各单位的检查考核。其次，我们建立的严密了法律宣传组织体系。区级成了领导小组，各单位层层落实了组织机构和具体工作人员，使五五普法工作层层有人抓，处处有人管。一年来，我们共组织大型宣传活动五次，开展培训讲座10多次。收到了好效果。

二、以民事调解工作为基础，确保一方平安

今年的民事调解工作中，我们加强了对基层工作的指导。年初我们举办了基层民调工作人员培训班，在培训中我们针对工作实际，拿出了一些切实可行的办法。使我区基层民调人员整体素质有了很大的提高。通过一年来的不懈努力，全年我们共调解案件264起，调解成功率在90%以上。无民转刑案件的发生。

三、以安置帮教工作为载体，竭力帮助弱势群体

我区目前共有两放人员256名，其中今年放回58名。这些人员大多数没有一技之长，流向社会，是社会的不稳定因素之一。我们针对此，联系有关部门，加强对他们进行就业技能的培训。为他们就业想尽一切办法。目前，我区两放人员安置率已达90%以上，今年两放人员安置率达70%以上。

四、以法律援助方式，增强为民服务意识