音标学习计划范文
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第1篇
【关键词】 上消化道出血; 老年人;病因
上消化道出血(upper gastrointestinal hemorrage，UGH)是指屈氏韧带以上的食管、胃、十二指肠和胃空肠吻合术后的空肠上段和胰、胆等病变引起的出血[1]，是消化内科的急症。由于老年患者特有的身体特点，老年上消化道出血的原因、临床表现及预后与青年患者有所不同。回顾性分析本院2007年1月至2009年1月共收治上消化道出血老年患者经胃镜确诊者60例，现报告如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 本组60例患者，男38例，女22例，年龄60~81岁，平均72.6岁。60例患者根据呕血、便血的临床表现，大便潜血试验阳性，全部病例均经胃镜或上消化道钡餐透视检查诊断确诊，全部符合上消化道出血诊断标准，并排除下消化道出血。
1.2 临床症状入院时有呕血、黑粪和(或)便血，大便潜血阳性，排除来自口、鼻、咽部及呼吸道出血，其中黑便34例，呕血8例，黑便+呕血13例，便血7例。估计出血量1000 m12例， 4例患者出现失血性休克。22例在24 h内就诊，其余多在3 d内就诊。
1.3 治疗方法本组主要采用内科保守治疗，患者入院后均绝对卧床休息，通过补充血容量、输全血或红细胞悬液，静脉应用质子泵抑制剂如奥美拉唑等。对于出血量大者可以使用垂体后叶素收缩内脏血管，降低门脉及侧支循环压力，如果有禁忌证可选用生长抑素类药物如醋酸身曲肽注射液(善宁)等。同时对合并慢性疾病者给予相应治疗。经内科治疗48 h后无效而且出血加重的患者可考虑进行手术治疗。
2 结果
本组老年人上消化道出血的病因为十二指肠溃疡18例，胃溃疡16例，肝硬化食管胃底静脉曲张破裂出血7例，复合溃疡6例。肿瘤7例，其他5例，1例未行胃镜检查，自动出院，未能明确诊断。老年组复合溃疡、胃溃疡、肿瘤高于非老年组(P
3 讨论
在老年人上消化道出血的病因中，仍以消化性溃疡占首位、特别是胃溃疡多见，十二指肠溃疡所占比例明显下降;而中青年组十二指肠溃疡明显多于胃溃疡，与文献报道一致[2]。老年人胃溃疡增多的原因可能与老年人胃黏膜呈退行性变，血供不足致营养不良，分泌功能低下，使胃黏膜上皮细胞修复功能受损，胃黏膜屏障功能减退;胃黏膜的营养因子如胃泌素、表皮生长因子等的减少， 胃腔内H+浓度明显增高会使其反弥散增多，胃黏膜屏障功能受损，致其防御能力减退有关[3，4]。同时，老年人动脉硬化等引起胃黏膜血流量减少，影响黏膜的再生修复亦是其原因之一。老年人常因其他疾病长期服用非甾体类药物，对胃黏膜有明显损害，非甾体类药物致胃肠出血可能与以下因素有关:① 抑制环氧化酶-1的活性，减少前列腺素的合成;②抑制血栓素A2的合成，使血小板聚集减少，诱发出血;③ 异常增多的白三烯及氧自由基对黏膜有毒性作用;④削弱胃黏膜屏障，影响上皮细胞的修复功能;所以老年人尤其是有胃肠疾病者应慎用非甾体类药物，必要时可同时服用抑酸类药或胃黏膜保护剂以进行预防，警惕出血情况的出现。
急诊胃镜对上消化道出血的意义重大，不但可确定有无活动性出血，还可对选择处理方法有指导意义[5]。急性胃黏膜病变诊断在急诊胃镜检查前非常困难，因病变浅，能在短时间内愈合，应用常规胃镜检查难以发现这种病变，急诊胃镜开展使急性胃黏膜病变诊断率显著提高。此外，急诊胃镜检查对选择处理上有指导意义，当发现出血病灶为癌肿引起者，需转外科治疗，但对急性胃黏膜病变多数用内科治疗，可镜下止血，如喷洒止血药物凝血酶等，常能很快控制出血。老年人上消化道出血，特别是合并有其他疾病或由其他原发病所致者，故治疗上应采取综合治疗措施，在病因诊断及治疗的同时，应紧急处理上消化道出血。内科治疗主要是补充血容量，控制出血和再出血，及时输血输液，以维持有效血液循环量。凡受体阻滞剂甲氰咪呱和立止血对老年上消化道出血可作为首选药物，胃镜下使用去甲肾上腺素冰盐水灌洗后局部喷洒凝血酶疗效肯定，值得在基层医院推广。
参 考 文 献
[1] 郑芝田.胃肠病学.人民卫生出版社，2006:301-307.
[2] 黎忠信，钟华志.1869例上消化道出血病因及相关因素分析.中华消化内镜杂志，2001，8(1):19.
[3] 叶任高，陆再英，谢毅，等.内科学.人民卫生出版社，2005:480.
第2篇
【关键词】新课标；对策；学习方法
新课改后初、高中课程标准对学生的要求层次不同。九年义务教育中的初中化W作为学生的启蒙学科，主要要求学生掌握简单的化学知识、生产上的某些应用，其知识层次以要求学生“知其然”为主。而高中化学是在九年义务教育的基础上实施的较高层次的基础教育，化学知识逐渐趋向系统化、理论化，要求学生对所学习的化学知识有相当一部分不但要“知其然”而且要“知其所以然”。
一、高一学生化学学习的现状
初中化学较好的高一学生也会出现这样一个问题“初中化学考90多分，为什么高中化学学习越来越吃力”。主要表现在以下方面：
1.化学概念模糊和未建立微粒观
概念教学是很多老师都会采用的教学方式，但是教学过程中很多同学都不会理解化学的概念。例如化学计量是很多同学在学习高一化学容易出现问题的地方，特别很多学生对“物质的量”理解方面存在很大的问题，把单位mol和物质的量混淆，不能理解“一定数目粒子集合体”的概念，把其处理为“一堆”，而是认为是“一个一个”。物质的量是高中化学中重要的概念，是联系宏观与微观的桥梁作用。化学计量在实验中的计算这部分，很多同学在初中化学中未形成“微粒观”，不知道物质微观下还有哪些粒子，不能准确理解氧化还原反应的实质和离子反应的实质，以至于在后面化学方程式的书写出现很大的问题。
2.学生的分析解题能力差
高一化学经常会有大量综合性的理解性的考题，不再是初中化学那种更多只要记住就会的题。例如有些的图示计算题、实验综合题中实验流程图的考查等，就需要学生不仅要有一定的审题能力，还需要综合分析能力、快速发现题眼的能力。而初中化学更侧重于知识的识记，对解题能力要求不高。由此可见，进入高一化学学习的学生还不具备这样的解题能力。
二、高一学生化学学习的现状的成因
通过分析高一学生化学学习现状，究其原因很多。比如有的是初中化学只有一年的学习时间，难度不大，没有经过系统性的学习，掌握不牢。对于一些经过系统有步骤方法的学习的学生对化学学习还是不适应。其主要原因如下：
1.学生的基础知识欠缺
初中化学课程主要安排在初三一学年，加上中考，学业紧张，所以很多老师更多的是针对考点进行讲解练习，以至于很多学生初三化学没有入门，更多的是记忆。特别是化学是在原子、分子水平上研究物质的组成、结构、性质及其应用的一门基础自然科学。更多的是微观上研究物质，这对于初中学生对事物的认识仅仅是宏观上，不能很好的从微观上进行理解性的掌握。
2.学生的自主学习能力不够
高一新生的化学知识零散，没有系统，表面化，不知道“为什么”，也缺乏学习高中化学知识应具有的学习方法与思维方式，学生抽象思维的能力较差。这就要求了学生要有课前预习，课后总结归纳知识点和规律的习惯，掌握学习方法，形成自己的学习方法，做到举一反三，触类旁通。
3.化学学习的进度安排不合理
初高中教师因为教学内容的难易和课时安排等各方面的问题，在化学教学上还是存在很大差异，而这些差异又将直接影响学生的化学学习成绩。课时少，内容多，所以教学进度快。这样很大一部分学生前面知识都没有弄清楚，再学习新内容，很容易失去学习化学的兴趣。
三、改善高一学生化学学习现状的策略
高一化学的学习对于以后化学学科的学习有很大的影响，而且高一学生化学的低效的问题应该结合其综合特征进行处理。其策略如下：
1.提高教师个人专业素养
由于某些主、客观原因，大多数学校的教师，彼此对对方教学要求了解甚少，造成初、高中教师各自为政，互不交流的尴尬局面。使得教师在教材知识结构的完整性方面先天缺失。这就需要高中化学教师对初中教材进行学习，掌握学生的学习基础，在以后的教学设计上能够有利于衔接。这样在后面的教学中可以促使学生理解化学知识、建立相关化学概念。
2.提高学生自主学习能力 增强学生解自信心
学生是学习的主体，提高学生的主动学习的能力非常重要。教师应该让学生养成课前预习和课后小结巩固的习惯，能够将零碎的、知识量多的知识进行总结。学生认为化学难学的原因很大的程度上是因为受初中化学学习方法的影响，还是以记背为主，很少去分析思考知识的实质。很多学生还未形成微粒观，不能去理解物质的量、氧化还原反应离子反应的实质。所以教师可以将微粒观设计在教学中，让学生潜移默化的加深对微粒观的理解。化学的实验是许多学生的兴趣所在，可以利用实验激发学生的兴趣。还可以在教学中穿插些化学史，激励学生去探索化学的魅力。
四、结语
在教学中，教师要注重学生的能力培养，指导他们掌握正确的学习方法，使其将初中知识更好地过渡到高中知识中，对化学知识产生浓厚的兴趣，不断地提高学习水平，并为今后的化学知识的学习奠定良好的基础。
【参考文献】
第3篇
一、中学生化学反应三重表征的困难
1不能从微观水平上理解化学反应
相关文献综述表明，很多研究者对学生是否在分子水平上理解了化学反应进行了探查。研究发现，学生即使能正确配平化学方程式，也不能在微观上理解化学反应，这可能与用数学化的方式配平化学方程式有很大关系。国外对这个问题的探查多是结合画微粒图和访谈等方法进行的。例如，盖贝尔（Gabel等设计了14个题目来考查大学生对事物微观本质的理解情况。题目用不同大小和形状的圆圈来描述分子、原子，要求学生在物质发生物理或化学变化后再画一幅新的图画。分析结果令人吃惊：第一，有50%的学生忽视了微粒守恒和微粒的排列次序；第二，尽管学过化学的学生比没学过化学的学生回答得要好，但这种差别并不显著。这表明，尽管化学课程在一定程度上涉及物质的微观本质，但通过微观本质的学习并没有使学生较好地理解化学。另外，学生的回答中普遍出现的错误有：（1当液体变成气体时，原子被画大，而不是原子间的距离变大；（2用线条表示液体的水平面，而不是用顶层的微粒来暗示表面；（3气体分子排列有序；（4在分子分解之后，仍用完整的单位来描述微粒，而不是用更小的原子等单元表示。这表明，尽管化学课程在一定程度上涉及物质的微观本质，但通过微观本质的学习学生并没有较好地理解化学。再如，亚洛克Yarroch要求成绩中等以上的高二学生配平给出的化学方程式，并根据方程式画出微观图像，以探查学生对化学方程式的理解。结果显示，60%的学生能够配平化学方程式却不能解释方程式的意义。这说明学生没有从微观水平上理解化学反应。
可以看出，学生不能像化学家那样进行微观表征，对学生而言，微观表征复杂而抽象，这可以从学生对原子结构、化学反应、溶液等特定内容存有_定的相异构想中窥见_二。在过去的三十年里，文献中关于化学相异构想的研究可谓数不胜数，其中相当部分的内容就集中在微观表征上，这就反映出学生在微观表征方面的困难。对于化学反应，学生也存在这样的困难。
(二不理解化学方程式的符号含义
化学方程式既可以表征宏观水平的物质变化，也可以表征微观水平上的粒子行为，符号表征指向的这种模糊性提供了_种思维转换的流动性，即借助于符号表征，思维可以很方便地在宏观表征和微观表征间转换，这为交流和传播解释提供了强有力的工具。符号表征在任何时刻都具有特定的含义，这在专家看来是非常明确的，但对于学生而言，怡怡是符号表征指向的模糊性增加了学生的认知负担，学生必须能利用上下文和背景知识来明确符号表征的指向。
化学方程式隐含着丰富的信息，对化学方程式的理解也包含着多重含义：明确化学式和各个数字及箭头的含义、理解化学反应过程中键的断裂和形成、考察化学变化的定量关系等。研究发现，学生对化学方程式的理解存在困难。如，桑格MJ.Sanger)让学生根据微粒图书写化学方程式，他发现44%的学生对下标和系数的理解有不同程度的混淆，有的学生将C3书写成3C,学生只知道下标表示某分子中的原子个数，却不知道下标可以表示组成物质的元素比例；约翰斯顿Johnstone等人研究发现，离子方程式中没有参与反应的离子、氧化数和离子电荷给学生造成了最大的障碍；巴克（Bark〗探查德国学生对镁条燃烧的理解，他对八、九、十年级的272名学生进行了测验，结果显示，30%的学生能正确写出反应方程式，并能正确进行微观表征，70%的学生只能记住方程式而不能正确理解其微观含义，巴克由此得出结论，单纯使用化学符号不能帮助学生理解化学反应。
三难以在不同表征水平间进行转换
化学概念在本质上是多重表征的，成功的化学学习应该建构三重表征的整体模型，在三重表征之间实现思维的自由转换。现已公认化学教学经常包含宏观表征和微观表征间的转换，用微观表征解释可观察的宏观现象，然而对学生而言，这种不同表征间的转换是困难的，这不仅因为微观世界的抽象本质，还因为对学生来说转换本身可能就是挑战。教师与学生在知识和经验背景方面存在鸿沟，教师已经能很流畅、很容易地实现不同表征间的思维转换，而学生对物质不是很熟悉，当这种转换发生时，学生可能会经历激烈的认知冲突才能实现。作为宏观水平和微观水平中介的符号水平不仅增加了学生学习的复杂性，而且由于它指向的模糊性，增加了初学者在宏观表征和微观表征间讨论的困惑。
已有大量研究发现，很多学生能正确回答谈话性的测试题目，然而进一步测试表明，他们不是真的理解了概念，很多学生能够解决计算问题，而不能解决概念性问题。例如，研究发现，学生成功配平化学方程式并不能保证他们能用图表的形式准确表征相应的化学反应。[8]我们对这一发现的解释是，能够配平化学方程式是符号水平的理解，然而画微粒图的能力是微观水平的理解，学生在联系两种表征水平方面存在困难，难以实现不同表征水平间的思维转换，因此不能成功地解决问题。再如，对于化学平衡，即使是高等化学专业的学生也存在三重表征转换的困难。研究发现，食盐溶于水，达到平衡状态即饱和时，很多学生会认为反应结束了，即将“平衡”等同于“结束”。这说明学生对平衡的动态性缺乏理解，无法建立宏观表征与微观表征的联系。还有很多学生认为，当溶液达到平衡时，化学方程式左边的物质数目就等于右边的物质数目，换句话说，学生经常将化学反应中的理解为“等于”，即如果达到化学平衡就意味着反应物浓度等于生成物浓度。这种相异构想可能缘于等号的应用，也说明学生没有将符号表征和宏观表征、微观表征建立起联系。
专家可以在三重表征之间随意转换，而且可能是自发进行的，而学生的三重表征转换就困难得多。尽管如此，由于三重表征提供了科学概念不同水平上的信息，对概念理解是极其重要的，学生应努力建构起三重表征的内在联系，增进对科学概念的理解。
二、中学生化学反应三重表征困难产生的原因
从学生自身角度来看，三重表征困难的一个原因是，学生的思维受到他们已有的宏观经验的强烈影响，从而无法理解微观表征，如，_滴水里含有大量的水分子，这些分子竟然在不断运动着，这对于初学者来说很难接受；第二个原因是，他们有限的概念性知识和贫乏的空间想象能力，导致学生经常不能将_种表征转化为另_种表征。
本文主要讨论化学反应三重表征困难产生的外部因素，这是因为外部因素可以在教学实践中进行可行性设计，对教学实践更有启发意义。
1微观世界的抽象性
微观表征关注的世界是一个不可视的世界，只能通过想象来触及。由于学生已有的知识经验有限，缺乏空间想象能力，对微观粒子的表征就很困难，很容易将宏观性质直接迁移过去，如，认为微观粒子有颜色、是连续的、有生命、不同状态下质量不同大小可变等。由于缺乏宏观经验的支持，学生的微观表征就显得异常困难。尽管存在各种模型和动画模拟等可视化教学的帮助，但大量研究显示，学生对微观世界的理解还是存有大量的相异构想，过去二十年间化学教育文献的研究热点就是对学生相异构想的探查，其中相当部分的内容集中在微观表征上，由此可见，学生微观表征的困难程度。
现代化学的重要特征之_，就是将微观粒子间的相互作用模型作为解释理论的基础，这些粒子带有科学猜想的性质。对学生来说，粒子这个词有_定的误导性，学生可能把糖和盐的细粒当作教师提到的粒子，而不是相当小空间水平内的假定粒子。这些微观水平上的粒子是分子、原子和电子等等，这些粒子存在空间如此之小以致量子效应（对可以直接观察的粒子来说是微不足道的变得非常显著，这些“量子物质”拥有属性的方式和我们熟悉的宏观粒子拥有属性的方式有很大不同，它是解释化学的微粒模型的一个有力证据。量子物质不是坚硬的难以穿透的有锋利边缘的实体，而是带有量子规则模型化了的属性的很多模糊区域。对化学反应宏观表征的解释都是借助于这些微观粒子的行为来解释的，在科学上，微粒模型具有真实的和重大的解释价值。
众所周知，这种微观表征模型的使用对许多学生来说具有很大的挑战性，他们不能完全理解量子物质显著不同于熟悉的宏观粒子属性，学生通常采用一种虚假的解释，这可能与中学生理解科学模型和科学本质的水平有限有关系，即使是大学生也可能没有形成有效思考微观世界所需的心智模型?。
(二教材编制的局限性
教材的编制和内容呈现具有1定的局限性，这严重影响了学生化学反应三重表征的建构。
首先，教材对有些知识的论述不是很明确，如，对原子的论述就是典型的例子。没有人能说明原子是什么或者原子像什么，虽然通过原子级显微镜我们看到了金色的原子1个挨着_个一但是原子级显微镜的输出结果是它自己的模型应用的结果。很多教科书回避了原子是或像什么这个尴尬问题，只给出了关于原子性质的论述，那么，学生很容易认同教材中画出的原子图像就是原子本来的样子。对化学反应过程的描述也存在类似的局限性。
其次，文本、图表或图形的使用存在问题。如，教材中有的图是这样画的：在一烧杯水中仅画了几个液态水分子，这会使得学生认为_烧杯水中只含有那么多个水分子，而这种理解在学生看来是很自然的，因为他们看到的就是这样，和宏观经验是吻合的。在印刷的纸张上不能描绘一烧杯水中大量的水分子，这是文本编制与生俱来的问题。如果文本不对此作出说明或解释，那么，学生就很容易产生相异构想。
再次，教材内容不能很好地体现微粒的立体性和化学反应的动态性。化学微粒是立体的，化学反应是动态的，但是落实到教材文本中，只能以二维的和静态的方式呈现，这是教材文本印刷难以克服的局限性。
三化学符号的复杂性
符号表征包含着大量的信息，初学者对其理解起来非常困难，对于化学反应更是如此。我们通常用化学方程式来表征_个化学反应，这个方程式里内含着大量的信息，包括_些抽象的概念，如元素、化合价、电负性、化学反应、能量等，还包括_些普适性的书写规则，如分子式的书写规则、方程式的配平规则、离子式的书写规则等。化学符号本身就是人为表征的，因此，对学生而言，它更像是_些无意义的音节，要熟记这些复杂的符号系统，的确是非常困难的。更何况，化学符号表征的还是-些学生本身就觉得学习困难的知识。
为了使符号表征有意义，教师必须花费大量时间让学生熟知符号的含义，熟练掌握化学方程式的书写规则，从一开始就注重从三重表征的角度建构符号表征的意义。符号表征的意义在于，它是一种非常有利的交流工具，_旦建构起正确的符号表征，就会便利我们快速地、有效地交流，并有助于我们在三重表征间的思维转换。
因此，在教授符号表征的时候，教师应清晰地认识到：（1和专家相比，学生的符号表征能力不如专家有效；（2使用符号表征的方式可能增加感知的复杂性和任务认知需求的复杂性；（3考虑化学符号指向对象是否是模糊的，如果真是这样，要明确符号在任1点元素、物质、分子、原子等上的含义，注意方程式中符号使用的贯性。
四化学三重表征教学的困难性
化学教育的一个难题是，宏观表征模型本质上是连续性的，而微观表征模型本质上是分离的，如，气体的流动宏观来看是连续的，而从微观本质上看气体分子的行为是分离的。建立宏观表征和微观表征的联系需要理解微观世界的粒子是极小的。对于“粒子”微粒”这样的主题词，学生早就接触过，因此，学生会借助已有的理解解释微观世界中的粒子行为。教师如果不注意联系学生的已有经验，借助于宏观表征和微观表征的联系进行教学，很容易造成学生理解上的困惑。
如，对于化学反应的判断标准是有新物质的产生，对于什么是新物质是从微观水平上进行判断的，是我们应用了微观模型的结果。而从可观测的宏观表征上来看，新物质就是明显不同于原来的物质，对于学生来讲，冰融化为水也是_种新物质，尽管在化学上它们具有相同的结构，但宏观来看，物理变化产生的新物质就像1些化学反应产生的新物质那样引人注目。很多化学方程式对于学生判断是化学变化还是物理变化是有帮助的，因为它们可以揭示物质的微观粒子的行为，但文献显示，也有很多化学方程式对于学生的判断帮助不大。如，对于碳酸钙加热生成氧化钙和二氧化碳的反应而言，很多学生不认为这是1个化学反应，因为碳酸钙没有和任何物质反应。另外，一些学生将加热看作是1种物质，认为碳酸钙和热发生了反应。这可能是曰常生活中“反应”的意思对理解化学术语的不利影响。
有研究者总结了化学教学导致三重表征的困难表现为三方面：（1化学教学中教师简单强调符号表征和问题解决而不重视宏观现象和微观表征的联系；（2化学教学中教师不能很好地结合宏观、微观和符号表征，使学生长时记忆中的信息分散零乱，不能系统全面地对化学知识进行理解；（3片面、机械地强调宏观、微观和符号三种表征，而不能够将其与学生的曰常生活联系在_起，学生无法达到深刻的理解。
五化学方程式配平的数学化
对于中学阶段化学反应的学习而言，熟练配平化学方程式是学生要达到的一个重要学习目标。为了实现这_目标，教育工作者研究了很多方法帮助学生熟练配平方程式，其中很多方法就是借助于数学或计算机程序。如，布拉克利Blakley证明了几乎每-个化学方程式都能用线性代数的Fotoan程序配平。尽管用数学的方法能正确地配平化学方程式，但正如科尔布Kib所说，反应物和产物在化学上真的是不同的物质，化学方程式不像一个数学表达式，因此，它们不能在数学的感觉上等同起来，忽略数学上和化学方程式之间的细微差别增加了概念性错误的可能性。?已有研究表明，学生即使正确地配平了化学方程式，他们也不一定理解已配平的化学方程式的含义。用数学方式配平化学方程式导致了学生对化学反应本质的忽略，从而导致了学生的很多相异构想的产生。出于对这种状况的反思，很多研究者认为，教师要帮助学生理解化学方程式的意义，让学生学会用化学的方式正确配平化学方程式。目前，国外在这方面的研究大都集中在探查学生配平化学方程式过程中出现的错误及其相关教学建议上。
国内有关配平化学方程式的教学研究主要是总结化学方程式配平的方法，或针对某类特定的化学反应方程式的配平进行具体研究，[14]目前，我国化学教学中仍然随处可见各种各样配平的口诀。可以说，我国在配平化学方程式的教学上，许多教师并不以理解化学反应为基础，而是以数学的方式配平，训练学生配平技巧的成分很大。如此导致的结果是，学生可能会用数学化的方法配平化学方程式，但不理解化学方程式所代表的含义，从而出现对化学方程式本质的理解困难。
第4篇
关键词：英语学习两极分化原因对策
义务教育英语课程标准指出：“英语课程要面向全体学生，关注语言学习者的不同特点和个体差异。”这是英语课程标准的基本理念，也是素质教育的出发点。但由于各种原因，学生进入初中后，越来越多的学生开始对英语学习不感兴趣，学习态度不端正，成绩越来越差；而另有少数学生则学习兴趣浓厚，学习轻松且成绩优良，两极分化不断加大。如何处理解决好这一问题，是学生以后能否继续学好英语的关键。
一、两极分化的形成原因
两极分化的现象在七年级的上学期就已经出现了，造成学生学习英语积极性不高，出现两极分化的主要原因大致有以下四种：
1.教材的变化
初一新教材与老教材相比跨度大，语言覆盖面广，词汇量大，练习里常出现许多生词，一些学生在小学基础不好，要想跟上就更难了。
2.学生的学习方法
（1）学习不得法。例如：学生音标不认得，念单词用汉字注音，有些学生仍然是和汉语连在一起，记生词靠死记硬背，学语法死搬硬套，练习句型生吞活剥，写句子逐词对译，始终摆不脱汉语习惯。
（2）缺乏足够的毅力、恒心。很多学生学习英语有很大的盲目性和随意性。他们学英语只是新鲜一阵，觉得这门课好像很有意思，一遇困难挫折就丧失信心和兴趣，逐渐就不学了。
3.教师的教学方法
教师授课时不重视教学内容和形式的设计，采取“满堂灌”的方法，侧重教授学生知识，忽视指导学生掌握学习策略。长期如此，学生对学习失去兴趣，在课堂上由于信心不足而不敢开口说英语，往往又被教师忽视，导致恶性循环。
二、避免两极分化的几点对策
（一）、学生方面
1.培养学习兴趣
（1）兴趣是最好的老师。缺乏兴趣，学生只能被迫去学，根本谈不上创造学习。要把学生从“要我学”转变为“我要学”就需要教师持续不断地激发和培养学生学习英语的兴趣。教师要注意教学的生动性和趣味性，使课堂教学生动活泼，让学生扮演各角色，相互对话，讲故事，表演短剧节目。教师还要善于利用实物、卡片、图表、图片、身势语言，创设生动形象化的情景；播放英语歌、做游戏、猜谜、搞竞赛等活动。通过这些活动激发学生学习热情。时间一久，这些兴趣就会转化为强大内部学习动机。使学生进行自觉、自主、有创造思维的学习。
（2）多为学生创造学习成就感。教师通过各种方式，激励学生的成就感和进取精神，因材施教，因人而异。着重引导学生积极思考，敢回答，对后进生不能回答时应耐心鼓励说“Try again”、“Don’t worry， Take it easy.”、“I think you can do it will next time.”，使不同学生都能体验成功喜悦和自身价值，对学生消极情绪，思想顾虑和精神负担要给予耐心指导帮助。
2.养成良好的学习习惯和科学的学习方法
（1）要养成预复习的习惯。在预复习的过程中，学生要敢于发现问题，并自己努力想办法解决问题。预习新知使学生获得所学知识的心理准备，而复习旧知则能加深学生对重难点的认识，对学生长期的英语学有裨益。
（2）循序渐进，一点一滴积累。在学习过程中不急躁不贪心，掌握一点是一点。
（3）多读，多听，多讲，多写，找内容有知识性，趣味性，娱乐性的英语资料。
（二）、教师方面
1.改进教学方法和手段
（1）改进备课方法。教师的备课应该在认真钻研教材的基础上从学生的实际学情出发，确定符合他们认知特点的教学目标，既包括基础知识和基本技能方面的目标，也包括培养学生综合能力的目标；准确地理解教学的重点和难点；选准课堂教学的切入点。
（2）改进课堂结构。根据教学的实际需要和学生的实际情况合理地、灵活地安排课堂教学的环节，即对各个教学环节及其课堂所用时间进行合理的调整，使课堂结构更合理、更科学。
（3）创造英语语言环境。尽量用英语组织课堂教学，课外开展“英语角”等兴趣小组，加强听、说、读、写四种技能的全面训练，让每一个学生都有充分“表现”自己的机会，从而增强学好英语的信心和勇气。
2.提高教师本身的综合素养
（1）跨文化交际知识与文化修养。教英语离不开英语文化。英语教学的一个重要目标就是培养学习者运用英语进行交际的能力，而培养这种能力，单靠语音、词汇、语法、句子是远远不够的，还要学习了解语言形式之外的更丰富的文化内容。英语教师不仅应该具备跨文化意识，并且在教学中时时向学生渗透这种意识。
（2）人格魅力与师德修养。第一、健康的身心，积极的人生态度。由于多方面因素，农村中学教师都有各种心理问题，这一方面需要全社会对教师和教育事业更多的支持和关注，另一方面也需要教师学习和锻炼，不断提高自身的心理素质和精神境界。第二、永恒的爱心。关爱每个学生是对教师的起码要求。教师对学生应有“赏识教育”和“爱心教育”。第三、开放的心态与创新的意识。知识和信息时代要求教师不断更新自己的知识结构。
总之，在英语教学中避免两极分化的这项工作是一项艰巨而长期的系统工程。教师应该采取一些行之有效的措施，激发学困生的学习兴趣，增强其学习信心，使其成绩稳步上升，并最终达到消除两极分化的目的。
参考文献
第5篇
一、探究性学习中学生受挫原因
学生在探究性学习受挫原因主要包括学生心理因素、教师教学方式方法、学生已具备的知识和能力、学生探究学习外部因素中的一个或几个方面。
（一）学生因心理因素引起的受挫
1.学生对探究性学习心态的变化。学生刚开始接触探究性学习，对探究学习感到很新鲜，所以往往产生浓厚的兴趣，但随着时间的推移，探究式学习中问题越来越多，也越来越复杂，学生们的兴趣随之淡化，直至没有什么兴趣，有的甚至厌烦或害怕进行探究学习。
2.学生缺少信心、恒心和毅力。在探究学习中，有些学生与其他学生相比，常常表现为很失落，自以为不是学习的料子，与别人相比，感觉永远是弱者，因而参与探究学习时，缩手缩脚，失去了学习的信心，恒心和毅力，常常会被问题吓倒。
（二）因教师教学的方式方法不恰当引起的受挫
1.教师设计探究问题过难。教师在教学时没有全面了解学生的实际水平与能力，对学生探究学习所提的问题过难，学生因不能实现预期目标而受挫。
2.教师给学生探究学习的时间过少。在小组探究学习过程中，教师没有兼顾到每个学生学习情况和能力，仅以部分“优生”的行为作为学习节奏的标尺而进行学习进程，导致部分学生没有收获而不再愿意主动参与小组探究学习。
3.教师行为的影响。教师没有调控好探究学习的氛围，或者没有充分发挥教学机智来调动学生，使少部分学生受挫。
（三）学生已具备的知识和能力的差异引起的受挫
在探究学习过程中，由于学生个体所具有的知识、能力不同，对问题的认识、理解也就不同，使思维在某一个环节遇阻而受挫。例如：某一简单问题，对大部分学生而言可能是已学知识，而对于一小部分学生则可能是新内容。面对类似的学习内容，这一小部分学生在探究学习中，常常会因在某个环节有障碍，而影响探究学习。另外学生的动手能力、语言表达能力等方面存在较大差异。处于弱势的学生不会提出问题，不会设计实验，不会分析实验现象，不能得出正确的结论等，因而在行为表现和行为结果等方面与他人形成了较大的反差，日益产生自卑感而受挫。
（四）学生因探究学习外部因素的影响引起的受挫
探究学习的某些外部因素，也易使学生的积极性受影响，如探究实验中必需的用品缺少，探究学习时间安排不合理，探究活动人员分组不合理，学生个体所引发的不利因素，学生畏惧实验的烦琐或困难，有的探究学习耗时过长，花费精力过多等等，这些也都会挫伤学生的积极性。
二、探究性学习中受挫原因的应对策略
探究性学习中受挫原因的应对策略主要包括：注意培养学生探究兴趣、科学探究循序渐进、以优带差共同提高、巧设情境激发探究等；
（一）注意培养学生探究兴趣
教师在教学过程中应不断培养学生的探究兴趣，增设激励性的探究活动，不断满足学生的成功心理期待，让学生获得探究兴趣。化学与生活实际关系密切，教师还要善于将探究问题与学生喜闻乐见的生活现象联系起来，学生对这样的探究活动必然想探究、爱探究。例如在混合物的分离方法的教学中，可以把探究活动从课堂走向生活，可以让学生调查身边分离混合物的方法，并利用家中的现有的条件尝试身边混合物的分离等等，通过这些走出课堂的探究活动的开展，学生会觉得化学鲜活、实用。
（二）科学探究循序渐进
学生学习了探究问题的一般步骤和方法，并不代表已经会探究，仍然需要一定时间的训练，需要经过量的积累。例如新课标教材必修1第三章第二节“几种重要的金属化合物”这节课，教师可设置如下的探究问题——设计一个实验探究明矾溶液中含有的离子。这个问题探究的知识来源于焰色反应，Al3+和SO■■的检验，根据探究过程中的各个要素进行探究学习，在探究之后再让学生谈感受，讲收获，学生就会恍然大悟，并能从中享受学习成功的喜悦，由此也就能形成积极向上的心态。
（三）以优带差共同提高
教师在教学中要全面了解学生，在分组安排上要科学搭配，每组都有相对差、中，好的学生，组里的每个成员都有分工，无论课内课外他们都互相帮助，合作学习，以优带差，达到“1+1>2”的目的。探究学习时，要让每个学生带着明确的目的和任务，都能按要求进入探究学习，都能通过探究学有所获。
第6篇
【关键词】 5氮2脱氧胞苷；xaf1基因；BGC823肿瘤细胞株；甲基化；细胞增殖；细胞凋亡
【Abstract】 AIM: To observe the effects of the demethylating agent， 5Aza2′deoxyctidine (5AzaCdR)， on the proliferation， cell cycle， apoptosis and xaf1 mRNA expression of stomach cancer BGC823 cells. METHODS: The proliferation of BGC823 cells treated by different concentrations of 5AzaCdR was detected by MTT assay. Assessment of cell cycle and apoptosis were performed by flow cytometry (FCM); the change of xaf1 mRNA expression was semiquantified by RTPCR before and after 5AzaCdR treatment. RESULTS: The growth inhibitory effects on BGC823 cells were observed in a dosedependent manner after exposure to 5AzaCdR at different concentrations (1×103， 5×103， 10×103 nmol/L) for different time. FCM analysis showed that the apoptosis rates in BGC823 cells ［(4.53±0.21)%， (8.11±1.01)%， (11.56±0.86)%］ increased significantly after exposure to 5AzaCdR for 72 h as compared with the control group ［(0.51±0.01)%， P
【Keywords】 5AzaCdR；xaf1；BGC823；methylation；proliferation；apoptosis
0 引言
凋亡抑制蛋白因子家族(IAP)的成员在结构上具有1至3个高度保守的杆状病毒凋亡抑制因子重复序列(BIR)结构域［1］，在肿瘤的增殖异常及对抗肿瘤药物耐受形成中发挥了重要作用. X染色体相关凋亡抑制蛋白(XIAP)是IAP中抑制Caspase活性最强的成员. XIAP相关因子1(XAF1)是一个新近发现可以拮抗XIAP抗凋亡作用的蛋白，它可以逆转XIAP对细胞的保护. XAF1在多种肿瘤细胞和组织中存在低表达或表达缺失，XAF1的基因沉默与其启动子高甲基化明显相关［2］. 我们采用5AzaCdR对胃癌细胞株进行处理， 检测xaf1基因表达，并分析肿瘤细胞生物学行为变化，以期进一步探讨胃癌的发生机制及治疗的新方法.
1 材料和方法
1.1 材料 胃癌BGC823细胞株（兰州大学病理解剖学教研室）；RPMI1640培养液（美国Gibco公司）；胎牛血清（兰州民海生物技术有限公司）；5AzaCdR（美国Sigma公司）；配制5AzaCdR为1 mol/L的母液，-20℃保存，使用时用RPMI1640稀释为工作浓度. Tap酶（上海生工生物工程技术有限公司）；酶联免疫检测仪(BioTek公司)；Trizol(Invitrogen公司)；UV3000紫外分光光度仪（上海美谱达公司）；流式细胞仪(Beckman Coulter公司).
1.2 方法
1.2.1 细胞培养 细胞贴壁生长于RPMI1640培养液中，内含100 mL/L胎牛血清、1×105/L青霉素、100 mg／L链霉素和2 mmol/L L谷氨酰胺，置于37℃ 50 mL/L CO2的饱和湿度箱中培养，每3～4 d消化传代1次. 传代时，常规消化BGC823细胞，置于75 mm培养瓶中，培养24 h后分别用含1×103，5×103，10×103 nmol/L 5AzaCdR的完全培养液连续培养24，48和72 h后弃去药液，用完全培养液继续培养24 h后进行实验. 以同体积磷酸盐缓冲液PBS(pH 7.4)处理的细胞作为对照组. 培养过程中使用相差显微镜观察细胞形态的变化.
1.2.2 MTT法绘制细胞生长曲线 取对数生长期细胞，常规消化后按每孔2×103个(100 μL)接种于6块96孔培养板中，过夜贴壁后弃完全培养液，分别加入含1×103，5×103，10×103 nmol/L 5AzaCdR药液的完全培养液，每孔100 μL，每组设3个复孔；对照组加入等量PBS. 每日取出1板加入5 g/L MTT液10 μL，37℃孵育4 h后加DMSO 150 μL，振荡器振荡10 min充分溶解结晶，在酶联免疫检测仪测定各孔A470 nm值，求其平均值，以A470 nm值为纵坐标，时间(d)为横坐标绘制生长曲线，计算细胞增殖抑制率(cellular proliferation inhibition rate，CPIR). CPIR(％)=(1-实验组A470 nm均值／对照组A470 nm均值)×100％.
1.2.3 RTPCR检测xaf1基因mRNA表达 取对数生长期BGC823细胞，药物处理方法同1.2.1. 收集细胞，Trizol一步反向法抽提细胞总RNA，在紫外分光光度仪上测定吸光度值，鉴定RNA纯度，A260 nm／A280 nm在1.8～2.0之间. PCR引物设计及反应条件如下：xaf1：预期产物片段大小为120 bp，退火温度：56℃；Sense：5′TGGGTGTAGGATTCTCCAGG3′，Antisense：5′GGTTTGCCCAAGGACTACAA3′. 内参照GAPDH:预期产物片段大小为456 bp，退火温度：52℃；Sense：5′TTCTCCCCATTCCGTCTTCC3′，Antisense：5′GTACATGGTATTCACCACCC3′，上述引物由大连宝生物有限公司提供合成. 两步法RTPCR：① 逆转录反应：20 μL反应体系含：2 μg模板RNA，0.5 g/L Oligo(dT)18，RNasefree ddH2O，5×Reaction Buffer，2×107 U/L RNase Inhibitor，10 mmol/L dNTP Mix，2×107 U/L AMuLV RT. 70℃ 5 min，37℃ 5 min，37℃ 60 min，70℃ 10 min，4℃保存. ② 聚合酶链反应：50 μL反应体系含：cDNA 1 μL，10×buffer 5 μL，25 mmol/L MgCl2 3 μL，2.5 mmol/L dNTP 5μL，Tap酶0.5 μL，上下游引物各1 μL，去离子水补至50 μL，GAPDH作内参照. PCR仪扩增条件：94℃变性4 min，按94℃ 30 s，52℃（或54℃）40 s，72℃ 45 s，进行35个循环，最后一个循环72℃延伸5 min. PCR产物经20 g/L琼脂糖凝胶电泳，凝胶图像分析系统分析，以xaf1和GAPDH吸光度比值相对定量.
1.2.4 细胞周期和凋亡率检测 取对数生长期BGC823细胞，药物处理方法同1.2.1. 收集培养细胞，PBS洗2次，调整细胞密度为1×109个／L，700 mL/L冷乙醇－20℃固定24 h，加RNaseA至终浓度1 g/L，37℃温育30 min，加碘化丙啶至终浓度50 g／L，1 h内测定. 以流式细胞仪进行细胞周期分析和凋亡率的检测.
统计学处理:实验数据以x±s表示，采用SPSS 11.5软件进行分析，不同组间率的比较采用单因素方差分析.
2 结果
2.1 5AzaCdR对细胞增殖的影响 分别用1×103，5×103，10×103 nmol/L 5AzaCdR处理6 d后，BGC823细胞的生长增殖活性均有明显抑制，3个试验组的CPIR值分别为（22.36±0.68）%，（32.12±1.27）%和（41.34±1.62）%，与对照组相比差异显著（P
bP
图1 BGC823细胞经5AzaCdR处理前后的生长曲线（略）
2.2 5AzaCdR对细胞中xaf1基因mRNA表达的影响 5AzaCdR处理前BGC823细胞系的xaf1基因mRNA不表达，在经5×103，10×103 nmol/L 5AzaCdR处理后，xaf1基因mRNA重新表达，10×103 nmol/L的5AzaCdR处理组尤为明显，在用药48，72 h后，该基因表达呈明显上升的趋势(图2，3).
2.3 5AzaCdR对细胞周期的影响 BGC823细胞经1×103，5×103，10×103 nmol/L 5AzaCdR处理72 h后，S期的细胞数量逐渐增加，G2/M期细胞数下降，凋亡率明显增加 (表1).
M：50 bp DNA Ladder maker D512A；1：对照组；2～4：5×103 nmol/L 5AzaCdR分别作用24，48和72 h；5～7：10×103 nmol/L 5AzaCdR分别作用24，48和72 h.
图2 BGC823细胞经5AzaCdR处理前后GAPDH mRNA的表达（略）
M：50 bp DNA Ladder maker D512A；1：对照组；2～4：5×103 nmol/L 5AzaCdR分别作用24，48和72 h(相对定量值分别为0.22，0.32，0.37)；5～7：10×103 nmol/L 5AzaCdR分别作用24，48和72 h(相对定量值分别为0.90，0.98，1.31).
图3 BGC823细胞经5AzaCdR处理前后xaf1 mRNA的表达（略）
表1 BGC823细胞经5AzaCdR处理72 h后细胞周期的变化（略）
aP＜0.05， bP＜0.01 vs对照.
3 讨论
DNA甲基化是由S腺苷甲硫氨酸(SAM)作为甲基供体，在细胞内甲基转移酶(DNA methyltransferase，DNMT)的催化作用下，在胞嘧啶(C)的第五位碳原子上加上甲基基团，变成5甲基胞嘧啶(5mC)的化学修饰过程［3］. 近期研究表明，多种人类肿瘤在发展过程中表现异常DNA甲基化模式，常见为甲基化酶水平提高、整个基因组范围甲基化减弱以及局部甲基化水平增高3种，以局部甲基化水平增强较多见［4］. xaf1基因定位于染色体17p13.2位点，研究表明，xaf1基因在多种肿瘤细胞株以及肝癌［5］、结肠癌［6］、黑色素细胞瘤［7］组织中表达降低，存在转录抑制现象，现已证明xaf1基因表达沉默与5′区域CpG岛异常高甲基化相关，转录过程中调控区域的CpG岛高甲基化导致xaf1基因表遗传修饰而失活. 我们采用不同浓度(5×103，10×103 nmol/L)的特异性DNMT抑制剂5AzaCdR，对体外培养的胃癌BGC823细胞进行干预，RTPCR结果显示在5AzaCdR作用前，xaf1 mRNA不表达，而在5AzaCdR作用后，xaf1 mRNA又重新表达，表达强度呈时间和剂量依赖关系，表明DNA甲基化与基因遗传学改变不同，基因的缺失、突变等遗传学改变是不可逆的，而甲基化的DNA核苷酸序列未发生改变，仅通过个别碱基的修饰来影响基因转录，因而是可逆的［8］. 因此我们通过5AzaCdR人为的干预拮抗表遗传学改变，诱导因表遗传学改变而失活的xaf1基因表达，为去甲基化治疗肿瘤提供了理论基础.
凋亡在细胞增殖、肿瘤形成和发展中也起调控作用［9］. 我们应用不同浓度(1×103，5×103，10×103 nmol/L)5AzaCdR诱导胃癌BGC823细胞后，MTT结果显示：细胞增殖受到明显抑制；流式细胞仪细胞周期分析可见S期的细胞数逐渐增加，G2/M期细胞数下降，同时细胞凋亡率明显增加呈时间和浓度依赖关系. 这一结果显示去甲基化后能使细胞阻滞于S期，而使得进入G2/M期的细胞减少，由此推断5AzaCdR的去甲基化作用可通过影响细胞周期而抑制胃癌细胞的增殖；同时xaf1基因去甲基化后重新表达，它可直接结合并抑制XIAP对caspase活性的抑制作用从而发挥诱导凋亡作用［2］，xaf1也是一种新的干扰素(IFN)诱导基因，其介导了IFN诱导凋亡的作用，并显著增强了肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导肿瘤细胞凋亡的作用［10］.
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第7篇
【关键词】 银屑病 Toll样受体2 抗链球菌溶血素 白细胞介素8
［ABSTRACT］ObjectiveTo investigate the expression of tolllike receptor 2 (TLR2) mRNA in monocytes of psoriatic patients’ blood and the serum levels of interleukin8 (IL8) and antistreptolysin O (ASO)， and to explore their relevance to pathogenesis of psoriasis.MethodsExpression of TLR2 mRNA were detected by reverse transcription polymerase chain reaction (RTPCR) method; serum levels of ASO and IL8 were detected by latex agglutination assay and enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) respectively. ResultsExpression of TLR2 mRNA of the patients was higher than that of the controls (t=5.541，P＜0.01). There was no significant difference in the expression of TLR2 mRNA between guttate and plaque psoriatic patients (t=0.318，P＞0.05). The positive rate of ASO in the patients was higher than that of the controls (χ2=8.604，P＜0.01); and the ASO positive rate in guttate patients was higher than that in plaque psoriatic patients (χ2=9.780，P＜0.01). Level of IL8 in psoriatic patients was higher than that controls (t=28.463，P＜0.01); there was no significant difference between guttate and plaque psoriatic patients (t=0.660，P＞0.05). The expression of TLR2 mRNA in psoriatic patients with positive ASO was higher than that in patients with negetive ASO (t=2.407，P＜0.05); the expressions of TLR2 mRNA and IL8 in psoriatic patients had a positive correlation (r=0.637， P＜0.01). ConclusionTLR2 may be involved in the occurence and development of psoriasis by recognizing the invading streptosis and the following generation of cytokines.
［KEY WORDS］psoriasis; tolllike receptor 2; antistreptolysin; interleukin8
银屑病是一种常见的慢性炎症性皮肤病，与遗传和环境因素有关，其病因和发病机制尚未完全明确，目前多认为是一种T细胞介导的免疫失衡性疾病。有研究表明，细菌、真菌、病毒等微生物感染与银屑病的发生和发展有密切关系，并认为银屑病是一种皮肤抵抗病原微生物的防御性表现［1］。近年来，Toll样受体(TLR)在感染性疾病及银屑病中的作用引起国内外有关专家的广泛关注［2，3］；已有研究表明，IL8可促进银屑病的炎症浸润，介导皮损的发生和发展［4］。银屑病病人TLR2基因表达国外多集中于对角质形成细胞（KC）的研究，尚未见银屑病病人外周血单个核细胞TLR2基因表达，以及关于感染与TLR2基因表达及IL8水平关系的相关报道。本文采用逆转录聚合酶链反应（RTPCR）方法检测银屑病病人外周血单个核细胞TLR2基因表达水平，并分别采用胶乳凝集法和酶联免疫吸附（ELISA）法检测血清抗链球菌溶血素“O”（ASO）和白细胞介素8（IL8）水平，探讨其与银屑病发病的关系，从而为阐明感染诱发或加重银屑病提供分子水平的证据。
1 资料和方法
1.1 一般资料
银屑病病人（银屑病组）均为我院门诊皮肤科病人，具有典型皮损，临床诊断明确。其中，点滴型银屑病病人30例，男16例，女14例；年龄17～60岁，平均33.13岁；病程1周～1.5月；发病前1周～1月有发热、咽喉肿痛或其他上呼吸道感染症状。斑块型银屑病病人20例，男9例，女11例；年龄18～63岁，平均34.5岁；病程3月～10年；所有病人观察前1月未接受系统治疗，且不伴有其他急慢性疾病。对照组30例，为来我院体检的健康人，男女各15例；年龄19～64岁，平均36.24岁；近1月内均无发热、咽喉肿痛等明显上呼吸道感染症状，且不伴有其他急慢性疾病。
1.2 标本收集
常规消毒皮肤后，抽取外周静脉血5 mL，其中2 mL枸橼酸钠抗凝，用于TLR2 mRNA的检测；其余3 mL置试管中，待血块收缩后以2 500 r/min离心分离血清，分装后置-20 ℃冰箱保存，分别用于ASO、IL8水平检测。
1.3 TLR2 mRNA表达检测
以小量血液总RNA抽提试剂盒（上海华舜生物工程有限公司）提取外周血中总RNA，紫外分光光度计（DU640，美国Beckman公司）测定其纯度和含量，取RNA样本2 μg采用一步法RTPCR检测TLR2 mRNA表达，以β肌动蛋白（βactin）为内参照。引物（上海生工生物工程技术服务公司合成）序列为：TLR2正义：3′GCCAAAGTCTTGATTGATTGG5′，反义：3′TTGAAGTTCTCCAGCTCCTG5′，产物长度为347 bp；βactin正义：3′ACGTCTGCTGGAAGGTGGAC5′，反义：3′GGTACCACCATGTACCCAGG5′，产物长度为168 bp。
1.4 扩增产物检测
PCR扩增完毕后，每个反应体系取产物2 μL，于20 g/L琼脂糖凝胶中进行电泳，在紫外线透射凝胶成像仪（VilberLourmat，France）中分析电泳带的灰度值，以TLR2/βactin记录结果，作为TLR2 mRNA的相对表达水平。
1.5 ASO检测
采用胶乳凝集法（试剂为北京利德曼生化有限公司生产的ASO胶乳试剂），以ASO＞2×105 kU/L为阳性。
1.6 血清IL8水平测定
采用双抗体夹心ELISA法（试剂盒为Biosource ELISA kit，北京中昊时代生物技术分装）。具体操作严格按试剂盒说明书进行，即刻测量标本在492 nm波长处吸光度值，并根据标准曲线查出其浓度。
2 结
果
银屑病组TLR2 mRNA的表达水平显著高于正常对照组，差异有统计学意义（t＝5.541，P＜0.01）；点滴型组与斑块型组比较差异无显著性（t＝0.318，P＞0.05）。银屑病组ASO阳性率明显高于正常对照组，差异有显著性（χ2=8.604，P＜0.01）；点滴型组明显高于斑块型组，差异亦有显著性（χ2=9.780，P＜0.01）。银屑病组IL8水平显著高于正常对照组，差异有显著性（t＝28.463，P＜0.01）；点滴型组与斑块型组相比差异无显著意义（t＝0.660，P＞0.05）。点滴型银屑病病人ASO阳性者TLR2 mRNA表达水平（1.020±0.152）明显高于ASO阴性者（0.871±0.186），差异有显著意义（t＝2.407，P＜0.05）；银屑病病人外周血单个核细胞TLR2 mRNA表达与血清IL8水平呈正相关（r=0.637，P＜0.01）。见表1。表1 各组TLR2 mRNA表达及ASO、IL8检测结果比较
3 讨
论
3.1 TLR2与银屑病的关系
TLR是一新的蛋白家族，是机体通过感知病原微生物直接做出防御反应的天然免疫受体，可启动天然免疫反应和影响后继的获得性免疫反应［2］，成为天然免疫和获得性免疫之间的桥梁。TLR中与银屑病关系密切的主要是TLR2。以往对TLR2与银屑病关系的研究，主要来自对皮肤KC的观察。
BAKER等［3］采用免疫染色法研究显示，TLR2在正常皮肤表皮基底细胞高度表达，而在银屑病病人皮损处表皮基底细胞中度表达，在表皮上部KC高度表达。已有研究表明，银屑病皮损中细菌、真菌等的定植明显高于正常皮肤，因此，TLR2在表皮上层表达上调可能是角蛋白对病原微生物存在的反应。
已有研究表明，银屑病病人皮损中存在TLR2基因表达上调，但尚未见血液中单个核细胞TLR2基因表达与银屑病关系的相关报道。本实验采用高敏感性的RTPCR方法对银屑病病人外周血单个核细胞TLR2 mRNA表达进行研究，结果显示，银屑病组TLR2 mRNA表达显著高于正常对照组，差异有显著性，提示银屑病的发生、发展过程中也存在外周血单个核细胞TLR2基因表达上调。
3.2 链球菌感染与银屑病的关系
链球菌感染人体后，体内可产生抗ASO抗体。本研究结果显示，银屑病组ASO阳性率明显高于正常对照组，差异有显著性，提示寻常型银屑病的发生或发展与链球菌感染有关；点滴型病人ASO阳性率亦高于斑块型病人，两组之间有显著性差异；点滴型病人ASO阳性者TLR2 mRNA表达水平高于ASO阴性者，提示链球菌感染可能通过诱导TLR2基因表达上调，活化TLR信号转导通路，从而介导银屑病皮损的发生。
点滴型银屑病病人发病前均有不同程度的上呼吸道感染症状，提示可能存在链球菌感染；而斑块型银屑病病人无明显上呼吸道感染史，而统计学分析显示两组间TLR2 mRNA表达无显著性差异［5］。据此我们推测链球菌感染可能在点滴型银屑病的发病过程中起重要作用，而斑块型银屑病可能与其他真菌、细菌、病毒感染的关系更为密切，如马拉色菌及金黄色葡萄球菌、HIV等［6，7］，但确切原因还有待于进一步研究。
3.3 IL8与银屑病的关系
IL8是一种重要的多元性炎症细胞趋化因子，主要来源于活化的单核细胞、巨噬细胞、部分CD+4T淋巴细胞、血管内皮细胞、KC等多种细胞。有研究显示，银屑病病人皮损处KC表达IL8及其受体明显高于正常对照组，并认为这可能与银屑病病人皮损局部表现出的KC高度增殖有关［4］；也有文献认为，血清中IL8水平明显升高［8］。本文结果显示，银屑病病人血清IL8水平明显高于正常对照组，差异有显著性，这与以往研究结果一致；银屑病病人外周血单个核细胞TLR2基因表达与血清IL8水平呈正相关，提示TLR2可能介导了病原微生物诱导的细胞因子IL8分泌，继而IL8通过趋化炎症细胞至皮损局部和促使KC高度增殖而表现出银屑病特有的临床及病理症状。
综上所述，TLR2可能通过识别病原微生物感染参与银屑病皮损的发生，而IL8可能是参与银屑病皮损形成的重要细胞因子。病原微生物可引起外周血单个核细胞TLR2基因表达上调，启动天然免疫应答，进而影响后继的获得性免疫应答，参与银屑病免疫、炎症反应，最终可能导致银屑病皮损的发生和发展。对TLR2的进一步研究，将有助于阐明银屑病的病因和发病机制，从而为临床提供更加积极有效的预防及治疗措施，并将为抗TLR2单克隆抗体的制备及应用提供可能的理论依据。但有关感染与银屑病的关系及TLR在银屑病发病中的作用还有待于进一步研究。
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第8篇
[关键词] 《增补改正汉语独学》；语音；汉语教科书
[中图分类号] H1-09 [文献标识码] A [文章编号] 1002-2007（2017）03-0014-08
《汉语会话书――1910-30年代旧活字本9种》（以下简称《汉语会话书》）共收录39种1911年至1938年间朝鲜日据时期刊行的汉语会话书。目前对上述教科书汉语语音史视角的专题研究尚未开展，相关研究也比较鲜见，仅有汪维辉（2012）的初步介绍，并指出本书为研究现代汉语和汉语教育史的重要资料。此后，陈明娥（2016）对该书有所论及，陈文指出14至20世纪，韩国先后经历了李氏王朝、日帝统治时期和大韩民国三个不同的历史阶段，政治上的动荡自然会影响到汉语教育制度和政策的变化，这一r期出现的大量汉语会话教材，不同程度地反映出这些变化，成为研究古今汉语、韩语以及中朝（韩）社会文化关系变迁方面的真实可靠的文献资料，揭示了这些教材在世界汉语教育史上的地位以及汉语史研究价值，并对韩国汉语教学研究、世界汉语教育史研究、国别化汉语教材的编写等具有一定的参考和借鉴意义。我们知道，“教科书词语的选择，往往随着社会的变化而变化。”[1]（2）不同时期的汉语教科书大致能够反映出相应时期汉语的基本特点。上述朝鲜汉语会话书，较为真实地标记了当时汉语官话语音的基本面貌，与朝鲜朝汉语教科书在时间上形成了相应的体系，记录了明清官话在此时发生的质变，反映了现代汉语普通话形成前期的面貌和近代汉语语音形成转变的过渡期特征，十分值得关注。此外，会话书中出现了一些不同于当时一般汉语的特殊语音现象，这可能受到方言及近代白话的影响，也可能同时受到了作者母语的干扰，是一种杂糅的中介语音。这说明，域外学者编写的汉语教科书的语言可能会带有中介语性质，是需要重点关注的问题。需要指出的是，对《增补改正汉语独学》的专题语音研究国外仅有玉昭荣（2009）《和的中韩译音表记研究》一文有所论及，但未见原文。本文拟重点对《增补改正汉语独学》所标记汉语官话语音现象及价值进行专题讨论。
一、《增补改正汉语独学》及其作者宋宪]
《增补改正汉语独学》为宋宪]著，全一册，共110页。《汉语独学》初版于明治44年（1911），《增补改正汉语独学》出版于大正5年（1916），是《汉语会话书》中开篇第一本。在《汉语会话书》中，除《满洲语自通》（“满洲语”指山东方言）外，其余都采用官话编写，并且经过教科书作者依据汉语实际的“质正”。可以说，《增补改正汉语独学》正是在《汉语独学》基础之上“质正”而成。此外，有些教科书甚至经过中国人的审订校正，如《华语教范》的审阅者是当时北京官话汉语讲习会会长陈国栋。
朝鲜于1910年沦为日本殖民地。“日据”后的朝鲜总督府针对语言文字政策先后下达了四次《朝鲜教育令》，以期压制和扼杀朝鲜的传统语言教育。《汉语独学》的第一版出版于朝鲜沦为日本殖民地的第一年，也是朝鲜总督府针对语言政策下达第一个《朝鲜教育令》时期。自古以来，朝鲜半岛一直奉中国为宗主国，有着事大慕华的传统，称呼中国语言都使用“汉语”、“华语”。本书的书名沿用了“汉语”的称呼。后期同一作者的著作――《自习完璧支那语集成》则用“支那语”替换为“汉语”，说明《汉语独学》的编撰受到了日本语言文字政策的影响相对较小。
对于《增补改正汉语独学》的作者宋宪]，目前所见文献并没有对其详细生卒年及生平的记录。根据《初等自解日语文典》（1909）也仅能推测出他是生活在20世纪初期的朝鲜人。[2]（5）除《增补改正汉语独学》外，宋宪]还著有《日韩言文字通》（1905）、《日语文典》（1909）等等，以及一些小说和翻译书，可以说，他是一位对汉语研究十分深入，并精通日语和德语的翻译专家。《增补改正汉语独学》凡例载：
凡例一、本书? 支那语学? 独习? ? ?为? ? 编成?。 二、支那语? 音 ? 汉字 右边? 朝鲜文?? 悬付? ? 自习? 便宜? 与? ? 下? 朝鲜语? 译? ? 意味? 如何? ? 详释?。三、支那语? 发音? 上声，去声，上平，下平? 四声? 有? ? 朝鲜文??? 完全? 区别? 难? ?? 其近似? 音?? 识别? ??? 览者? 极? 注意? 可?。四、本书 六十课 ? 分排? ? 会话? 常言? 表示? ? 下附录? 索引? 添? ? 各课中难止? 字? 参考解得??。
可见，《增补改正汉语独学》 的教学对象是初级汉语自学者，以会话为主，依靠大量的会话练习来体会汉语语感和语法特点，以此来达到能用汉语交际的目的。书中的会话设计以上流社会流行的北京官话为基准，会话语句有浓重的北京官话及东北官话色彩，这说明朝鲜半岛汉语教材官话“质正”依据已经由“南京官话”完全转为“北京官话”。[3]（157～165）但值得注意的是，会话书中东北官话的因素也十分明显。
二、《增补改正汉语独学》的汉语官话声母标记
为反映本书所载语音面貌，梳理语音标记体系，本文从标音实际进行统计，分析并总结出《增补改正汉语独学》声母系统的特征。例如：
《增补改正汉语独学》中有帮母字共计241例。其中“?”共27例，占11.2%；“?”共169例，占70.1%，“?”、“ ?”是标注汉语声母发音帮母的主要规律。
例：（1）百 ??
（2）一把扇 ??
《增补改正汉语独学》中有非母字共计79例。其中“?”共3例，占3.8%；“?”共3例，“?”共3例，各占3.8%；“?”共70例，占88.6%，是标注声母非母的主要规律。
例：（3）一间房 ???
（4）您贩来的是什么货物 ???
《增补改正汉语独学》中有滂母字共计24例。其中“?”1例，占4%；“?”共23例，占96%，是标注声母滂母的主要规律。
例：（5）万瀑洞 ?
（6）你的成衣铺在那儿 ?
《增补改正汉语独》中有端母字共计338例。“?”共52例，占15%；“?”共286例， 占85%，是标注声母端母的主要规律。
例：（7）道路怎么样 ??
（8）打发底下人已经买了 ??
《增补改正汉语独学》中有明母字共计168例。其中“?”共168例，占100%，是标注声母明母的主要规律。
例：（9）到处都可以马车通行 ?
（10）名片 ?
《增补改正汉语独学》中有透母字共计121例。其中“?”共2例，占1%；“?”共1例，占0.8%；“?”共118个，占98%，是标注声母透母的主要规律。
例：（11）这一条路是上北京的大道 ??
（12）我的牙疼的厉害 ?
《增补改正汉语独学》中有泥母字共计197例。其中“?”共1例，占0.5%；“?”共196例，占99%，是标注声母泥母发音的主要规律。
例：（13）托您的福 ???
（14）你的成衣铺在那儿 ?
《增补改正汉语独学》有来母字共计202例。其中“?”共202例，占100%，是标注声母为来母字的主要规律。
例：（15）把擦脸的手巾拿来 ?
（16）贵恙怎么了 ?
《增补改正汉语独学》中有见母字共计144例。其中“?”共90例，占63%，是标注声母“g”的主要规律；“?”共51例，占35%；“?”共2例，占1%；“?”共1例，占0.6%；“?”共90例，占63%，是标注声母为见母字的主要规律。
例：（17）打算过了初三再出去 ?
（18）一只狗 ??
《增补改正汉语独学》中有溪母字共计49例。其中“?”共49例，占100%，是标注声母溪母的主要规律。
例：从苦中得甘 ?
前人开路后人行 ?
《增补改正汉语独学》中有匣母字共计156例。其中“?”共1例，占0.2%；“?”共155例，占99%，是标注声母匣母的主要规律。
例：（19）前人开路后人行 ??
（20）福不双至祸不单行 ?
《增补改正汉语独学》中有精母字共计179例。其中“?”共1例，占0.5%；“?”共4例，占2%；“?”共1例，占1%，其中“?”共173例，占96%，是标注声母精母的主要规律。
例：（21）一叶既动，百枝皆摇 ? ??
（22）万般皆由命 ??
《增补改正汉语独学》中有彻母字共计105例。其中“?”共6例，占5.7%；“?”共99例，占94%，是标注声母彻母的主要规律。
例：（23）一个月多少钱 ?
（24）青春不再来 ?
《增a改正汉语独学》中有邪母字共计149例。其中“?”共3例，占2%；“?”共2例，占1%；“?”共52例，占35%；“?”91例，占61%，是标注声母邪母的主要规律。
例：（25）英雄无用武之地 ?
（26）我很爱乡下的光景 ??
《增补改正汉语独学》中有照母字共计155例。其中“?”2例，占3%；“?”6例，占4%；“?”1例，占0.6%；“?”146例，占94%是标注声母照母的主要规律。
例：（27）我也不知道那个屯里 ?
（28）这边儿都是什么东西 ?
《增补改正汉语独学》中有穿母字共计82例。其中“?”共7例，占9%；“?”2例，占2.4%；“?”1例，占1.2%；“?”72例，占88%，是标注声母穿母字的主要规律。
例：（29）你的成衣铺在那儿 ?
（30）量一量尺寸 ??
《增补改正汉语独学》中有审母字共计445例。其中“?”3例，占0.6%；“?”120例，占27%；“?”119例，占27%；“?”203例，占46%，是标注声母审母的主要规律。
例：（31）我要做一件衣裳 ?
（32）今儿个是三月初十 ?
《增补改正汉语独学》中有精母字共计284例。其中“?”85例，占30%；“?”199例，占70%，是声母精母的主要标注规律。
例：（33）雹子 ??
（34）我在京城做买卖 ??
《增补改正汉语独学》有清母字共计43个，其中“?”共计6个，占14%。“?”共计1个，占2%。“?”共计2个，占5%。“?”共计34个，占79%，是标注声母清母的主要规律。
例：（35）我到此地不过是一个月 ??
（36）那么量一量尺寸 ?
《增补改正汉语独学》中有心母字共计38个，其中“?”共计4个，占11%；“?”共计34个，占89%，是标注声母心母的主要规律。
例：（37）三 ?
（38）琐碎 ? ?
《增补改正汉语独学》中有日母字共计125个。其中“?”共计39个，占31%；“”共计86个，占69%。是标注声母日母的主要规律。
例：（39）他是法国人不是 ???
第9篇
关键词： 新课标 高中英语教学 学困生 成因分析 转化对策
高中英语新课标下的学生是没有优秀生和后进生之分的，只是相对而言某些学生某方面具有优势或处于劣势。促进学习有困难学生（以下简称学困生）的发展不仅是贯彻高中英语新课标中关于教学要“面向全体学生，注重素质教育”的基本要求，而且是新课标能否在全体学生中得到有效实施的关键。在教育教学实践与研究中，学困生这一现象的普遍性和严重性引起了每位英语教育工作者的极大关注，如何更有效地对学困生进行转化及矫正则成了亟待解决的问题。因此，如何客观地分析高中英语学困生学习障碍的成因，并通过行之有效的对策，促进学困生及时脱“困”更是一线教师必须高度重视的课题。在本课题研究中，笔者通过访谈和观察，具体分析、归类学困生在英语学习方面所存在的困难及其成因，也结合教学实践的探索提出了几点对策。
一、学困生学习障碍的成因分析
（一）缺乏学习英语的动力。
英语学习中的学困生往往缺乏对英语学习的兴趣，求知欲不强，意志薄弱，学习动力不足。根据笔者在教学实践中的观察，学困生往往没有养成积极主动的英语学习习惯，而是习惯于被动地等待、依赖，不能课前预习，课后复习，不主动接触新知识，也不主动巩固已学知识，只等教师讲授，只完成简单的作业抄写，有针对性、难度大的作业则通过抄袭完成。归根到底，他们大部分都是由于不感兴趣或者信心不足而导致缺乏学习英语的动力。笔者经过较长时间的观察，在自己所任教的高二年级两个班级调查了26名在英语学习上求知欲不够的学困生，他们中有8人表示对英语学习缺乏兴趣，占到30.8%，还有9人表示由于自己学不好英语而渐渐失去了信心，占34.6%，不感兴趣和信心不足已经占到了英语学习动力缺乏的三分之二。由此也可以看出，那些对英语学习缺乏兴趣、缺乏学习动力而成绩不够理想的学生，其实都是在“不感兴趣――成绩差――学习困难――更不感兴趣――成绩更差”的轨道上恶性循环的，时间一长就对英语产生畏难情绪，丧失克服困难、战胜自我的坚韧意志和信心。
（二）学习方法运用不当。
正确的学习方法是学习成功的保证，大部分学困生没有掌握正确的英语学习方法。如一部分学困生没有领会语言学习的基本方法，把学习数理化的那一套方法搬到英语学习上来，不懂得英语听、说、读、写能力的形成必须通过大量的、反复的实践才能实现，他们仅仅满足于听懂教师讲解的内容，而没有把主要精力用在听、说、读、写的实践上，无法形成语言技能，结果是基础不扎实，越学越感到困难。还有一部分学困生没有良好的心理素质，上课总是默不作声，害羞、胆怯、不敢张嘴，生怕出错丢面子。结果是越不敢张嘴，就越不会读，恶性循环下去，形成“哑巴英语”。他们对英语的学习就变成了死记硬背单词、句型的机械式记忆，对语言的理解不能融会贯通，不善于归纳，没有形成完整的学习操作系统，只能断章取义，照本宣科，不能充分理解听、说、读、写之间的必然联系，结果脑子中只形成了一些零碎孤立的语言信息，而没有形成综合运用语言的能力。总之，学习方法运用的不当已严重影响了学困生知识摄入的数量与质量，逐步造成了学困生学业发展相对滞后的状况。
（三）缺少学习英语的氛围。
笔者所在的学校是一所位于小城镇上的中学，英语教学环境根本无法与城市的学校相比。绝大部分学生来自农村，很多学生的父母长年在外地经商或打工，疏于对孩子学习应有的关怀和鼓励，根本谈不上重视孩子的英语学习。再加上近几年优秀教育资源向城市的单向流动，生源质量有所下降。这也使得像我们这种位于小城镇的学校英语教学环节变得愈发薄弱，英语学习的氛围愈发缺乏，在这种不利的环境下，学生对英语学习也很容易产生自暴自弃的情绪。总之，小城镇的这种社会和教学氛围是影响学困生英语学习的一个重要因素。
（四）教材难度偏高。
新课标高中英语教材无论在课程内容上，还是在教学要求和思维层次上都发生了突变，总体而言教材的难度有所提高。教师和学生普遍反映，初高中教材之间缺乏有机衔接，这也导致一部分学生难以适应高中学习，往往前面的目标没完成，又要学习新课程，久而久之，积累的问题就会越来越多。新教材最突出的特点就是单元学习内容容量大，词汇量大，教学要求也高，容易导致学生困惑甚至焦虑。笔者通过访谈，很大一部分学困生都反映他们本来是怀着强烈的好奇心和极大的兴趣学习高中英语的，但一接触到新教材就产生了畏惧心理，渐渐就有了厌学情绪。
当然，以上种种原因并不是独立存在的，而是彼此复杂地交织在一起，导致学生对英语学习信心动摇、兴趣衰退，最终发展为反感，学习成绩下降，成为高中英语学科的学困生。
三、转化学困生的方法对策
（一）培养学生的兴趣，激发求知欲。
学困生学英语缺乏的往往是学习的兴趣，如果只是从正面向他们大谈学好英语的种种好处，那么恐怕收效甚微。但是，如能把这些学生在其他方面的兴趣迁移到学英语中来，就事半功倍。有一次，笔者把班上的几个常逃学到街上打电子游戏的学生叫到宿舍，打开“红色警戒”、“沙丘2000”、“星际争霸”等电脑游戏，并让他们轮流操作游戏。很快地，他们就融入游戏角色之中，但每每屏幕上出现数行英文提示时，这几个学生就很茫然，这时我就在旁边轻描淡写地翻译。几回下来他们幡然醒悟：原来21世纪玩游戏也要懂英语。事后，我发现英语课上，这几个学生完全“改头换面”了，经过一段时间，英语成绩也都有了不同程度的提高。可见，巧妙地迁移学生的兴趣，正如“四两拨千斤”，对培养学生学英语的兴趣，增强学习动力大有裨益。
（二）加强英语学习方法的指导。
转化学困生需要注意加强学习的技能训练，在教学中有计划、有针对性地强化其学习方法的运用和巩固，实现从“授之以鱼”到“授之以渔”的转变。在课堂教学过程中，教师尽量做到语言风趣、幽默，把枯燥的知识网络化、系统化、趣味化，让学生在不知不觉中巩固了所学知识。借助联想和构词规则记忆单词是提高记忆效率的有效方法，而要让英语学困生产生这种使用意识和习惯，则离不开教师在词汇教学中的不断示范，笔者在教“encouragement”时就让学生观察“en-courage-ment”，领会构词的规则；学“ugly”时让学生联想“beautiful”等，也就是将这种学习策略贯穿于教师“教”的行为中，让学生潜移默化地习得，并逐渐有意识地尝试和使用。只要我们循循善诱，持之以恒，不断引导，强化训练，让学困生从“他律转化到自律”，最后使他们养成自觉学习的习惯。
（三）创设良好的学习情境。
创造情境是指教师给学生营造积极的学习氛围，情境教学注重“情感”，又提倡“学以致用”，一名英语教师应充分利用情境教学特有的功能，在宽广的英语教学空间里，创设既带有情感色彩，又富有实际价值的操作情境，其教学效果可谓“百问不如一做”。常言道：“触景生情”。利用现有的教学条件和设备，紧扣教材内容，设置不同的语言情景，并将教学活动尽可能地置于语言情景中去进行。这是对后进生进行英语听、说、读、写训练的重要手段之一。因为，这不仅能诱发他们的好奇心和新鲜感，而且能大大增强英语“四会”操练的真实感，加深他们对语言材料的理解。因此，教师应充分利用实物、挂图、幻灯、简笔画、收录机等辅以教学。随着语言场景和直观教具的更替，就能有效地促使后进生不断地自我克服“乏味生厌”的心理障碍，进而达到激发其学习兴趣的目的。
（四）灵活使用教材，让英语学困生“能学”。
教师在使用教材时，要切实领会新课标中关于“教材使用建议”的精神，从教材内容、教学方法和课程资源利用等角度对教材进行必要的取舍和调整，以适当降低起点，让英语学困生能跨进新教材的“门槛”。例如，遇到Warming up扩展性活动部分和Workbook中的Talking部分，因涉及生词较多或话题背景知识相当缺乏就可以考虑删去。尤其是遇到一些与学生生活相距较远、专业性太强的内容时，如Cutural Relics（Module2 Unit 1）和Theme Parks（Module4 Unit 5）等单元中的部分内容，笔者都会大胆将其舍弃。当然，笔者有时也会根据教学需要，适当补充可以落实重要的语言基础知识和基本技能的教学内容。比如开展Listening活动时，教师在播放听力之前要充分介绍有关背景知识、词汇、语法，并适当地结合听力材料介绍有关英语连读、同化、弱读、重读、失去爆破、节奏和听力技巧方面的知识，使学生能在理解的基础上，逐渐熟悉英语口语特点，不断提高听说能力。
二、结语
“为有春风巧得力，枯木也能成绿荫”。教学是创造性的艺术，转化高中英语学困生更是一项艰巨的、创造性的任务，对“学困生”的转变不是一朝一夕之功，需要我们的耐心与宽容。社会、家庭、学校、教师共同努力，齐抓共管，分析原因，对症下药地给予学困生关心、爱心，增强了他们学英语的自信心，提高了对英语的兴趣，较好地掌握了学英语的方法，体验到了快乐学英语的乐趣，形成了良性循环，最终摆脱了“学困”的处境。作为英语教师，我们更要不断提高自身的素质与修养，按照新课标的要求，领会素质教育的实质，不断改进、创新教学方法，让学困生不再处于英语学习的徘徊状态，让每个学生的学习潜都能得以挖掘，真正进入自主、自觉、主动学习的理想境界。
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第10篇
作者：王莹 杜克莘 施京红 谢雯
【摘要】 目的：观察海洛因暴露对小鼠成瘾和学习记忆相关脑区的磷酸化p38 MAPK（pp38）表达的影响，探讨p38 MAPK细胞信号转导通路是否参与了发育早期海洛因暴露引起子代脑发育损伤的分子机制. 方法： 于胚胎鼠龄9～18 d时给孕鼠皮下注射海洛因10 mg/(kg·d)，建立子宫内海洛因暴露的小鼠模型. 按出生前处理将小鼠分为海洛因和盐水组. 蛋白免疫印迹检测两组小鼠前额叶皮层、海马、伏核、杏仁核脑区pp38的表达改变. 结果： 与盐水组相比，海洛因组小鼠的pp38蛋白表达在前额叶皮层、海马、伏核、杏仁核4个脑区均有明显增加( P< 0.05). 结论： 海洛因暴露可引起小鼠前额叶皮层、海马、伏核、杏仁核脑区的pp38 MAPK蛋白表达上调，提示p38 MAPK信号通路可能参与了海洛因损伤小鼠神经发育的分子机制.
【关键词】 海洛因；p38丝裂原活化蛋白激酶；前额叶皮层；海马；伏核；杏仁核
0引言
近年来，女性滥用者增多，且大多属于育龄期妇女［1-2］. 研究表明，子宫内海洛因暴露不但可引起新生儿宫内窘迫和发育迟缓，还可导致子代成年后长期的认知行为缺陷和社会行为障碍［3-4］，但其细胞、分子机制未完全阐明. p38是MAPK(mitogenacti vated protein kinase) 超家族的重要成员之一，属于应激活化激酶，p38 MAPK不但与其他信号传递途径共同介导细胞应激诱发的基因表达和酶活性的改变，还在细胞凋亡、细胞因子的合成释放、细胞骨架重排等机制中发挥重要作用［5-6］. 本研究旨在探讨p38 MAPK 通路是否参与了海洛因导致后代神经、行为异常的机制.
1材料和方法
1.1材料标准品海洛因（heroin），学名二乙酰吗啡，纯度98.5%，由中国药品生物制品检定所（国家麻醉品实验室）提供，批号171206-200614. 兔抗鼠磷酸化p38 MAPK mAb，山羊抗βactin pAb （美国Cell Signalling 公司）；辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗兔或山羊二抗（博奥森公司）；ECL化学发光试剂盒、PVDF 膜及Hyperfilm 胶片（德国Merck 公司）；蛋白质提取及浓度测定试剂盒（美国BioRad 公司）. FS600超声波粉碎仪(上海生析超声仪器有限公司)；离心机（德国Eppendorf公司）；电泳仪（德国Whatman Biometra公司）；紫外成像扫描仪及分析系统（美国BioRad公司）.
1.2方法
1.2.1动物分组及模型建立选健康活泼BALB/c 小鼠60只(第四军医大学实验动物中心)，雌雄各半，2 mo龄，体质量(25±5)g. 自由饮食饮水，昼夜12 h交替光照，室温25℃，湿度60% 左右. 每日21∶00 雌雄合笼，次日晨查精栓或阴道涂片，以精栓或阴道涂片查到做为受精标志，记为E0d. 将体质量相近的实验动物随机分为海洛因组和盐水组. 从E0～E8 各组动物自由进食， E9～E18 d，盐水组于21∶00在小鼠大腿外侧皮下注射生理盐水20 mL/（kg·d），1/d，海洛因组组给予海洛因10 mg/（kg·d） 注射，1/d，将药物溶于生理盐水中，0.5 g/L. 子代分组同亲代孕鼠.
1.2.2蛋白印迹实验仔鼠30 d龄时在各脑区取材，0.16 mol/L戊巴比妥钠腹腔麻醉，速断头、开颅、分离各脑区，即刻入液氮，冻存管分装，-80℃贮存. 用时加入4℃胞质蛋白提取液裂解，20∶1 加入蛋白酶抑制剂PMSF，高速分散器组织匀浆，冰浴1 h，12000 g 4℃离心10 min，沉淀加入4℃预冷核蛋白提取液，震荡混匀，冰浴1 h，再12000 g 4℃离心30 min，取上清为核蛋白，其蛋白浓度经考马斯亮蓝法定量，取上清加等体积2×SDS 样品缓冲液，煮沸5 min 使蛋白变性. 取50 μg待测蛋白加入等体积2×上样缓冲液煮沸5 min，行SDSPAGE 电泳，蛋白半干转至PVDF膜. 100 V 恒压转移2 h后，将PVDF 膜在含5%脱脂奶粉的TBST中室温下封闭1 h，与1∶1000一抗pp38 MAPK 兔多抗4℃孵育过夜，PBST 缓冲液洗膜3次，每次10 min；随后加入羊抗兔 IgGHRP 37℃孵育1 h，洗膜3次，每次10 min. ECL化学发光试剂显影，胶片曝光，UVP 凝胶成像系统扫描目的条带，Labworks 软件测量各阳性条带的光密度，将pp38 MAPK阳性条带与相应的βactin 条带吸光度比值作为其蛋白的相对表达量.
统计学处理：所有数据均采用SPSS12.0进行处理，多样本均数比较采用单因素方差分析.
2结果
分析各组间相应蛋白带的平均吸光度值，以βactin作内参蛋白，调整后进行半定量分析. 与盐水组相比，海洛因组动物的前额叶皮层、海马、伏核和杏仁核4个脑区组织的p38 MAPK磷酸化蛋白表达均明显增加（P< 0.05，图1，2）.
3讨论
MAPK信号系统作为真核细胞内各种信息传递的最后通路和共同通路，能够将细胞外的各种刺激信息转移到细胞核内，是神经细胞发生一系列可塑性变化的分子基础. p38 MAPK 多见于促炎和促凋亡的途径中，它在细胞分化、凋亡、迁移和增殖等基本生理过程中也发挥着不可忽视的作用［5］，许多细胞外刺激如应激刺激、炎性细胞因子、细胞因子、脂多糖、生长因子等通过细胞内信号转导通路激活p38 MAPK，进而磷酸化激活 MAPK APkinase2 等，并最终激活ATF2，Max 和MEF2 等转录因子而产生生物学效应［6］，但其具体调制及与其他信号通路之间的关系尚未明了.
海洛因暴露导致的行为异常与海洛因作用的时间、时程、剂量和给药方式等有密切关系，作用方式不同可导致的行为学损伤不完全相同. 我们采用的模型已报道动物有成年后迷宫学习记忆行为缺陷［7］，海马胆碱能系统及PKC 细胞学定位的改变［8］. 海洛因可迅速通过胎盘和血脑屏障，直接作用于发育中的神经细胞，导致子代成年后的神经行为损伤，但其细胞、分子机制未完全阐明. 我们的结果显示，发育早期海洛因暴露，上调了小鼠前额叶皮层，海马，伏核，杏仁核脑区中p38 MAPK 磷酸化蛋白的表达，提示在这些与成瘾和学习记忆相关的脑区里，存在着p38 MAPK 信号通路可能参与的生理病理学过程的改变，提示海洛因对子代动物成年后神经行为异常的长期影响，至少是部分源于海洛因在动物的神经系统发育早期，作用于神经行为相关的靶区，使该靶区的神经活动异常或作用于相关基因，使海洛因的致畸作用持续到生后，如海马损伤导致海马依赖的空间学习记忆损伤.
p38 MAPK在疾病发展的不同阶段，发挥的作用有所不同. 在细胞应激反应或炎症反应的早期，p38 上调发挥脑保护作用，但随着反应进程的加深，上调的p38 可以通过加强细胞的炎性反应，介导其他胞外信号引起的炎性细胞因子或炎性产物的表达和释放，以介导凋亡性细胞死亡的方式损伤神经细胞［6， 9］. p38 蛋白在成瘾和学习记忆相关脑区的持续表达上调，是损伤神经发育，或是激发了损伤后的神经代偿机制，需要进一步研究.
我们结果的提示，p38 MAPK 通路可能参与了海洛因对胚胎脑发育的毒性作用，进而影响动物成年后的行为，为进一步探讨子代神经行为的损伤机制及后期临床干预中靶蛋白的确定提供了有意义的资料.
【参考文献】
［1］ 杨凤瑞，高伟，顾迎莉，等. 2006年中国禁毒报告［R］. 国家禁毒委员会报告，2007：2-5. ［2］ Nora DV. NIDA Research Report Heroin Abuse and Addiction: NIH Publication No. 054165，［R］. NIDA 2005:1-2.
［3］ Walhovd KB， Moe V， Slinning K， et al. Volumetric cerebral characteristics of children exposed to opiates and other substances in utero ［J］. Neuroimage，2007， 36 (4): 1331-1344.
［4］ Yanai J， BenShaanan TL， Haimovitch H， et al. Mechanismbased approaches for the reversal of drug neurobehavioral teratogenicity ［J］. Ann N Y Acad Sci， 2006， 1074: 659-671.
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［6］ Kumar S， Boehm J， Lee JC， et al. p38 MAP kinases: key signalling molecules as therapeutic targets for inflammatory diseases ［J］. Nat Rev Drug Discov， 2003， 2(9): 717-726.
［7］ Huleihel R， Yanai J. Disruption of the development of cholinergicinduced translocation/activation of PKC isoforms after prenatal heroin exposure ［J］. Brain Res Bull， 2006， 31; 69(2): 174-181.
第11篇
【关键词】 海洛因；p38丝裂原活化蛋白激酶；前额叶皮层；海马；伏核；杏仁核
0引言
近年来，女性滥用者增多，且大多属于育龄期妇女［1-2］. 研究表明，子宫内海洛因暴露不但可引起新生儿宫内窘迫和发育迟缓，还可导致子代成年后长期的认知行为缺陷和社会行为障碍［3-4］，但其细胞、分子机制未完全阐明. p38是mapk(mitogenacti vated protein kinase) 超家族的重要成员之一，属于应激活化激酶，p38 mapk不但与其他信号传递途径共同介导细胞应激诱发的基因表达和酶活性的改变，还在细胞凋亡、细胞因子的合成释放、细胞骨架重排等机制中发挥重要作用［5-6］. 本研究旨在探讨p38 mapk 通路是否参与了海洛因导致后代神经、行为异常的机制.
1材料和方法
1.1材料标准品海洛因（heroin），学名二乙酰吗啡，纯度98.5%，由中国药品生物制品检定所（国家麻醉品实验室）提供，批号171206-200614. 兔抗鼠磷酸化p38 mapk mab，山羊抗βactin pab （美国cell signalling 公司）；辣根过氧化物酶(hrp)标记的抗兔或山羊二抗（博奥森公司）；ecl化学发光试剂盒、pvdf 膜及hyperfilm 胶片（德国merck 公司）；蛋白质提取及浓度测定试剂盒（美国biorad 公司）. fs600超声波粉碎仪(上海生析超声仪器有限公司)；离心机（德国eppendorf公司）；电泳仪（德国whatman biometra公司）；紫外成像扫描仪及分析系统（美国biorad公司）.
1.2方法
1.2.1动物分组及模型建立选健康活泼balb/c 小鼠60只(第四军医大学实验动物中心)，雌雄各半，2 mo龄，体质量(25±5)g. 自由饮食饮水，昼夜12 h交替光照，室温25℃，湿度60% 左右. 每日21∶00 雌雄合笼，次日晨查精栓或阴道涂片，以精栓或阴道涂片查到做为受精标志，记为e0d. 将体质量相近的实验动物随机分为海洛因组和盐水组. 从e0～e8 各组动物自由进食, e9～e18 d，盐水组于21∶00在小鼠大腿外侧皮下注射生理盐水20 ml/（kg·d），1/d，海洛因组组给予海洛因10 mg/（kg·d） 注射，1/d，将药物溶于生理盐水中，0.5 g/l. 子代分组同亲代孕鼠.
1.2.2蛋白印迹实验仔鼠30 d龄时在各脑区取材，0.16 mol/l戊巴比妥钠腹腔麻醉，速断头、开颅、分离各脑区，即刻入液氮，冻存管分装，-80℃贮存. 用时加入4℃胞质蛋白提取液裂解，20∶1 加入蛋白酶抑制剂pmsf，高速分散器组织匀浆，冰浴1 h，12000 g 4℃离心10 min，沉淀加入4℃预冷核蛋白提取液，震荡混匀，冰浴1 h，再12000 g 4℃离心30 min，取上清为核蛋白，其蛋白浓度经考马斯亮蓝法定量，取上清加等体积2×sds 样品缓冲液，煮沸5 min 使蛋白变性. 取50 μg待测蛋白加入等体积2×上样缓冲液煮沸5 min，行sdspage 电泳，蛋白半干转至pvdf膜. 100 v 恒压转移2 h后，将pvdf 膜在含5%脱脂奶粉的tbst中室温下封闭1 h，与1∶1000一抗pp38 mapk 兔多抗4℃孵育过夜，pbst 缓冲液洗膜3次，每次10 min；随后加入羊抗兔 igghrp 37℃孵育1 h，洗膜3次，每次10 min. ecl化学发光试剂显影，胶片曝光，uvp 凝胶成像系统扫描目的条带，labworks 软件测量各阳性条带的光密度，将pp38 mapk阳性条带与相应的βactin 条带吸光度比值作为其蛋白的相对表达量.
统计学处理：所有数据均采用spss12.0进行处理，多样本均数比较采用单因素方差分析.
2结果
分析各组间相应蛋白带的平均吸光度值，以βactin作内参蛋白，调整后进行半定量分析. 与盐水组相比，海洛因组动物的前额叶皮层、海马、伏核和杏仁核4个脑区组织的p38 mapk磷酸化蛋白表达均明显增加（p< 0.05，图1，2）.
3讨论
mapk信号系统作为真核细胞内各种信息传递的最后通路和共同通路，能够将细胞外的各种刺激信息转移到细胞核内，是神经细胞发生一系列可塑性变化的分子基础. p38 mapk 多见于促炎和促凋亡的途径中，它在细胞分化、凋亡、迁移和增殖等基本生理过程中也发挥着不可忽视的作用［5］，许多细胞外刺激如应激刺激、炎性细胞因子、细胞因子、脂多糖、生长因子等通过细胞内信号转导通路激活p38 mapk，进而磷酸化激活 mapk apkinase2 等，并最终激活atf2，max 和mef2 等转录因子而产生生物学效应［6］，但其具体调制及与其他信号通路之间的关系尚未明了.
海洛因暴露导致的行为异常与海洛因作用的时间、时程、剂量和给药方式等有密切关系，作用方式不同可导致的行为学损伤不完全相同. 我们采用的模型已报道动物有成年后迷宫学习记忆行为缺陷［7］，海马胆碱能系统及pkc 细胞学定位的改变［8］. 海洛因可迅速通过胎盘和血脑屏障，直接作用于发育中的神经细胞，导致子代成年后的神经行为损伤，但其细胞、分子机制未完全阐明. 我们的结果显示，发育早期海洛因暴露，上调了小鼠前额叶皮层，海马，伏核，杏仁核脑区中p38 mapk 磷酸化蛋白的表达，提示在这些与成瘾和学习记忆相关的脑区里，存在着p38 mapk 信号通路可能参与的生理病理学过程的改变，提示海洛因对子代动物成年后神经行为异常的长期影响，至少是部分源于海洛因在动物的神经系统发育早期，作用于神经行为相关的靶区，使该靶区的神经活动异常或作用于相关基因，使海洛因的致畸作用持续到生后，如海马损伤导致海马依赖的空间学习记忆损伤.
p38 mapk在疾病发展的不同阶段，发挥的作用有所不同. 在细胞应激反应或炎症反应的早期，p38 上调发挥脑保护作用，但随着反应进程的加深，上调的p38 可以通过加强细胞的炎性反应，介导其他胞外信号引起的炎性细胞因子或炎性产物的表达和释放，以介导凋亡性细胞死亡的方式损伤神经细胞［6, 9］. p38 蛋白在成瘾和学习记忆相关脑区的持续表达上调，是损伤神经发育，或是激发了损伤后的神经代偿机制，需要进一步研究.
我们结果的提示，p38 mapk 通路可能参与了海洛因对胚胎脑发育的毒性作用，进而影响动物成年后的行为，为进一步探讨子代神经行为的损伤机制及后期临床干预中靶蛋白的确定提供了有意义的资料.
【参考文献】
［1］ 杨凤瑞，高伟，顾迎莉，等. 2006年中国禁毒报告［r］. 国家禁毒委员会报告，2007：2-5.
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［6］ kumar s, boehm j, lee jc, et al. p38 map kinases: key signalling molecules as therapeutic targets for inflammatory diseases ［j］. nat rev drug discov, 2003, 2(9): 717-726.
［7］ huleihel r, yanai j. disruption of the development of cholinergicinduced translocation/activation of pkc isoforms after prenatal heroin exposure ［j］. brain res bull， 2006, 31; 69(2): 174-181.
第12篇
【关键词】 气虚血瘀证;血管平滑肌细胞;细胞凋亡
【Abstract】 Objective To observe the apoptosis and the expression of of bcl2 and bax in the vascular smooth muscle cells of rats with qideficiency and blood stasis syndrome. Methods The rats model with qideficiency and blood stasis syndrome were induced by exertion， starvation， cold and high fat food. The morphology of the thoracic aorta intima was observed， and the apoptosis index (AI) and the expression of protein bcl2 and bax in the vascular smooth muscle cells were measured. Results The thoracic aorta intima apparently proliferated in model group (P
【Key words】 Qideficiency and blood stasis syndrome; Vascular smooth muscle cells;Apoptosis
气虚血瘀趋向是现代人群一个突出的体质病理学特征〔1〕，气虚血瘀证是临床多个学科、多种疾病常见中医证候之一，尤其在心脑血管疾病等老年慢性疾病中更为常见。 老年冠心病的病机关键是气虚血瘀，而主要病理变化在内皮功能失调(ED)〔2〕，ED同时也是动脉粥样硬化(AS)的启动步骤〔3〕。因此保护血管内皮细胞(VEC)，防治AS是防治心脑血管疾病的关键措施。本实验选用老龄大鼠，采用饥饿、疲劳、寒冷、惊吓等综合因素方法复制气虚血瘀证模型〔4～6〕，首次观察气虚血瘀证大鼠血管平滑肌细胞的凋亡及bcl2、bax相关凋亡因子的表达，从细胞凋亡分子生物学角度探讨气虚血瘀的病理生理基础，为临床治疗心脑血疾管病等老年慢性疾病提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 动物 SD大鼠24只，18月龄，雌雄各半(体重600～800 g)，由重庆医科大学动物实验中心提供，生产许可证号：SCXK(渝)20070001。
1.2 主要仪器及试剂 DGB/20002A台式干燥箱(重庆实验设备厂)，HWS40B恒温水浴箱(江苏太仓市实验设备厂)，Lecia切片机(美国LECIA公司)，恒温冰箱(日本三洋公司)，HITACHI7500型透射电镜(上海玛登仪器有限公司)。bcl2及bax蛋白多克隆抗体、链霉卵白素过氧化物酶(SP)9001、二氨基联苯胺(DAB)显色试剂盒(北京中杉生物技术公司)，细胞凋亡试剂盒(第三军医大学)，蛋白酶K(sigma公司)。
1.3 方法
1.3.1 造模 空白对照组、造模组各12只，实验大鼠采用饥饿、疲劳、寒冷、惊恐刺激及高脂饮食4 w制作气虚血瘀证模型，方法：实验大鼠按每日40 g/kg体重提供饲料，每日上午8：00给予全日量的2/3，晚上20：00给予余下的1/3;每日放入10℃冷水中，以木棒追打强迫游泳直到疲劳;并将特制脂肪乳饮食按5 ml/kg加入实验大鼠饮水中。观察大鼠的体重、精神、舌质等，检测血流变学，其中模型组大鼠死亡2只。
1.3.2 标本采集及检测 耐疲劳时间：以游泳大鼠第一次自然下沉为度，测出开始游泳到捞出水面所用的时间。双球直管式检测。造模4 w后，将大鼠麻醉，取一段胸主动脉血管光镜下观察血管内膜、中膜情况。另取一段胸主动脉血管于透射电镜下观察。大鼠平滑肌细胞凋亡检测采用缺口末端原位标记法。bcl2、bax的检测：SP染色，按说明书所述方法进行，因标本取材不良，故各组标本数n=8。
1.4 统计学处理 采用SPSS10.0软件包，数据以x±s表示，组间比较采用单因素方差分析，采用SNK检验法。
2 结 果
2.1 气虚血瘀证大鼠模型鉴定 造模结束后，模型组大鼠不同程度出现倦怠嗜睡、精神萎顿、粪便稀溏、毛发干燥、舌质紫暗、眼球暗红等气虚血瘀症状。造模后大鼠体重(520.25±60.652) g较造模前体重(692.02±66.352) g明显减轻(P
2.2 大鼠血管平滑肌细胞凋亡及bcl2和bax表达 模型组大鼠血管平滑肌细胞凋亡指数(3.19±0.03) %较空白对照组(90.75±0.01) %明显下降，差异有统计学意义(P
2.3 大鼠血管平滑肌细胞形态学改变 光镜下观察，空白对照组大鼠血管中膜平滑肌走行清晰，无增生，弹力纤维未见异常，无增厚。模型组大鼠血管内膜增厚，平滑肌与弹力纤维粗大，层数增多，排列致密.中膜向内膜过度增殖。见图1。电镜下观察，空白对照组VSMC可见具有凋亡特征的染色质边集。模型组VSMC核浆比例明显增大，细胞器不丰富，主要为幼稚血管平滑肌细胞。见图1。表1 空白对照组与模型组大鼠血液流变学指标表2 各组大鼠血管平滑肌细胞bcl2和bax表达
3 讨 论
中医认为，气为血帅，气行则血行，气虚则血瘀。本实验根据中医老年人气虚体质学说及“饥则损气”、“劳则耗气”、“湿伤脾、寒伤肾”、“忧思伤脾、惊恐伤肾”、“肥甘厚味伤脾”等病机学说，选用18月龄老龄大鼠，以饥饿、劳累、惊吓、寒冷、高脂等多因素复合法建立气虚血瘀证大鼠模型，符合中医气虚血瘀证病因病机特点。造模大鼠不同程度地出现气虚、血瘀相关体征，血黏度各项指标明显增高。说明本方法能成功复制气虚血瘀证大鼠模型。AS是一组以增生性为特征的血管病变，是心脑血管疾病的重要病理基础，防治AS是防治心脑血管病的根本措施。AS早期，血管平滑肌细胞的增殖与凋亡失衡造成了其数量的过度增加，最终导致血管壁逐渐增厚。据报道，74.4%的AS患者血管内膜及粥样斑块内存在平滑肌细胞凋亡失衡，造成血管平滑肌细胞数量的过度增加，最终导致血管壁逐渐增厚〔7，8〕。因而调整血管平滑肌细胞增殖与凋亡的平衡，维持血管壁细胞数目稳定在正常水平是治疗AS的重要途径。
B细胞淋巴瘤/白血病2基因(Bcl2基因)是一种原癌基因，具有抑制凋亡的作用，是凋亡分子机制研究的主要靶分子。目前已发现的Bcl2蛋白家族按功能可分为抗凋亡蛋白及促进凋亡蛋白〔9〕。Bcl2蛋白主要定位于线粒体外膜，拮抗促凋亡蛋白。而大多数促凋亡蛋白则主要定位于细胞质，一旦细胞受到凋亡因子的诱导，它们可以向线粒体转位，通过寡聚化在线粒体外膜形成跨膜通道，或者开启线粒体的PT孔，从而导致线粒体中的凋亡因子释放，激活半胱氨酶天冬氨酸酶，导致细胞凋亡〔10，11〕。本实验结果证实气虚血瘀证大鼠存在血管平滑肌细胞增殖和凋亡严重失调等病理生理基础，为临床应用补气活血法防治心脑血管疾病提供了病理生理实验依据。
参考文献
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4 王 建，赵 辉，李 净，等.多因素复合制作气虚血瘀证脑缺血动物模型的实验研究〔J〕.中国实验动物学报，2001;9(4)：21620
5 李 净，王 建.益气活血法改善气虚血瘀证局灶性脑缺血再灌注模型鼠生物学特征的有效性评价〔J〕.中国中医基础医学杂志，2003;9(4)：225.
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9 Brown R.The bcl2 family of proteins〔J〕.Br Med Bulletin，1996;53(3):46677.
第13篇
【摘要】 目的：研究滑菇多糖（PNP）的抗肿瘤作用及诱导K562细胞凋亡的机制. 方法：采用MTT法检测PNP对K562细胞增殖的抑制作用；绘制生长曲线；Hochest 33258染色计算凋亡率；RTPCR法、Western Blot方法检测凋亡相关基因Caspase3的表达. 结果：MTT分析表明，PNP作用48 h后可明显抑制K562细胞的增殖；Hochest染色结果显示，PNP能诱导K562细胞出现典型的凋亡形态，且凋亡率随多糖浓度增加而增大，经PNP 100，200，400 mg/L的处理后，凋亡率分别是对照组的3.15，6.55和8.62倍. PNP能诱导凋亡相关基因Caspase3在mRNA水平上的表达；Western Blot显示PNP能诱导Caspase3编码蛋白的表达，且随多糖浓度的增加表达量增加. 结论：PNP对K562细胞增殖有抑制作用， 并能促进其凋亡； PNP通过诱导凋亡相关基因Caspase3表达促进细胞凋亡.
【关键词】 滑菇多糖；K562细胞；白血病；增殖；凋亡；Caspase3基因
【Abstract】 AIM: To investigate the antineoplastic effect of pholiota nameko polysaccharides (PNP) and the mechanism of inducing K562 cell apoptosis. METHODS: MTT assay was used to determine the inhibitory rate of PNP with different concentrations on the proliferation of K562 cells， and the cell growth curve was drawn. The cell apoptosis induced by PNP was detected under fluorescence microscope with Hoechst 33258 dye. RTPCR and Western Blot analysis were applied to test the expression of Caspase3 in K562 cells. RESULTS: MTT assay showed that the proliferation of K562 cells was inhibited apparently after treatment with PNP for 48 h; Hoechst staining showed the typical apoptotic features in K562 cells after induced by PNP， and the apoptosis rate increased along with the elevation of PNP concentration. The apoptotic rates of K562 cells treated by 100， 200， 400 μg/mL PNP were 3.15， 6.55 and 8.62 times as much as controls， respectively. PNP could promote the expression of Caspase3 at both mRNA and protein levels， and the gene expression also increased along with the rising of PNP concentration. CONCLUSION: PNP could inhibit the proliferation of K562 cells and induce apoptosis of the cells， maybe by upregulating the expression of Caspase3.
【Keywords】 pholiota nameko polysaccharides; K562 cells; leukemia; proliferation; apoptosis; Caspase3
0引言
近年来的研究发现，一些植物或真菌多糖除具有免疫增强作用外，对癌细胞还有直接抑制和杀灭作用［1］. 筛选具抗癌作用的天然多糖及研究多糖抗癌机制已成为目前肿瘤研究领域的热点之一. 滑菇是一种营养保健价值较高的食用菌. 有研究表明，滑菇多糖(pholiota nameko polysaccharide， PNP)除对小鼠S180细胞具有明显的抑制作用外，对正常以及荷瘤小鼠的免疫功能均有增强作用 ［2］. 但PNP对人白血病细胞K562增殖的抑制作用及诱导细胞凋亡的机制国内外均少见报道. 本研究通过观察PNP对K562细胞增殖的抑制作用和凋亡相关基因Caspase3的表达，旨在进一步探讨PNP的抗肿瘤作用及诱导K562细胞凋亡的机制.
1材料和方法
1.1材料
RPMI1640培养基（美国Gibco公司）；噻唑蓝（MTT）（北京华美公司）；Hoechst 33258，一抗（Caspase3，βactin小鼠抗人抗体），二抗（辣根过氧化物酶标记的山羊抗鼠IG）(美国Santa cruz公司)；PNP（河北师范大学生命科学院生化与分子生物学系王立安教授惠赠)；K562白血病细胞株（引自中国医学科学院血液病研究所）；倒置显微镜，荧光显微镜（日本Olympus公司）；CO2培养箱（日本Hitachi公司）；DYYⅢ 7B型电泳仪（北京六一仪器厂）；读胶仪AlphaImagerTM 1200型（美国ST公司）；PE480型DNA扩增仪（美国PE公司）；酶标仪ELX800（美国BioTek公司）.
1.2方法
1.2.1细胞培养采用含有100 mL/L血清，1×105 U/L青霉素，100 mg/L链霉素的RPMI1640培养基，于37℃，50 mL/L CO2饱和湿度环境下培养K562细胞.
1.2.2MTT检验取对数生长期的细胞，调细胞密度为1×108/L接种于96孔培养板中，每孔加入100 μL细胞悬液，于37℃，50 mL/L CO2饱和湿度环境下培养24 h后，对照组每孔加入100 μL无血清培养基，各实验组每孔加入100 μL用无血清RPMI1640培养基稀释的PNP，使终浓度分别为50，100，200和400 mg/L. 每个处理均做4个复孔. 继续培养48 h后，每孔分别加MTT 20 μL，再培养4 h，2000 r/min离心10 min，弃去上清，每孔加DMSO 150 μL，振荡10 min，用酶标仪测490 nm的A值. 按如下公式计算：细胞增殖抑制率%=［（对照组A-实验组A）/对照组A］×100%.
1.2.3生长曲线的绘制调细胞密度为8×107/L接种于24孔培养板中，每孔加入1 mL细胞悬液，于37℃，50 mL/L CO2饱和湿度环境下培养24 h后，对照组每孔加1 mL无血清培养基，各实验组每孔加入1 mL用无血清RPMI1640培养基稀释的PNP，使终浓度分别为50，100，200和400 mg/L. 每个处理均做4个复孔. 在培养至24，48，72，96和120 h后，台盼蓝拒染. 血细胞计数器计算每毫升溶液中的活细胞数目，绘制生长曲线.
1.2.4Hoechst 33258荧光染色观察细胞凋亡率细胞的前期处理同
1.2.3. 48 h后，用PBS（pH 7.2）漂洗2次，调细胞密度约为1×109/L. 甲醇∶冰乙酸（3∶1） 4℃固定5 min，蒸馏水洗1次. 随后吸取少许滴加至干净载玻片上；室温干燥后，Hoechst 33258（5 g/L）染色. 30 min后蒸馏水漂洗除去染液，荧光显微镜观察照相. 镜下随机计数10个视野，按以下公式计算：细胞凋亡率%＝(凋亡细胞数/总细胞数)×100%.
1.2.5PNP对细胞凋亡相关基因Caspase3表达的诱导作用
1.2.5.1半定量RTPCR检测调细胞密度为1×108/L接种于60 mL培养瓶中，每瓶加入5 mL细胞悬液，于37℃，50 mL/L CO2饱和湿度环境下培养24 h后，对照组加5 mL无血清培养基，各实验组每瓶加入5 mL用无血清RPMI1640培养基稀释的PNP，使终浓度分别为50，100，200和400 mg/L. 继续培养48 h后，PBS洗涤2次. 采用Trizol法提取细胞总RNA，随机引物法合成cDNA. Caspase3基因引物：上游：5′GGAATTGATGCGTGATGT3′；下游：5′ACCAGGTGCTGTGGAGTA3′. βactin引物：上游：5′ACCCCCACTGAAAAAGATGA3′；下游：5′ATCTTCAAACCTCCATGATG3′. 上述引物均由北京赛百胜公司合成. PCR扩增条件：95℃预变性10 min. Caspase3：95℃ 30 s， 50.1℃ 30 s， 72℃ 30 s，40循环，72℃延伸10 min；βactin：95℃ 30 s， 51.5℃ 30 s， 72℃ 30 s，30循环，72℃延伸10 min. 扩增产物经15 g/L琼脂糖凝胶电泳后，读胶仪读取扩增条带的吸光度值进行分析，以目标基因与βactin基因扩增产物的吸光度比值计算表达水平.
1.2.5.2Western印迹分析细胞的前期处理同1.2.5.1. 48 h后，PBS洗涤2次. 按照文献［3］的方法，提取细胞全蛋白，取50 μg进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳，转膜，抗原抗体反应， ECL发光、显影. X光胶片扫描后，采用UVP lab work 4.60软件测定条带吸光度值，并分析结果. 以目标基因与βactin蛋白产物的吸光度比值计算表达水平.
统计学处理：实验结果以x±s表示. 数据处理运用SAS 6.12统计软件，所用方法为单因素方差分析，P
2结果
2.1PNP对K562细胞增殖的抑制作用PNP作用K562细胞48 h后， PNP 50 mg/L浓度组抑制率为（9.45±1.76）%，明显高于对照组（P
2.2PNP对K562细胞凋亡的诱导作用对照组细胞细胞核界限清晰，呈圆形或椭圆形，为均匀蓝绿色荧光，染色质分布均匀（图2A）. PNP处理后的细胞，部分细胞细胞核缩小，染色质凝集呈颗粒团状分布，有的核碎裂形成多个球形颗粒（图2B）. 图3显示，经PNP 100 mg/L处理后，凋亡率是对照组的3.15倍，与对照组相比差异具有统计学意义（P
2.3PNP对细胞凋亡相关基因Caspase3的诱导作用
2.3.1PNP对细胞凋亡相关基因Caspase3 mRNA水平的影响不同浓度的PNP作用K562细胞48 h后，βactin基因的RTPCR产物（115 bp带）几乎保持不变，但Caspase3基因的RTPCR产物（350 bp带）随着PNP处理浓度的增大明显增多，电泳条带变宽、变亮（图4）. 计算结果显示，对照组为0.90±0.05，100 mg/L浓度组为1.07±0.04，与对照组相比差异有统计学意义（P
2.3.2PNP对细胞凋亡相关基因Caspase3蛋白表达的影响βactin基因的表达产物经不同浓度PNP处理后几乎保持不变，但Caspase3基因的表达产物随着PNP处理浓度的增大明显增多，电泳条带变宽（图5）. 计算结果显示：对照组为0.040±0.003；100 mg/L浓度组为0.077±0.008，与对照组相比差异有统计学意义（P
3讨论
食用菌多糖的抗肿瘤作用主要是通过两种途径实现的，一是具有细胞毒性的多糖直接杀死了肿瘤细胞，这类多糖有灰树花多糖、姬松茸多糖、正红菇子实体多糖等；二是作为生物免疫反应调节剂通过增强机体的免疫功能而间接抑制或杀死肿瘤细胞，如促进杀伤细胞(LAK)活性、诱导巨噬细胞产生肿瘤坏死因子［6］.
本研究结果表明，PNP对人K562细胞的增殖具有抑制作用并能诱导其凋亡，且抑制率、凋亡率随PNP浓度增加而增大. 可能的原因是通过诱导部分细胞脱离了细胞周期，进入凋亡状态，与肿瘤的发展有密切的关系. Caspases3被激活后可使癌细胞发生凋亡，我们的实验结果表明了PNP能诱导凋亡相关基因Caspase3的表达，且随多糖浓度的增加基因表达量增加. 提示K562细胞凋亡机制的启动与Caspase3的表达密切相关. 与余晓林等［4］报道的Caspases3基因对肝癌细胞等具有明显促凋亡作用，并可诱导成骨肉瘤细胞凋亡；贾林涛等［5］研究报道的Caspases3对HeLa 细胞的凋亡具诱导作用的结论相一致. 这提示PNP可作为治疗白血病的潜力药物. 由于我们的实验结果是在离体的状态下取得的，对其潜在价值的评判还需取决于活体实验的效果，这方面的工作我们正在进行之中.
【参考文献】
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第14篇
关键词：不稳定型心绞痛；肌钙蛋白I；冠状动脉支架植入；预后
中图分类号：R815 R256.2 文献标识码：B 文章编号：1672－1349(2007)10－0939－03
冠状动脉粥样硬化病变的形成是动脉对内膜损伤作出的炎症反应的结果。高敏C－反应蛋白(hs－CRP)是炎症过程中最具有标志性的因子。近年来的研究表明，根据hs－CRP水平可预测稳定型心绞痛(SAP)和不稳定型心绞痛(UAP)病人的未来心血管事件。经皮冠状动脉介入治疗(PCI)后出现肌酸激酶(CK)及其同工酶(CK－MB)升高与临床疗效及预后之间有相关性，其心血管事件发生率可能会增高。近期研究表明在心肌损伤中检测血清肌钙蛋白(cTnI)较CK－MB有更高的敏感性和特异性。Nageh等认为SAP病人行冠状动脉支架植入术(CS)后cTnI升高，在18个月时心脏不良事件增加，有独立的预后意义；UAP病人行CS后cTnI升高是否有预后意义，国内外文献甚少。本研究旨在探讨CS后cTnI升高的相关因素及其与预后的关系以及CS后cTnI，CK－MB和hs－CRP之间的相关性。
1 资料与方法
1．1 临床资料 选用2005年7月－2006年10月在山西医科大学第一医院诊断为UAP择期行CS病人156例，冠心病诊断严格按照WHO的诊断分型标准进行。术前有3例cTnI升高，1例CK－MB升高，均排除在外，余152例纳入研究组，其中男99例，女53例，年龄36岁～78岁(61.8岁±7.8岁)，入院时询问病史，进行体格检查，做18导联心电图，同时化验血糖、血脂、肝功能和肾功能等指标，术前测定CK－MB，cTnI，hs－CRP水平。
1．2 入选标准 纳入标准：①操作前cTnI和CK－MB均正常；②心绞痛病人术前7 d内无胸痛发作，术前3 d内无心力衰竭发作；③符合操作成功标准，即残余狭窄＜30％，远端血流达TIMI 3级。排除标准：①稳定型心绞痛病人；②急性心肌梗死病人；③陈旧性心肌梗死病人；④曾行经皮冠状动脉成形术(FFCA)病人；⑤恶性肿瘤，肝、肾功能不全，血液系统疾病，炎症、创伤，结缔组织病。
1．3 采血方法 病人空腹，术前、术后8 h、术后16 h及24 h分别采1次静脉血，测定cTni，CK-MB和hs-CRP水平。标本室温下放置20 min，离心取血清分别保存于-20℃冰箱，当天内测定cTni，CK-MB和hs-CRP水平。CK-MB正常值＜25U/L，cTnI正常值＜0.5μg/L，hs-CRP正常值＜3 mg/L。所检测的cTnI含量若有1次以上cTnI≥1.5 μg/L且有动态变化过程判为cTnI阳性，否则判为阴性。
1．4 手术方法 152例病人术前口服阿司匹林100 mg，每日1次；氯吡格雷(波立维)术前6 h达负荷量300 mg后减至75 mg，每日1次，口服；服用调脂药，β受体阻滞剂及硝酸酯类药物等配合治疗。手术由两名有丰富临床经验的主任医师严格按规程进行操作，以Judkins法行左右冠状动脉造影，定量判断至少有一处狭窄，且至少达70％以上(直径法)。以标准方法行CS，术中肝素(100～150)U/kg，并根据手术时间及部分活化凝血活酶时间(APTT)进行调整。必要时硝酸甘油0.2 mg冠状动脉内注射，可重复使用，记录手术相关参数。
1．5 随访 观察病人围手术期和随访(6～18)个月的主要心血管事件(MACE)。cTnI升高组中在住院期间有6例出现再发心肌缺血事件，其中有3例分支闭塞；cTnI正常组中有4例出现再发心肌缺血事件，两组比较有统计学意义(P＜0.05)。随访期间，cTnI升高组中有3例因UA再发进行了血运重建，其中1例是原支架植入处远端再狭窄，2例出现新的冠状动脉病变，病变的狭窄程度均＞70％，并成功行冠状动脉支架植入术。正常组中无一例出现MACE事件，二者有统计学意义(P＜0.05)。
1．6 统计学处理 计量资料以均数±标准差(x±s)表示，计数资料以百分数表示，两组间比较采用t检验或χ2检验，两变量间的相关关系采用Pearson直线相关分析，P＜0.05有统计学意义，采用SPSS 11.5统计学软件进行处理。
2 结 果
2．1 CS后cTnI，CK－MB和hs－CRP三者之间相关分析 结果显示三者之间存在相关性，均呈正相关，有统计学意义(P＜0.01)。详见表1。
2．2 cTnI升高组和cTnI正常组，临床资料比较(见表2)
2．3 CS两组手术相关参数比较 两组在小血管病变、手术持续时间、球囊扩张平均压力、术中心电图ST段改变、冠状动脉痉挛以及冠状动脉夹层形成等相关因素无统计学意义(P＞0.05)，但球囊扩张总时间、球囊扩张总次数及术后分支闭塞等相关因素有统计学意义(P＜0.05)。详见表3。
2．4 hs－CRP术前和术后比较 152例行CS治疗病人术前hs－CRP为(3.49±2.27)mg/L，术后hs－CRP为(4.76±2.40)mg/L，术前、术后有良好的相关性(r＝0.92，P＜0.01)。
2．5 两组病人住院期间与随访期间MACE比较 cTnI升高组住院期间再发心肌缺血6例(15.0％)，而cTnI正常组为4例(3.6％)，随访期间cTnI升高组中靶血管血运重建3例
(7.5％)。
2．6 两组危险因素Logistic回归分析 将年龄≥70岁、糖尿病、A型病变、C型病变、球囊扩张总时间、球囊扩张总次数、术后分支闭塞列入多元回归模型，进行多因素回归分析，显示球囊扩张总时间、C型病变及术后分支闭塞在两组之间有统计学意义(P＜0.05)。
3 讨 论
CS作为冠心病治疗的方法，近年来得到广泛的应用和发展。据文献报道，CS后肌钙蛋白升高的比率多在30％～50％。肌钙蛋白的释放强烈提示心肌损伤，而且肌钙蛋白的释放量与心肌细胞坏死数量和心肌梗死范围相关。而cTnI较cTnT有更高的特异性。本研究表明CS后cTnI升高比例占26.3％，但有并发症的病人cTnI峰值更声，与国外Censer等研究结果相一致。
本研究对两组中的危险因素进行Logistic回归分析后结果示，C型病变、球囊扩张总时间及术后分支闭塞与术后cTnI升高相关。这可能是因为C型病变复杂、弥漫，球囊扩张次数多时间长，加重了局部心肌损伤；球囊扩张总时间较长可致手术引起较长时间的心肌缺血导致局部心肌损伤，反复的球囊扩张也可加重缺血再灌注损伤；还有一部分由于植入支架后，引起小分支或侧支的血管闭塞，从而引起局部心肌梗死受损伤。也有研究认为年龄、单次球囊扩张最长时间、球囊扩张最大压力、成角病变等和CS后肌钙蛋白升高有关，病例选择和手术操作上的不同可使这些结果不尽一致。CS相关病人cTnI升高组住院期间再发心肌缺血较cTnI正常组有统计学意义(P＜0.05)；在随访中，术后cTnI升高组和cTnI正常组之间靶血管血运重建有统计学意义(P＜0.05)，这与Madhu等的研究结果相似。但是Q波性心肌梗死、死亡却没有发生。可能与本研究采用药物洗脱支架，因其抑制局部内皮生长，减少支架晚期官腔的丢失，降低再狭窄率从而降低心肌梗死及死亡，降低了MACE事件的发生。
hs－CRP是一个敏感的炎症反应指标，在排除其他引起hs－CRP增高的因素外，hs－CRP水平的高低可反映冠状动脉病变炎症反应的强弱。本研究观察到病人CS后hs－CRP与CS前相比均有升高(P＜0.05)。且hs－CRP术前和术后有良好的相关性，提示CS在使狭窄或闭塞的血管血运重建的同时，支架机械性扩张和操作中的导管等，均会一定程度地损伤血管内膜，使斑块破裂、内皮细胞受损，以及支架植入所诱发的冠状动脉局部炎症可能为CS术后hs－CRP升高的主要原因。众所周知，阿司匹林、波立维及调脂药具有抗炎作用，对hS－CRP有何影响，影响程度如何，尚需进一步的观察。
第15篇
【摘要】
目的探讨银杏叶提取物（EGb）诱导大鼠主动脉平滑肌细胞（SMC）中血红素氧合酶-1(HO-1)表达的量效关系，并初步探讨EGb诱导HO-1表达的分子机制。方法复苏并传代培养大鼠主动脉SMC，分组实验，分别采用0，50，100，200，400 μg/ml 5个不同浓度的EGb以及200 μg/ml EGb加放线菌素D（ActD）孵育SMC 8 h，Western blot法检测HO-1蛋白，以HO-1条带灰度值代表HO-1的表达量。结果不加EGb的对照组中HO-1蛋白仅有微量基础表达，加用EGb各组中HO-1蛋白的表达随EGb浓度的增加而增加（P＜0.05），在EGb浓度为200 μg/ml时达到峰值，随后则有所下降。加用ActD能显著抑制EGb所诱导的HO-1蛋白表达（P＜0.05）。结论EGb能够诱导大鼠主动脉SMC中HO-1表达，且这种表达在一定范围内具有量效关系；EGb诱导HO-1表达有赖于基因重新转录。
【关键词】 银杏叶提取物 大鼠 主动脉平滑肌细胞 血红素氧合酶-1
Abstract：ObjectiveTo explore the dose-effect relationship and the molecular mechanism of the heme oxygenase-1(HO-1) expression induced by the extract of Gingko biloba(EGb) in rat aorta smooth muscle cells (SMC).MethodsThe SMC was revived，passage cultivated and pided into different groups.The cells in each group were incubated with 5 concentrations of EGb such as 0，50，100，200，400 μg/ml and EGb 200 μg/ml+ActD4 μm respectively. The incubation lasted for 8 hours，then Western blot was applied to analyze HO-1 protein expression.ResultsThere was only basal microamount expression in the group without EGb. EGb significantly induced the expression of HO-1 in SMC and the expression increased with the increase of EGb concentration (P＜0.05)，it reached the peak amplitude under the condition of EGb 200 μg/ml，then desceded.EGb-induced HO-1 expression was significantly inhibited by ActD.ConclusionEGb can induce HO-1 expression in rat aorta SMC and the expression has a dose-dependent feature under a limited EGb concentration range.EGb-induce HO-1 protein expression depends on HO-1 genetic retranscription.
Key words：Extract of gingko biloba； Rat; Smooth muscle cell; Heme oxygenase-1
动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）是危害人类健康的严重心血管疾病，近年来其发病率和死亡率更是不断上升，对其防治方法的研究一直倍受关注。已知氧化应激损伤是致AS的核心环节，抗氧化应激已成为防治AS的有效途径之一。血红素氧合酶-1（Heme oxygenase-1，HO-1）是血红素氧合酶的诱导型，在应对氧化应激损伤中发挥着不可或缺的作用，逐渐积累的证据显示，HO-1系统在抗AS中起着重要作用［1］。银杏叶提取物（Extract of Gingko biloba，EGb）是传统中药银杏中的一种标准提取物，主要包含黄酮类和萜类内酯化合物，有抑制AS斑块形成和抗低密度脂蛋白体外氧化修饰等作用，是临床治疗AS的有效药物，但EGb能否诱导HO-1表达并籍以发挥抗AS作用尚不得而知。本文拟对EGb诱导体外培养的大鼠主动脉SMC中HO-1表达作用作初步探讨。
1 材料与方法
1.1 材料
大鼠主动脉平滑肌细胞株（Smooth muscle cell，SMC）第3代由四川大学华西医院传染科侯洁博士赠送；细胞培养试剂包括DMEM/F12、胎牛血清、胰蛋白酶、二甲基亚砜等购于美国Gibco公司；银杏叶提取物（金纳多注射液）购于德国Willmar Schwabe药厂；放线菌素D（ActD）购于Sigma生物试剂公司；免疫试剂：一抗（小鼠抗大鼠HO-1单克隆抗体）、二抗（辣根过氧化物酶标记的羊抗小鼠IgG抗体）购于Stressgen Biotech公司；Westren Blot检测试剂购于Sigma生物试剂公司。
1.2 方法
复苏大鼠主动脉SMC株第3代并传代培养至第6代，再以每孔4×105个细胞转至6孔板中继续培养；当SMC生长密度达到80%左右时使用含1%胎牛血清的培养基预处理24 h使细胞生长同步化。分组实验，每组5个复孔：①EGb诱导实验：分为A，B，C，D，E组，分别加入0，50，100，200，400 μg/ml 5种浓度的EGb孵育细胞8 h。②ActD阻断实验：分为对照组、EGb组及EGb+ActD组，分别加用等浓度的空白液、EGb 200 μg/ml及EGb 200 μg/ml+ActD 4 μm，孵育细胞8 h。随后收集细胞，加入细胞裂解液300 μl，冰上充分振荡裂解1 h，高速低温离心取上清液提取蛋白。BCA法测蛋白含量后，样品蛋白和上样缓冲液按3∶1的比例混匀后，沸水浴中煮沸5 min使蛋白变性，短暂离心去除沉淀；制备聚丙烯酰胺凝胶，用微量加样器将已经处理好的样品以每孔30 μg上样，并用β-actin（分子量42KD）作为内参校正上样量，电压200v，电流50 mA，电脉2 h；考马斯亮蓝染色观察蛋白条带；电转移1 h后用脱脂奶粉封闭PVDF膜；TBST洗膜后加入抗体（一抗稀释度1∶5000，室温下2 h；二抗稀释度1∶10 000，室温下1 h）；ECL法免疫荧光显像。用Image-Pro Plus图像分析软件对HO-1条带进行分析，以HO-1条灰度值代表HO-1的表达量。
1.3 统计学分析
实验所得数据用±s表示，采用F+q检验，应用SPSS 13.0软件进行统计分析。
2 结果
2.1 EGb诱导实验各组的HO-1蛋白表达对照组中HO-1蛋白电泳条带影随EGb浓度增加而加深，在EGb浓度为200 μg/ml时条带显影最深，当EGb浓度增至400 μg/ml时，HO-1蛋白条带显影反而转浅，详见图1。灰度值分析显示：对照组中HO-1蛋白仅有微量基础表达，50，100，200 μg/ml组HO-1蛋白表达逐渐增加，在EGb 200 μg/ml HO-1蛋白表达达到峰值，随后呈下降趋势，详见表1。表1 EGb诱导实验组蛋白印迹图像分析结果(略)
2.2 ActD阻断实验各组的HO-1蛋白表达3组中HO-1蛋白条带显影程度各有不同，EGb组条带明显加深，而EGb+ActD组条带明显变浅，详见图2。灰度值分析：EGb组诱导的HO-1表达量显著高于对照组，EGb+ActD组HO-1蛋白表达受抑，明显低于EGb组，详见表2。表2 ActD阻断实验组蛋白印迹图像分析结果(略)
3 讨论
HO-1即热休克蛋白32（HSP32），分子量为32kD，是细胞内的一种重要的抗氧化酶。HO-1连同其酶解产物胆红素、CO一起组成了机体重要的保护系统，广泛参与抗氧化、抗炎、抗细胞增殖、调节血管张力，参与细胞内信号传递等重要作用［2，3］。用免疫组化染色和原位杂交的方法研究已证明，在人和实验动物AS斑块巨噬细胞、肥大细胞和内皮细胞内，HO-1是高表达的，这种适应性的高表达被认为具有抗AS的积极意义［4］。研究显示，增加HO-1表达能有效抑制AS的发生，反之，若用药物阻断HO-1活性则可使AS病变程度显著加重，表明HO-1系统在防止AS中起着重要作用，故合理调控HO-1表达可望成为有效防治AS新途径。HO-1本质上是一种应激酶，具有高度可诱导性，但因HO-1基因启动区内存在着许多特殊的调控位点，诱导HO-1表达的信号通路非常复杂。众多致氧化应激损伤的因素如H2O2、重金属离子、内毒素、OX-LDL等均是通过改变细胞内氧化-还原状态来诱导HO-1的表达。一些生物黄酮在近年被证明是无细胞毒性的HO-1诱导剂，有着光明的临床应用前景。EGb是传统中药银杏中的一种标准提取物，主要成分为黄酮类和萜类内酯化合物，近来揭示，EGb是一个天然的HO-1增效药，EGb的抗氧化作用可能更主要通过诱导HO-1这一强大的细胞内源性抗氧化酶的表达实现的。已经发现EGb可以诱导大鼠中HO-1表达；另有报道，EGb可以增强HO-1活性从而抑制脂质过氧化及阻止AS斑块的形成［5，6］。但是，有关对EGb诱导VSMC中HO-1的表达的研究却比较缺乏，为填补这方面研究的空白，我们采用体外培养的大鼠主动脉SMC作为研究对象，结果显示EGb确实具有诱导VSMC表达HO-1的潜能，并且这种诱导表达在一定范围内具有量效关系，即随EGb浓度增加HO-1蛋白表达也增加，且在EGb浓度达200 μg/ml时，诱导HO-1蛋白表达达到峰值，随后略有下降，其下降可能与其诱导机制中某些转录因子达到饱和有关，也可能是HO-1蛋白过度表达后出现了某种形式的反馈抑制。
本文结果还显示，EGb诱导大鼠SMC中HO-1的表达可以被RNA转录酶抑制剂ActD阻断，表明其表达是依赖于HO-1基因的重新转录。之前也有研究表明，同样是生物黄酮的姜黄素（curcumine）诱导人肾脏近端小管细胞HO-1蛋白的表达也是依赖于基因的重新转录，且这一过程经由P38MAPK及Nrf2/ARE［7，8］等介导的细胞内信号转导途径。EGb诱导HO-1基因转录与表达的具体细胞内信号转导途径是否与之相似有待进一步研究。
已知动脉SMC是AS是病理过程的重要参与者。在致病因素的作用下，SMC经内弹力膜迁入内膜，并发生增生、表型转化、分泌细胞因子和合成细胞外基质，同时，经表面受体介导吞噬脂质，导致脂纹和纤维斑块的产生。研究发现，SMC内HO-1高表达能对细胞本身的增殖迁移等产生抑制作用，有助于拮抗AS［9，10］。因此，我们的实验结果将为进一步探讨EGb防治AS的作用与机制奠定基础。
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