石油脱硫菌的筛选与培养范文

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《油气田地面工程杂志》2014年第六期

1脱硫菌脱硫条件的优化

（1）培养基的优化。以BSM培养基为基础培养基，分别取5g/L葡萄糖、2.5g/L蔗糖、6mL/L乙醇、8mL/L甘油、4g/L乙酸钠和1.2g/L柠檬酸钠作为碳源，72h培养后用紫外分光光度计测定并计算2—HBP含量，确定最适宜的碳源。以最佳碳源作为BSM碳源，分别取2.5g/LNH4Cl、2g/LNH4O3、5g/LKNO3、10g/L牛肉膏和25g/L蛋白胨作为氮源，72h培养后测定菌体产生2—HBP量，确定最适宜的氮源。（2）培养条件的优化。培养基选取最佳碳源和氮源，以DBT为唯一硫源，以2％、4％、6％、8％、10％的接种量培养72h。通过测定菌体产生的2—HBP量确定最佳接种量。在最佳碳源、氮源和接种量的培养基中添加浓度为20、40、60、80和100mg/L的DBT，培养72h确定最佳的DBT浓度。最佳培养基中设置6、7、8、9、10不同pH值，培养72h确定最佳的pH值。设置20、25、30、35、40℃不同温度，培养72h确定最佳温度。选取冰箱保存的菌株活化培养2、3、4、5天，将不同菌龄的菌分别接种于最佳培养基，培养72h确定最佳菌龄。设置不同装液量，即每个250mL三角瓶分别装液体培养基40、50、60和70mL，培养72h，研究通气量状况对菌体脱硫影响。

2结果与分析

2.1脱硫菌的富集与分离对炼化公司聚合物二厂工业废水进行系列稀释与划线分离，在BSM平板上得到优势菌6株，分别为B1~B6。菌落形态见表1。

2.2菌株降解效果的测定筛选得到的6株菌在以DBT为唯一硫源的BSM2培养基中发酵培养，产物与Gibb’s试剂在碱性环境中均可生成蓝色复合物[5]，证明产物含2—HBP。利用分光光度计测出这几种菌在610nm处的吸光度，代入回归方程计算生成2—HBP量，以判定菌体脱硫能力的高低。通过不同菌株的降解效果对比可知，菌株B5的2—HBP浓度最高，说明B5脱硫效果最好。

2.3脱硫菌培养条件的优化

2.3.1培养基的优化碳源分别是葡萄糖、蔗糖、乙醇、乙酸钠、甘油和柠檬酸钠时B5的脱硫情况表明，该菌在几种碳源作用下均可脱硫，但葡萄糖作碳源时，菌体脱硫效果最好，最高可产生7.97mg/L的2—HBP。从不同氮源对菌B5脱硫效果可看出，菌体在牛肉膏作氮源时最高可产生1.56mg/L的2—HBP。

2.3.2培养条件的优化从不同接种量对菌B5脱硫效果的影响可以看出，接种量小，脱硫效果不好；随着接种量的增高，脱硫效果有所提高，但接种量达8%以后，随着接种量的增加，脱硫效果反而有所下降。接种量大容易造成杂菌污染[6]，因此最佳接种量为8%，可产生2.23mg/L的2—HBP。从不同DBT浓度对菌B5脱硫效果的影响可见，浓度为20mg/L时，B5最高可产生0.973mg/L的2—HBP，显示这时脱硫效果最好；随着DBT浓度的增高，脱硫有所减弱，在80mg/LDBT浓度以后脱硫效果随着DBT浓度的增加大幅下降，分析可能与脱硫底物抑制物有关。从不同pH值对菌B5脱硫效果的影响可见，脱硫效果在pH值为8时最好，可生成3.16412mg/L的2—HBP。从不同温度（20、25、30、35、40℃）对菌株B5脱硫影响可见，温度太高或太低都不利于菌的脱硫效果；在30℃时，2—HBP产生量可达最大值，为4.569mg/L。

从不同菌龄的菌株（2、3、4、5天）对B5脱硫效果的影响可见，活化3天以后的菌株脱硫效果最好，可产生5.47mg/L的2—HBP。装液量的大小主要影响培养过程中的通气及溶氧情况，从不同装液量（40、50、60、70mL）对菌株B5脱硫效果的影响可见，菌株的脱硫效果随着装液量的增多而减弱，这与好氧菌培养特点一致。根据以上优化实验结果，配置以葡萄糖为碳源、牛肉膏为氮源的培养基，选择3天菌龄的菌株，按8%比例接种，装液量40mL，在pH值为8、温度30℃的培养条件下研究脱硫状况。实验发现，B5菌株在前两天脱硫效果不好；从第4天起，脱硫效果明显增强，最高可产生13.12mg/L的2—HBP；但一周以后脱硫效果没有明显上升，结果与优化预期结果一致。

3结论

（1）实验分离得到6株可降解DBT的脱硫菌，经比较确定了B5为高效脱硫菌株，需进一步进行菌种鉴定。（2）对B5菌株的脱硫条件进行优化，确定脱硫最佳培养基是葡萄糖作碳源、牛肉膏作氮源，最佳接种量为8%，最佳DBT的含量为20mg/L，最佳pH值10、温度30℃，最佳菌龄3天，装液量在最少的时候脱硫效果最好。

作者：张虹袁红梅尤凤丽黄永红单位：大庆师范学院