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《包装与食品机械杂志》2015年第一期
1试验材料与方法
1.1材料与仪器
1.1.1试验材料与试剂无花果叶采自青岛农业大学翰林苑,经40℃干燥后粉碎过80目筛备用;平菇购自城阳春阳店大润发,挑选八九成熟的,正常色泽的,菇体完整的,没有机械损伤,朵型一致的,没有虫害的新鲜菇体;低密度聚乙烯(LDPE)保鲜袋市售;无水乙醇(分析纯)(青岛化学试剂厂);补骨脂素标准品(上海一基生物科技有限公司),纯度>98%。
1.1.2试验仪器恒温电热干燥鼓风箱(上海精宏试验设备有限公司);电子分析天平(赛多利斯仪器系统北京有限公司);万能高速粉碎机(天津泰斯特仪器有限公司);超声清洗器(功率:500W,昆山市超声仪器有限公司);尤尼柯UV-2000型紫外分光光度计(上海尤尼柯仪器有限公司);DDS-11C型电导率仪(上海精密仪表有限公司);DR-A1型阿贝折光仪(上海恒奇仪器仪表有限公司)。
1.2试验方法
1.2.1无花果叶提取液制备准确称取2.0g无花果叶粉,以20∶1的液料比加入到25%乙醇溶液中浸泡,500W40℃超声处理20min,抽滤,收集滤液得到无花果叶提取液,取1mL稀释100倍后,于245nm处测吸光度值,并计算无花果叶补骨脂素的含量。
1.2.2补骨脂素含量计算精密配制浓度为10μg/mL的补骨脂素标准品溶液,分别取上述溶液0、1、2、3、4、5mL放置于10mL容量瓶中,静置5min,于245nm紫外光分光光度计测吸光度[14]。绘制标准曲线,见图1,建立回归方程为。
1.2.3影响无花果叶补骨脂素提取的因素(1)单因素试验设计。通过改变乙醇浓度(15%、25%、35%、45%、55%)、液料比(10∶1、15∶1、20∶1、25∶1、30∶1)、超声时间(10min、20min、30min、40min、50min)、超声温度(20℃、30℃、40℃、50℃、60℃),确定无花果叶补骨脂素提取工艺参数。(2)正交优化试验设计。对影响提取效果的主要因素:料液比、超声时间、超声温度、乙醇浓度进行L9(34)正交试验,以补骨脂素提取率为指标表示,正交试验表如表1。
1.2.4平菇保鲜试验设计将优化得到的提取工艺参数对无花果叶进行提取,得到无花果叶提取液。选取无病虫,大小均匀、无开伞、无机械伤的平菇,将平菇放入提取液中浸泡3min,以25%乙醇做空白对照,晾干,分别将平菇装入保鲜袋置于常温下(20±2℃),每天随机取样测定保鲜指标,其中呼吸强度及质量损失率每次测定均用各处理的全部样品,其余指标则是从每个处理中随机取100g样品进行测定。
1.2.5平菇生理指标呼吸强度:在室温下采用静置法测定,参考曹健康等的方法[15];(3)可溶性固形物含量:采用阿贝折光仪测定;(4)可溶性蛋白质含量:采用考马斯亮蓝法;(5)细胞膜渗透率:本试验根据电导率法进行测定,参照肖功年等的方法[16],并稍做修改,将平菇的菇柄中心部位切成4mm×4mm×4mm方块,称取2g,用20mL去离子水浸泡、然后震荡10min,用滤纸吸干后,然后再加20mL去离子水,在室温下震荡一小时,测定其电导率。最后沸水浴煮沸腾15min,待冷却后测定电导率,细胞膜渗透率用相对电导率表示。相对电导率为平菇浸提液煮沸前和煮沸后电导率的比值;(6)丙二醛含量:采用硫代巴比妥氨比色法进行测定。
1.2.6数据分析采用SPSS17.0进行数据显著性分析。
2试验结果与分析
2.1单因素结果与分析
2.1.1不同浓度乙醇对无花果叶补骨脂素提取效果的影响由图2可以看出,随着乙醇浓度的增大,补骨脂素提取率先增大后减小。当乙醇的浓度小于25%,补骨脂素的含量随乙醇浓度的升高而逐渐升高;当乙醇浓度大于25%,补骨脂素含量随乙醇浓度的升高而降低。这可能是因为当乙醇浓度增大,无花果叶中的其他有机物质溶出增多,检测吸光度时干扰物质较多。因此,选取最佳提取浓度为25%。
2.1.2不同液料比对无花果叶补骨脂素提取效果的影响由图3可以看出,随着液料比的增大,补骨脂素提取率先增大后减小。当液料比小于20∶1,补骨脂素的含量随液料比的变大而升高;当液料比大于20∶1时,补骨脂素含量随液料比的变大而减小。这是由于液料比为20∶1时,无花果叶中补骨脂素与溶液之间传质过程趋于平衡,继续增加液料比则会出现稀释效应,测得吸光度值较小,所以计算得到的提取率较小。实际上补骨脂素已经提取完全。因此,液料比20∶1最为合适。
2.1.3不同超声处理时间对无花果叶中补骨脂素提取效果的影响由图4可以看出,随着超声处理时间的增加,补骨脂素提取率呈先增加后减小的趋势,当超声处理时间为20min时,补骨脂素提取率最大值;当提取时间大于20min时,提取液中补骨脂素含量逐渐下降,这可能是因为提取液中的补骨脂素超声处理时间过长而变性,导致含量下降。因此,选取最佳提取时间为20min。
2.1.4不同超声处理温度对无花果叶中补骨脂素提取效果的影响由图5可以看出,随着超声处理温度的增加,补骨脂素提取率呈先增加后减小的趋势,当提取温度达到50℃时,补骨脂素提取率达到最大值;当处理温度超过50℃后,提取液中补骨脂素含量下降,这可能是补骨脂素化合物因为处理温度过高而变性,导致含量下降。因此,选择最佳提取温度为50℃。
2.2正交试验结果与分析由表2中极差结果分析可知:影响超声波辅助提取无花果叶补骨脂素的提取率因素的的顺序为乙醇浓度A>提取时间C>提取温度D>液料比B,超声波辅助提取无花果叶补骨脂素最佳组合为A2B2C3D1,即乙醇浓度25%、液料比20∶1、提取时间30min、提取温度40℃。
2.3.1平菇失重率的变化由图6可以看出,随着贮藏时间的延长,平菇的失重率逐渐呈上升趋势,开始阶段失重率变化较大,而后变化逐渐缓慢。在整个贮藏期内,对照组总是高于试验组,且有显著差异(P<0.05)。贮藏第3天,对照组平菇肉质变得疏松,气生菌丝都出现于菇柄和菇盖,基本失去商品价值;而试验组第4天才失去商品价值。贮藏第四天时,试验组和对照组平菇失重率分别为3.11%和3.32%。
2.3.2平菇细胞呼吸强度的变化衡量平菇采后自身新陈代谢的重要指标是呼吸强度。由图7可以看出,随着贮藏时间的延长,平菇的呼吸强度都是呈现上升而后下降的趋势。试验组与对照组在第一天均出现呼吸高峰,但试验组呼吸强度显著低于对照组(P<0.05),分别为21.21mg/kg•h和25.47mg/kg•h。之后试验组与对照组差距逐渐缩小,至第4天时两组均已失去商品价值,但无花果叶提取液能降低平菇的呼吸强度。
2.3.3平菇可溶性蛋白质量的变化可溶性蛋白质含量是构成平菇内酶的重要组成部分,参与许多生理生化代谢过程的调控,是评价平菇采后代谢水平和贮藏品质的指标之一。由图8可以看出随着贮藏时间的延长,平菇可溶性蛋白质的含量呈下降的趋势,即表明随着平菇采后机体的衰老和代谢强度的降低,可溶性蛋白也随之降解。但是在贮藏过程中,试验组的可溶性固形物的含量显著高于对照组(P<0.05),即无花果叶提取液能延缓可溶性蛋白的降解。
2.3.4平菇可溶性固形物的变化可溶性固形物是平菇贮藏品质的另一个重要指标,可溶性固形物与平菇的呼吸作用有紧密的关系[17]。由图9可以看出随着贮藏时间的延长,试验组和对照组平菇的可溶性固形物的含量均先升高后下降的趋势,这和呼吸强度的变化趋势是相同的。这是由于在平菇的呼吸作用过程中,平菇所含的碳水化合物是主要底物[18]。在贮藏第1天时呼吸强度最大,大量的大分子碳水化合物被水解成小分子的可溶性糖,因此可溶性固形物会在第1天出现升高的趋势。在贮藏过程的前3天,试验组的可溶性固形物的含量均显著高于对照组(P<0.05),表明无花果叶提取液能抑制可溶性固形物含量的下降。
2.3.5平菇细胞膜渗透率的变化平菇采后的衰老过程中会发生细胞膜氧化降解,因此细胞膜透性会随之增加,同时伴随着膜内外离子的泄漏[19],细胞膜相对电导率就可以反映出膜透性的变化。由图10可以看出,随着贮藏天数的增加,平菇细胞膜的相对电导率均呈逐渐上升的变化趋势。在贮藏过程中,贮藏前期上升速度较快,之后趋势缓慢,试验组的细胞膜相对电导率显著高于对照组(P<0.05),表明无花果提取液能够降低细胞膜相对电导率,延缓平菇细胞膜的降解。
2.3.6平菇丙二醛含量的变化细胞膜脂质过氧化的重要产物之一是丙二醛[20],脂质过氧化通常以测定它的含量作为指标的,以反映细胞膜脂过氧化的程度,其含量越高即标志着膜系统受伤害程度越高。由图11可以看出,平菇丙二醛含量均随着贮藏天数的增加而增加。在整个贮藏过程中,试验组平菇丙二醛含量始终低于对照组(P<0.05),表明无花果叶提取物能减少平菇内丙二醛的积累。
3结论
在单因素试验的基础上,采用正交试验优化得到无花果叶补骨脂素的最佳提取工艺:乙醇浓度25%、液料比20∶1mL/g、提取时间为30min、提取温度40℃;在无花果叶提取物对平菇的保鲜试验中,生理指标结果表明:在贮藏期间,试验组的失重率、呼吸强度、细胞膜相对电导率、丙二醛含量均显著低于对照组,可溶性固形物和可溶性蛋白均显著高于对照组。综合以上结果,无花果叶提取物能较好地保持平菇的营养价值,改善其贮藏品质,因此无花果叶源食用菌保鲜剂具有一定的开发价值。
作者:樊铭聪张鑫李文香胡欣蕾孙亚男何如单位:青岛农业大学食品科学与工程学院