大鼠脑缺血治疗范文

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1材料与方法

1.1动物分组健康雄性Wistar大鼠39只，体重200～240g，随机分为对照组、模型组、治疗组，每组13只。

1.2CIR模型复制参考Bannister′s方法建立大鼠脑缺血再灌注动物模型。大鼠1.5%戊巴妥钠(45mg/kg)腹腔注射麻醉，1%肝素(0.1ml/kg)抗凝，仰卧固定于手术台上，颈部正中切口，暴露和分离左右侧颈总动脉、右颈外静脉，自右侧颈总动脉远端逆行插管（并结扎近心端），将插管近心端插入右颈外静脉，夹闭左侧颈总动脉，使椎动脉进入脑中血液经引流管进入右颈外静脉中，造成脑缺血。治疗组自脑缺血开始腹腔注射川芎嗪，模型组不给药，90min后夹闭动、静脉之间的引流管，开放左颈总动脉夹，导致脑缺血再灌注，再灌注2h后，处死动物、取脑。对照组在麻醉后切开颈部，分离双侧颈动、静脉后，处死动物、取脑。

1.3标本采集和处理光镜切片制作：在脑漏斗前后缘将脑组织冠状切开，取1.5mm厚脑组织,并固定于4%多聚甲醛中，常规脱水和石蜡包埋后切片，切片厚度为5μm，常规甲苯胺蓝染色和HE染色。电镜切片制作：取顶叶皮质1、2区1mm×1mm×1mm大小的组织块，用2.5%戊二醛固定，PBS缓冲液洗涤和梯度丙酮脱水，EP0812浸透和包埋，LKB4型超薄切片机切片，厚度40～50nm，铀-铅染色，在JEM100CXⅡ透射电镜下观察，摄像。

1.4统计学方法统计学数据用(±s)表示，采用SPSS10.0软件进行处理。

2结果

2.1光镜观察

2.1.1光学显微镜下观察对照组：大脑皮质神经元核大而圆,核仁清晰,胞质嗜酸性；皮质和纹状体血管周围及神经元周围有狭窄明亮带，是由于石蜡切片制片时组织收缩造成的人工假象所致。

模型组：皮质部分神经细胞核固缩、着色加深，甚至有些细胞核、质界限不清；细胞周围和血管周围水肿带明显增宽（见表1）,纹状体神经细胞水肿也比较明显，血管周围及神经元周围水肿带厚度明显增大（见表2），是由于脑组织水肿所致。

治疗组：大部分皮质神经元结构清晰,在皮质及纹状体水肿带宽度分别缩小（见表1～2）。

表1大脑皮质血管周围、神经细胞水肿带厚度（略）

与模型组比较有显著差异，▲P<0.05

表2大脑纹状体血管周围、神经细胞水肿带厚度（略）

与模型组比较有显著差异，▲P<0.05

2.1.2尼氏染色对照组：皮质锥体细胞及星形细胞,核呈空泡状,核仁清晰,尼氏体呈蓝色斑块状,分布于胞质中；模型组：皮质神经元、尼氏体减少；治疗组：尼氏体相对增多,但与正常组相比仍显着色较浅。

2.2电镜观察对照组：大脑皮质有明、暗两种神经元。神经元核大、圆、核仁明显，神经元胞质有丰富的内质网、核糖体和较多线立体、高尔基体等细胞器；纹状体神经元核规整,胞质细胞器丰富；皮质内血管腔圆，内皮细胞核完整，细胞器丰富，基膜清晰。

模型组：大脑皮质许多明神经元核内异染色质增多，胞质水肿，细胞器明显减少；纹状体神经元大部分核固缩，严重者核膜消失,胞质水肿，细胞器减少；皮质内血管周围水肿,基膜变窄或结构模糊，胶质膜水肿或消失。

治疗组：大脑皮质神经元大部分无明显水肿现象，胞质细胞器丰富,线粒体、内质网较规整；纹状体神经元可见核仁,细胞器丰富,细胞周围有水肿区减少或消失；皮质内血管周围水肿带缩小。

3讨论

20世纪90年代以来,人们发现脑缺血后神经损伤中除坏死外,还存在神经元凋亡现象［3］。光镜下HE染色切片发现：模型组大脑皮质部分锥体细胞核膜结构不清晰,着深染色，细胞周围水肿带和皮质血管周围水肿带明显增宽。电镜下观察，大脑皮质许多明神经元核固缩，异染色质增多，胞质水肿，线粒体肿胀，细胞器明显减少；皮质内血管周围水肿，基膜变窄或结构模糊，胶质膜水肿或消失。血脑屏障破坏。有报告［4］大脑中动脉阻塞缺血2h,线粒体轻度肿胀;缺血4h,线粒体肿胀，嵴断裂，溶解，消失；缺血12h,线粒体损伤严重,数量减少,出现胞质空泡化;缺血24h，线粒体减少,消失,胞质空泡化,大量神经元受损；Solenski等［5］也对脑缺血及再灌注引起的线粒体超微结构的改变作了大量研究,同样发现脑缺血可引起线粒体肿胀,分解,消失,胞质密度增加。刘爱芬等［6］发现缺血再灌注损伤时可能导致线粒体结构变化的因素：膜通透性增强；线粒体内膜各复合物电子传递作用的破坏；活性氧产物的增加；释放促凋亡因子。其中通透性的改变是中心环节，通透性增强，大量小分子物质进入内膜，引起线粒体成分改变并发生肿胀，从而影响呼吸链功能，导致氧化磷酸化中断，三磷酸腺苷(ATP)合成减少，从而引起细胞凋亡［7］。

本实验结果显示,光镜观察：治疗组与模型组比较大脑皮质血管周围、神经细胞水肿带厚度和大脑纹状体血管周围、神经细胞水肿带厚度具有显著性统计学差异（P<0.05），治疗组与正常组比较，无显著性统计学差异（P>0.05）。说明川芎嗪可减轻大脑皮质水肿。电镜观察：治疗组大鼠缺血侧大脑皮质神经元大部分无明显水肿现象，胞质细胞器丰富,线粒体、内质网较规整，纹状体神经元可见核仁,细胞器丰富，细胞周围有水肿区减少或消失，皮质内血管周围水肿带缩小等。神经元凋亡减少。从而得出结论：川芎嗪可通过减轻大脑皮质水肿、减少神经元凋亡防治脑缺血再灌注损伤，达到脑保护作用。