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1材料
1.1动物SPF级SD大鼠，雌雄各半，体重（200±20）g，购自广州中医药大学实验动物中心，普通大鼠饲料喂养。
1.2药物姜黄素（Curcumin）、大黄素（Emodin），均购自陕西旭煌植物科技有限公司，经HPLC检测纯度达90%以上，使用前用0.5%羧甲基纤维素钠配制成不同浓度的混悬液。水飞蓟素（Silymarin，利加隆140胶囊），德国马博士大药厂生产，临用时用蒸馏水配成2.4mg/ml的供试品液。
1.3试剂DMN购自日本株式会社，使用前用生理盐水配成0.5%溶液备用。HA，LN，PCIII由北京北方生物技术研究所提供；TNF-α测试盒由北方生物试剂研究所提供；SOD，MDA，Hyp，考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒由南京建成生物工程研究所提供。甲醛、苏木素、伊红、酸性品红、戊二醛等。
1.4仪器7060型全自动生化分析仪、SN-695B型放免γ测量仪，上海原子核研究所日环仪器厂。UV-754型分光光度计，BX50显微镜，Olympus公司，2035石蜡切片机，德国Walldorf公司；E990数码摄像机，Nikon公司。
2方法
2.1分组、造模及给药随机取SD大鼠8只为正常对照组。其它大鼠进行造模。将1mlDMN原液溶于200ml生理盐水中，配制0.5%DMN溶液，避光保存，2周内使用。参照文献［2］给药，每只大鼠给予0.5%DMN（2ml/kg）腹腔注射，第1周前3d连续给2/3药量，后4d不给药，第2周开始前3d连续给全药量，后4天不给药，持续4周。正常对照组则给予相同量的生理盐水腹腔注射。造模结束后，将存活的大鼠随机分为6组，分别为模型对照组、水飞蓟素组、姜黄素高、低剂量组和姜大联用高、低剂量组,每组8只。正常对照组和模型对照组灌胃蒸馏水，水飞蓟素组用药量分别为人临床剂量的5倍，即0.024g/kg，姜黄素给药剂量为100mg/kg和200mg/kg，姜大联用剂量分别为50，10和100，20mg/kg。灌胃1次/d，每周灌6d。治疗4周后，实验结束。眼眶采血，分离血清，留取肝左叶固定。
2.2观察指标及方法①观察大鼠一般状态包括：饮食变化、行为及毛发改变等；②全自动生化分析仪检测大鼠血清ALT，AST，TP，ALB，A/G；③放免法检测HA，LN，PCIII，TNF-α含量；④肝组织标本HE和VG胶原染色，光镜观察；⑤α-SMA免疫组化染色：常规SABC法染色，DAB显色。
2.3肝胶原增生程度、肝纤维化分级采用Ishak法［3］0级：无肝纤维化；1级：纤维组织向部分汇管区扩大，伴有小纤维间隔；2级：纤维组织向大部分汇管区扩大，并伴有小纤维间隔；3级：纤维组织向汇管区扩大，并伴汇管区与汇管区桥接；4级：纤维组织向汇管区延伸，并有明显的汇管区与汇管区、汇管区与中央小叶区桥接；5级：纤维形成明显的汇管区与汇管区、汇管区与中央小叶区桥接，间或有假小叶形成；6级：肝内布满小圆形假小叶，假小叶内有粗大增生的胶原纤维（肝硬化）。
2.4统计方法计量资料以均数±标准差±s表示，采用F检验，两两比较用q检验，用统计软件SPSS11.0进行分析；计数资料采用Ridit分析。
3结果
3.1姜黄素、姜大联用对大鼠一般情况的影响正常对照组大鼠生长状态良好，体重增加显著，皮毛光滑，二便如常；大鼠注射DMN后，活动少，精神萎靡，喜睡少动，体重不增加甚至较前下降，尿黄，有腹泻，大鼠发生腹水产生率达70%。经姜黄素、姜大联用治疗后大鼠一般状态明显好于模型组，腹水的发生率明显降低。
3.2姜黄素、姜大联用对肝纤维化大鼠血清ALT，AST，TP，ALB，A/G的影响结果如表1。
从表1可以看出，经DMN造模后，大鼠血清中ALT、AST的含量升高，TP，ALB，A/G的含量明显下降，与正常对照组比较均差异显著（P<0.01）；经姜黄素、姜大联用治疗后，各组大鼠血清中ALT及AST的水平有不同程度降低，TP、ALB、A/G均有升高，与模型组比较有显著性差异（P<0.05或P<0.01），且存在一定的量-效关系。
3.3姜黄素、姜大联用对肝纤维化大鼠血清PCIII，HA及LN，TNF-α含量的影响结果见表2。
表1姜黄素、姜大联用对肝纤维化大鼠血清ALT，AST，TP，ALB及A/G的影响（略）
与正常对照组比较，**P<0.01；与模型组比较，ΔP<0.05,ΔΔP<0.01；n=8
表2姜黄素、姜大联用对大鼠血清PCIII，HA，LN，TNF-α含量的影响（略）
与正常对照组比较，**P<0.01；与模型组比较，ΔP<0.05,ΔΔP<0.01；n=8
从表2可以看出，使用DMN造模后，各组大鼠血清中HA，LN，PCIII，TNF-α含量明显升高，与正常对照组比较有显著性差异（P<0.01）；经姜黄素、姜大联用治疗后，大鼠血清中HA，LN，PCIII，TNF-α明显降低，与模型组比较，差异显著（P<0.05或P<0.01）。
3.4姜黄素、姜大联用对大鼠肝组织SOD，MDA，Hyp含量的影响结果见表3。
表3姜黄素、姜大联用对大鼠肝组织SOD，MDA，Hyp含量的影响（略）
与正常对照组比较，**P<0.01；与模型组比较，ΔP<0.05,ΔΔP<0.01；n=8
从表3看出，DMN造模后，各组大鼠肝组织中MDA及Hyp的含量明显升高，SOD的含量降低，与正常对照组比较有显著性差异（P<0.01）；经姜黄素、姜大联用治疗后，各治疗组大鼠肝脏组织中MDA、Hyp的含量降低明显，SOD含量上升，与模型组比较差异显著（P<0.05或P<0.01）。
3.5病理组织观察结果
3.5.1肉眼观察正常对照组大鼠肝脏呈红褐色，表面光滑，质软，颜色正常；模型组大鼠肝萎缩，表面较粗糙，色晦暗，部分肝表面有细小结节，质硬。姜黄素、姜大联用组肝组织略变小，表面欠光滑，质地较韧，颜色偏暗，均较模型组为轻。各组大鼠腹水发生、肝表面颗粒出现情况见表4。
表4姜黄素、姜大联用对大鼠腹水、肝脏表面颗粒的影响（略）
从表4可以看出，正常对照组大鼠未见腹水发生，肝脏表面无颗粒形成，模型组大鼠腹水发生率达87.5%，肝表面全部出现颗粒。经姜黄素、姜大联用干预后，二者的发生率均有不同程度的下降。
3.5.2HE染色观察正常对照组肝小叶结构正常，肝窦无扩张出血，汇管区及中央静脉血管壁清晰可见，管壁无增厚，管周无胶原纤维可见；模型组可见肝结构被破坏，肝小叶结构、肝索排列均紊乱，部分肝细胞肿胀，肝小叶中央区明显坏死，胶原纤维增生显著，部分形成假小叶；水飞蓟素组可见肝小叶样结构较正常，肝细胞体积略增大，有少量纤维组织增生，纤维化程度轻于模型组；姜黄素低剂量治疗组可见肝组织结构有一定的改善，肝小叶中央区可见肝细胞坏死，汇管区炎性细胞部分浸润，有少量纤维组织增生，未见假小叶形成；姜黄素高剂量治疗组肝小叶结构基本完整，炎性反应及坏死减轻，纤维组织增生不明显；姜大联用低剂量组肝组织结构改善较明显，未见肝细胞坏死，汇管区炎性细胞部分浸润，有少量纤维组织增生；姜大联用高剂量治疗组肝小叶结构基本完整，纤维组织增生不明显。
3.5.3VG染色观察正常对照组肝小叶结构正常，可见极少量胶原纤维主要分布于汇管区和中央静脉周围。模型组肝小叶结构被破坏，肝索排列紊乱，肝小叶被纤维间隔分割，形成大小不等的假小叶，由胶原纤维构成的纤