红景天苷心肌缺血范文

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1器材

1.1药品与试剂注射用红景天苷，由成都恒基医药科技有限公司提供，纯度大于90%；葛根素注射液，北京协和药厂生产；注射用盐酸地尔硫卓（合贝爽），天津田边制药有限公司进口分装；垂体后叶素注射液，上海第一生化药业有限公司生产；连二亚硫酸钠，天津市福晨化学试剂厂生产，分析纯；溴化-(4、5二甲基-2-噻唑基)-2、5二苯基四氮唑(MTT)，美国sigma公司出品；乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒及肌酸激酶(CK)试剂盒均购自南京建成生物工程研究所；其它试剂均为市售分析纯。

1.2仪器ECG-6511型心电图机，日本光电工株式会社出品；紫外可见分光光度计(TU-1800)，北京普析通用仪器有限责任公司出品；DG-5031型酶联免疫检测仪，华东电子集团医疗装备有限责任公司出品。

1.3动物SD大鼠，雌雄各半，（220±20）g，清洁级；SD孕大鼠，清洁级；均由河南省实验动物中心提供，许可证号：SCXK(豫)2005-0001。

2方法

2.1红景天苷对垂体后叶素所致大鼠急性心肌缺血的影响［3］SD大鼠70只，雌雄各半，随机分为7组。分别为正常对照组和模型组（均给予等量生理盐水），葛根素组（12.0mg/kg），地尔硫卓组（1.5mg/kg），红景天苷高、中、低剂量组（24.0，12.0，6.0mg/kg）。以上各组以不同浓度等容积给药0.5ml/kg。

将大鼠用3％的戊巴比妥钠以40mg/kg的剂量腹腔注射麻醉后，仰卧位固定，记录一段正常心电图（S点不高于基线为合格，异常者弃去不用）。静脉给药5min后尾静脉注射脑垂体后叶素0.75U/kg［4,5］，给药容积为1.0ml/kg，注射速度为5～10s。记录注射后5，10，30s，1，2，5，10，20min的Ⅱ导联心电图，观察T波和J点的变化。

2.2红景天苷对心肌细胞的影响

2.2.1对缺氧/复氧（Na2S2O4）所致心肌细胞损伤的影响根据文献［6～8］方法体外培养原代乳鼠心肌细胞。

取生长良好的细胞随机分为正常组（给予等量PBS液）；模型组（给予等量PBS液）；葛根素组（终浓度为10-5mol/L）；盐酸地尔硫卓组（终浓度为10-5mol/L）；红景天苷高、中、低剂量组(终浓度分别为10-4，10-5，10-6mol/L)。每组6个孔，加入药物4h后除对照组外均加入Na2S2O4（终浓度为5mmol/L），刺激细胞1h。缺氧损伤1h后，换去细胞培养液为正常含血清DMEM培养液继续培养1h［9，10］。用MTT染色法测定96孔培养板内心肌细胞的活力(A570表示)。取培养液测定其中LDH和CK的含量。

2.2.2对H2O2诱导心肌细胞损伤的影响［11］取生长良好的细胞随机分组同“2.2.1”。每组6个孔，加入药物4h后再加H2O2（终浓度为0.5mmol/L）刺激细胞4h。用MTT染色法测定96孔培养板内心肌细胞的活力(A570表示)。取培养液测定其中LDH和CK的含量。

2.3统计学处理实验数据用±s表示。采用单因素方差分析进行组间显著性比较，两组间样本均数比较采用t检验，P<0.05认为有统计学差异。

3结果

3.1红景天苷对垂体后叶素所致大鼠心肌缺血的影响与对照组比较，给予垂体后叶素后，模型组出现明显的T波抬高(P<0.01)，持续30s，随后T波降低。与模型组相比，红景天苷高剂量组(24.0mg/kg)于5，10s时能明显抑制T波抬高(P<0.01)；中剂量组(12.0mg/kg)于5，10s时也可抑制T波抬高(P<0.05)；低剂量组(6.0mg/kg)不能抑制T波抬高。红景天苷高、中剂量组作用强度与地尔硫卓组(1.5mg/kg)和葛根素组(12.0mg/kg)比较无显著差异（P>0.05）。结果见表1。

与对照组比较，给予垂体后叶素后，模型组出现明显的J点升高(P<0.01)，且持续至药后20min尚未恢复。与模型组相比，红景天苷高、中剂量组（24.0，12.0mg/kg）能显著抑制J点升高(P<0.01)，低剂量组6.0mg/kg无明显作用。红景天苷高、中剂量组作用强度与地尔硫卓组1.5mg/kg和葛根素组12.0mg/kg比较无显著差异（P>0.05）。结果见表2。

表1红景天苷对垂体后叶素所致心肌缺血大鼠T波的影响（略）

与对照组比较，**P<0.01；与模型组比较，##P<0.01，#P<0.05；n＝10

表2红景天苷对垂体后叶素所致心肌缺血大鼠J点的影响（略）

与对照组比较，**P<0.01；与模型组比较，##P<0.01，#P<0.05；n＝10

3.2红景天苷对乳鼠心肌细胞的影响

3.2.1对缺氧/复氧（Na2S2O4）所致心肌细胞损伤的影响与对照组比较，模型组的细胞存活率明显下降，差异有显著性（P<0.01）；培养液中的LDH和CK的含量也显著升高（P<0.01），均表明心肌细胞活性下降，损伤较严重。与模型组比较，红景天苷高、中、低剂量组均可显著升高A570的细胞存活率，均可显著降低培养液中的LDH和CK的含量，说明红景天苷对缺氧/复氧损伤的心肌细胞有一定的保护作用。结果见表3。

表3红景天苷对缺氧/复氧所致心肌细胞损伤的影响（略）

与对照组比较，**P<0.01；与模型组比较，##P<0.01；n=6

3.2.2红景天苷对H2O2诱导心肌细胞损伤的影响与对照组比较，模型组的细胞存活率明显下降，差异有显著性（P<0.01）；培养液中的LDH和CK的含量也显著升高（P<0.01），均表明心肌细胞受到严重损伤，活性下降。与模型组比较，红景天苷高、中、低剂量组均可显著升高A570的细胞存活率，均可显著降低培养液中的LDH和CK的含量，说明红景天苷具有显著的抗氧化损伤能力，对氧化损伤的心肌细胞有一定的保护作用。结果见表4。

表4红景天苷对H2O2诱导心肌细胞损伤的影响（略）

与对照组比较，**P<0.01；与模型组比较，##P<0.01；n=6

4讨论

垂体后叶素诱发的急性心肌缺血动物模型广泛应用于筛选抗心肌缺血药物的研究［12］。静脉注射垂体后叶素后心电图立刻发生变化，可分为两期：第1期，注射后5～20s，T波显著升高，ST段明显抬高；第2期，注射后30s至数分钟，ST段下移,T波降低、平坦、双相或倒置。该实验给予大鼠垂体后叶素后，模型组立刻出现明显的T波抬高，持续30s，随后T波降低；同时出现明显的J点升高并持续较长时间，表明大鼠发生急性心肌缺血。预先给予药物后，观察到红景天苷对第1期中的T波升高和J点抬高都有显著的抑制作用，对第2期的T波降低也有一定的抑制作用，表明红景天苷对垂体后叶素所致的大鼠心肌缺血有较明显的保护作用。

研究发现氧自由基的产生及脂质过氧化物反应增强与心肌缺血损伤的病理改变关系密切。心肌缺血时由于氧自由基生成增加，导致细胞膜的结构和功能损伤，从而加剧缺血心肌的组织损伤及功能障碍。

本实验的缺氧/复氧模型中，Na2S2O4处理细胞存活率明显下降，培养液中LDH和CK活性增高，表明心肌细胞抗氧化损伤能力下降，细胞发生了氧自由基损伤；给予红景天苷后，能够明显提高心肌细胞的存活率，同时显著降低LDH和CK的含量。LDH和CK是细胞内的酶，当机体细胞膜受到损伤时，膜的流动性降低，细胞内物质的释放量会大大增加。红景天苷可减少细胞内酶的释放，表明该药物可以保持细胞的结构完整，维持细胞膜的相对稳定，保护细胞不受氧自由基的损伤。同时LDH和CK含量的减少还可间接增强细胞清除氧自由基的能力，降低细胞脂质过氧化程度，因而可以保护缺血/再灌后的心肌细胞。

过氧化氢(H2O2)是有机体氧化代谢产物，同时是一种活性氧，大量堆积会对心肌细胞产生细胞毒性，造成心肌细胞的严重损伤。本实验中，红景天苷可以提高H2O2处理后的心肌细胞存活率，降低H2O2处理后培养液中LDH和CK的含量，表明该药物可明显减少H2O2造成的心肌细胞的脂质过氧化反应和膜损伤，可以提高心肌细胞抗氧化损伤能力。