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急性心肌梗塞(acutemyocardialinfarctionAMI)是一种严重威胁人类健康和生命的疾病,心肌梗塞后心室重构可导致心律失常、心功能不全、室壁瘤或心脏破裂等后果,严重影响患者的生活质量和生存率。因此,减缓或逆转心室重构是防治心肌梗塞后严重并发症的关键。目前中医药对心肌梗塞后左室重构的研究较少,本研究旨在探讨通冠胶囊(主要成分为黄芪、丹参等,具有益气、活血、宽胸、通络之功效)对大鼠心肌梗塞后左室重构的影响。
1材料与方法
1.1动物健康清洁级SD大鼠40只(雄性,体重150~180g),由广州中医药大学实验动物中心提供(合格证号0011122)。
1.2设备及仪器多导联生理记录仪HOGOSACHSELEKTRONIK79232MarchF.R.Germany,TKR-200C小动物呼吸机(江西特力麻醉呼吸设备公司),电子天平(德国赛多利斯公司),SN-695B型放免测量仪(上海原子核所日环仪器厂)。
1.3试剂ALD、A-Ⅱ试剂盒(批号070225,北京科关东雅生物技术有限公司),通冠胶囊(36粒/瓶,每粒0.5g,批号06092602,生产日期2006²09²26,广州中医药大学第二附属医院院内制剂),卡托普利(开搏通,上海施贵宝制药有限公司),PBS溶液(NaCl42.5g,NaH2PO4·2H2O1.5g,Na2HPO414.5g,三蒸水2000ml,使用前高压消毒)。
1.4动物分组SD大鼠40只,AMI模型通过结扎大鼠左前降支(LAD)获得,存活28只,随机分为假手术组(n=6)、AMI对照组(n=8)、AMI卡托普利组(n=7)、AMI通冠胶囊组(n=7)。卡托普利组予灌卡托普利(0.5mg/100g),通冠胶囊组灌予通冠胶囊溶剂(1g/100mg),余两组均灌等量生理盐水,各组每周称体重后调整剂量,灌药持续4周。
1.5模型制备采用结扎大鼠冠脉LAD制备AMI模型。腹腔内注射10%水合氯醛(0.3~0.35mg/100g)实施麻醉,左胸前备皮3.5cm×3.5cm,暴露皮肤,安乐碘消毒2次。标准导联方式皮下连接体表心电图,行术前心电图检查并记录。连接呼吸机,行经口气管插管,调节呼吸机参数,频率为90次/min,保证有效通气量为1.0ml/(g·min)。左胸前3、4肋间隙依次剪破皮肤、胸膜,分离胸大肌、胸小肌,避免损伤内乳动脉和肺脏,暴露心脏,上推胸腺,剪开心包。观察冠脉分布,于左心耳肺动脉圆锥左缘处粉红色动脉下1~2mm处,用无创缝合针引8-0缝合线穿过,并结扎第1道线,观察结扎环下心肌颜色变为苍白,心电图示ST段抬高表示成功,再结扎第2道线。迅速清理胸腔内淤血,鼓肺,层层缝合胸膜、胸肌、皮肤。术中密切观察大鼠生命体征,术后注意暖箱保暖。假手术组不结扎冠脉,余同上述操作。
1.6检测指标体重、左心室重量、心脏重量、左室重量指数(左心室重/体重)、心脏重量指数(心脏重/体重)、血浆醛固酮(ALD)、心肌血管紧张素II(A-Ⅱ),心肌组织胶原。
1.7检测标本的采集将各组大鼠麻醉后,称重,常规消毒,然后沿腹正中线剪开腹腔,腹主动脉取血2ml置肝素管中,离心取血浆2ml,于-20℃冰箱保存,待测血浆醛固酮(ALD);随即取出心脏先用滤纸将心脏拭干,用电子天平称取心脏重量,然后将左心室分离,称取其重量,沿左心室冠状面直径最大处剪取2mm厚度心肌(梗塞区)置于10%甲醛固定、保存待查心肌胶原含量,将剩余心肌去除左右心耳并大血管后称重,剪碎,与PBS液一起置于研磨器中,在低温环境下研磨,将研磨液置于离心管中,在4℃环境下,10000r/min离心,取上清液1.5ml于EP管中低温(-20℃)保存,待测心肌局部血管紧张素Ⅱ(A-Ⅱ)。
1.8统计学处理所有计量资料均采用t检验,均由SPSS13.0软件包处理,以P<0.05表示有显著统计意义。
2结果
2.14周后AMI大鼠心脏重量、左心室重量、心脏重量指数、左心室重量指数的变化4周后AMI对照组、卡托普利组和通冠胶囊组大鼠体重均较假手术组减轻(P<0.01);卡托普利组和通冠胶囊组体重分别与AMI对照组比较,均重于后者,两组均有显著统计意义(P<0.01);卡托普利组和通冠胶囊组比较无统计意义(P>0.05)。心脏重量、左心室重量、心脏重量指数和左心室重量指数等各项指标,AMI对照组、卡托普利组和通冠胶囊组均高于假手术组,比较有显著统计意义(P<0.01);其中,卡托普利组和通冠胶囊组分别与AMI对照组比较,卡托普利组和通冠胶囊组均低于后者(P<0.01);卡托普利组和通冠胶囊组比较,无统计意义(P>0.05)。提示结扎大鼠LAD对大鼠体重和心脏重量有一定影响,且对心脏重量影响更大;而服用卡托普利或通冠胶囊能够减少这种影响,两组之间影响力无统计差异。见表1。
表14周后大鼠体重、心脏重量指数、左心室重量指数的变化(略)
与假手术组比较,*P<0.01;与AMI对照组比较,#P<0.01;与卡托普利组比较,△P<0.01
2.2心肌局部血管紧张素Ⅱ(A-Ⅱ)、血浆醛固酮(ALD)的变化4周后检测大鼠A-II、ALD,对照组、卡托普利组和通冠胶囊组与假手术组比较有显著统计学意义(P<0.01);卡托普利组和通冠组分别与对照组比较,两组均有显著统计意义(P<0.01);通冠组与卡托普利组A-II含量比较有显著统计意义(P<0.01);通冠组与卡托普利组ALD含量比较,无统计意义(P>0.05)。提示结扎大鼠LAD能够显著升高心肌局部A-II和血浆ALD水平,卡托普利组和通冠组能明显降低这两项指标,通冠胶囊组降低A-II的作用较卡托普利组更明显,ALD则在两组之间无统计差异。见表2。
图1~2显示心肌细胞排列整齐,未见炎性细胞浸润,未见明显胶原增生;由图3~4可见梗塞区心肌细胞坏死,为广泛胶原纤维所代替,非梗塞区心肌细胞肥大,排列紊乱,间质胶原增生;由图5~6可见,与AMI对照组比较,心肌细胞体积减小,心肌纤维排列相对整齐,胶原有所减轻;由图7~8可见,与AMI对照组比较,心肌细胞体积变小,心肌纤维排列相对整齐,胶原有所减轻。与卡托普利组比较,心肌细胞排列略见紊乱。
3讨论
急性心肌梗塞后心室重构指心肌梗塞后心室大小、结构、形态以及心脏功能的变化过程,主要包括心肌梗塞区膨出、非梗塞区心肌肥大、室壁增厚、心肌间质纤维化,最终导致整个心室进行性扩张、失去正常的心腔形态、心脏收缩功能减低