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【摘要】目的建立鸡血藤的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法测定了原儿茶酸的含量，C18色谱柱（250mm×4.6mm,5μm），流动相为甲醇-水-冰醋酸（25:75:0.2），流速1.0ml/min，检测波长260nm。结果原儿茶酸与样品中其他组分分离效果较好，原儿茶酸在31.1～93.3μg范围具有良好线性关系，相关系数r=0.9996；平均回收率为99.49%,RSD为1.58%（n=6）。结论采用此法测定鸡血藤中原儿茶酸的含量，准确可靠，可用于该药材的质量控制。
【关键词】鸡血藤原儿茶酸高效液相色谱法
【Abstract】ObjectiveToestablishthemethodofdetemtemineforSpatholobussuberectusDunn.MethodshplcmethodwasdevelopedforthedeterminationofprotocatechuicacidinSpatholobussuberectusDunn.TheseparationwasperformedonC18columnwithmethylalcohol-water-HAC（25:75：0.2）asamobilephasewheretheflowratewas1.0mL/min.Thedetectionwavelengthwassetat260nm.ResultsAsatisfactoryseparationbetweenprotocatechuicacidandimpuritywasobtained.Thecalibrationcurvewaslinearovertherangefrom31.1～93.3μg，r=0.9996；Theaveragerecoverywas99.49%,andRSD为1.58%（n=6）.ConclusionThemethodwasaccurateandcanbeusedforthedetemrminationofconstituentsforSpatholobussuberectusDunn.
【Keywords】spatholobussuberectusdunn;protocatechuicacid;HPLC
鸡血藤为豆科植物鸡血藤SpatholobussuberectusDunn的干燥藤茎，别名血风藤、大血藤、血风、活血藤。鸡血藤为常用活血化瘀中药，具有补血、活血、通络作用【1】。《中国药典》收载了1个种，主要分布在广西、云南、贵州等地，鸡血藤可极显著的使环磷酰胺致贫血小鼠的红细胞值、血红蛋白值和白细胞值上升【2】，能扩张外周血管,增加器官血流量,实验证实对犬股动脉有明显扩张作用【3】，对免疫系统具有双向调节作用【3】,能降低血脂、抗动脉样硬化作用【4】。鸡血藤中含有多种化学成分，但《中国药典》中并无含量测定方法，为此，笔者采用HPLC法测定了鸡血藤药材中原儿茶酸的含量，方法简便、灵敏、准确，对鸡血藤药材的质量鉴定有一定的参考价值。
1仪器与试药
高效液相色谱仪：岛津LC-10A液相色谱仪，
SPD-10A紫外检测器，南宁威玛龙色谱工作站，HT-230A柱温箱。色谱柱为Diamonsil（TM）钻石C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；LIBRORAEL-160型万分之一电子分析天平；DS-250A（功率）型超声清洗仪。原儿茶酸对照品（批号：809－200102）购自中国药品生物制品检定所；鸡血藤药材产自广西、云南、贵州，由贵州大学生物与科学学院生物系关平教授鉴定为SpatholobussuberectusDunn的干燥根茎。甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。
2方法与结果
2.1色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水-冰醋酸（25:75:0.2）为流动相；检测波长为260nm。理论塔板数按原儿茶酸峰计算应不低于3000。对照品与样品色谱图见图1。
2.2对照品溶液的制备精密称取原儿茶酸对照品适量，加酸性水（100ml水中加1mol/L的HCL0.5ml）制成每1ml含3μg的溶液，即得。
2.3供试品溶液制备取本品细粉1g，精密称定，加水回流2次，每次20ml，滤过，合并滤液并浓缩至约2ml，加入甲醇10ml，滤过，滤液挥干，再加入乙酸乙酯20ml和1mol/L的盐酸0.5ml，超声30min，滤过，滤液挥干，残渣加20ml酸性水（100ml水中加1mol/L的HCL0.5ml）超声5min使溶解，滤过，滤液过微孔滤膜，作为药材供试品。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各l0μl，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件，以外标法计算含量。见图1、图2。
2．4线性关系考察精密量取原儿茶酸对照溶液配制成1、2、3、4、5μg/ml，分别取10μl注入高效液相色谱仪，进行原儿茶酸含量测定，以原儿茶酸峰面积A对原儿茶酸浓度C进行线性回归，线性回归方程：A=46033C－289.75，线性范围：0.01～0.05μg，相关系数r=0.9996。根据实验结果，原儿茶酸在0.01～0.05μg范围内，峰面积与进样量呈良好的线性关系。
2.5精密度考察取同一对照品，分别重复进样6次，测定结果，对照品溶液中原儿茶酸RSD=0.50%（n=6）。
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sp;2.6重复性试验取本品6份，精密称定样品，按【样品含量测定】项下的方法操作，制成供试品溶液，测定原儿茶酸的平均含量为57.48μg/g，RSD为1.76%。2.7稳定性试验将供试品溶液在室温下贮存，于0、2、4、6、8h测定，结果样品溶液在8h内稳定，RSD为1.77%。
图1原儿茶酸对照品HPLC色谱图图2样品HPLC色谱图2.8加样回收率试验精密称取已知含量的样品共6份，分别加入等量原儿茶酸对照品，照供试品方法制备，测定含量，原儿茶酸平均回收率为98.32%,RSD=1.64%（n=6），结果见表1。表1原儿茶酸回收率实验结果
2.9不同产地鸡血藤中原儿茶酸的含量测定按2.3项下方法,制备供试品溶液,测定3个产地鸡血藤药材中原儿茶酸的含量,测定结果见表2。
3讨论
3．1原儿茶酸属有机酸，极性较大，选择反相色谱法，流动相选择甲醇：水（15：85）的体系，出峰时间较长，且峰形较宽；选用甲醇：水（25：75）的体系，出峰时间适中，峰形仍较宽；故选用甲醇：水：冰乙酸（25：75：0.2）的体系，出峰时间约为9min，峰形尖锐，理论板数达到3000以上，达到分离要求。表2不同产地鸡血藤中原儿茶酸的
3．2鸡血藤粉末采用不同提取方法包括50%、80%甲醇索氏提取4h，50％、80％甲醇回流提取2h，醋酸乙酯超声30min，醋酸乙酯加水（1：1）超声30min，水提取醇沉后乙酸乙酯萃取；发现水提取醇沉后乙酸乙酯萃取的方法，含量较高且分离度也好，但是萃取过程中的重复性差，考虑到有机酸在酸性水中用乙酸乙酯萃取效果较好，试用少量酸性水加乙酸乙酯直接超声的方法，获得了含量较高且分离度也好的结果，最后的定量溶液用酸水不用甲醇也是为了达到较好分离效果而定的。
3．3由于市售的鸡血藤药材混用品较多，因此制订鸡血藤药材的质量标准是非常必要的，从高效液相结果可以看出，用原儿茶酸检测鸡血藤药材质量是可行的。笔者认为，如果在定性检测芒柄花素的同时，能加上原儿茶酸的含量测定，就能更好的控制鸡血藤药材的质量。
【参考文献】
1国家药典委员会.中国药典（一部）.北京：化学工业出版社，2005，134.
2罗霞，陈东辉，余梦姚,等.鸡血藤煎剂对小鼠红细胞增值的影响.中国中药杂志，2005,30（6）:477-479.
3崔艳君,陈若芸.鸡血藤化学和药理研究进展.天然产物研究与开发,2002，15（4）：72-78.
4王巍.鸡血藤、鬼箭羽和土鳖虫调脂作用的比较.中国中药杂志，1991，16（5）：299-301.新晨