RPHPLC法测定复方鱼腥草片中金丝桃苷含量范文

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作者：黄秀红，冯灵平，廖建维，熊吉

【摘要】目的用RP-HPLC法测定复方鱼腥草片中金丝桃苷的含量。方法HPLC用外标一点法，KromasilC-18柱，乙腈-0.1%磷酸溶液（18：82）为流动相，柱温为30℃，流速为1.0ml/min，λ=360nm。结果金丝桃苷在0.0675～1.35μg范围内呈良好线性,回归方程为Y=20.345X-12.118，R2=0.9999，平均加样回收率100.5%，RSD%为1.4%（n=9）。结论方法简便、准确，专属性强，测定结果重复性好。为复方鱼腥草片中鱼腥草的定量分析提供了科学有效的方法。

【关键词】复方鱼腥草片；金丝桃苷；HPLC

【Abstract】ObjectiveToestablishthemethodfordeteminingthecontentofhyperosideinFufangYuxingcaoPionbyRP-HPLC.MethodsUsingKromasilC18Column,acetonitrile-0.1%phosphoricacidsolution（18：82）asthemobilephase,detectionwavelengthas360nmandcolumntemperatureas30℃.Theflowratewas1.0ml/min.ResultsThecalibrationcurvewaslinearatarangeof0.0675～1.35μgforthehyperosideandlinearequationwasY＝20.345X-12.118R2＝0.9999.Theaveragerecoverywas100.5%andtherelatedstandarddeviation（RSD）was1.4%（n=9）.ConclusionThismethodwassimpleandaccurateandproper,whichcanbeprovideforscientificquantitativeanalysismethodofhyerosideinFufangYuxingcaoPion,andthereduplicateoftheresultwasgood.

【Keywords】fufangyuxingcaobrt；hyperoside；RP-HPLC

复方鱼腥草片为《中国药典》收载品种，亦为民间常用药，具有清热解毒的功效，用于外感风热所致的急喉痹、急乳蛾，症见咽部红肿、咽痛；急性咽炎、急性扁桃体炎见上述症候者。本方由鱼腥草、黄芩、金银花、连翘等5味中药经提取加工制成。据现行药典及多数文献的报道，对复方鱼腥草片的质量控制多以黄芩苷作为指标进行研究。而在实际处方中，鱼腥草所占的量高达一半以上，为君药，故控制其中的鱼腥草的含量极其必要。现经实验论证，对方中的鱼腥草中所含的金丝桃苷的含量测定方法进行方法学研究，认为线性、重复性、回收率、精密度等均较理想。

1仪器与试药

Agilent1100系列高效液相色谱仪、G1322A（DEGASSER）溶剂脱气器、G1311A（QuatPump）四元泵、G1313（ALS）自动进样器、G1316A（COLOM）柱温箱、G1315B（DAD）检测器及Agilent工作站；UV－可见紫外分光光度计（SHIMADZU）；乙腈为色

谱纯，其余均为分析纯；对照品金丝桃苷Hyperoside（批号1521-200202）购于中国药品生物制品检定所；样品复方鱼腥草片由海正药业提供（批号为050301，050302，050303）。

2测定方法的研究

2.1测定波长的确定取金丝桃苷的甲醇溶液做光谱图测定，在360nm处有最大吸收，故检测波长选定360nm。

2.2流动相的选择根据文献报道及《中国药典》的采用的流动相，比较了（1）乙腈-甲醇-四氢呋喃（1：1：19.4：78.6）；（2）乙腈-0.1%磷酸（16:84），并设定柱温为30℃。根据上述二种流动相的实验结果，认为流动相（2）较理想。经调整，将“色谱条件与系统适用性试验”确定为用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.1%磷酸（W/V）（18：82）为流动相；流速为1.0ml/min；检测波长：360nm；柱温30℃。理论板数按金丝桃苷峰计算应不低于4000。色谱图1、2、3。图1金丝桃苷对照品色谱图2复方鱼腥草片样品图图3缺鱼腥草阴性样品

图

2.3提取方法选择经查阅相关资料，对提取方法、提取溶剂、溶剂用量、提取时间进行考察，采用正交表L9（34）进行实验。见表1，2。表1复方鱼腥草片含量测定法正交试验的因素表2复方鱼腥草片含量测定法正交试验的计算

从对金丝桃苷进行正交试验的简单计算来看，其中提取方法的影响相对较为明显，它的极差最大，其余各项的极差小，说明这些因素对金丝桃苷几乎没有什么影响。结合经济和环保等因素以及相对比较考虑，认为最佳的提取方案为采用60%的乙醇，加入样品50倍量的溶剂，回流提取40min。按此条件，又对同一批样品进行复核试验，根据复核试验的结果，金丝桃苷的平均含量为0.3512mg/g，与正交试验中的最大值0.3440mg/g相比较提高2.1%，由此证明所选最佳方案比较合理的。

2.4标准曲线、定量限、检测限将对照品金丝桃苷配制成不同浓度的溶液，如表3。表3线性关系考察

2.5对照品溶液及供试品溶液的制备

2.5.1对照品溶液的配制取经真空干燥24h的金丝桃苷对照品12.5mg，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇使溶解，并稀释至刻度，摇匀备用。精密吸取上述对照品溶液1ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成每1ml含金丝桃苷25μg的溶液，作为对照品溶液。

2.5.2供试品溶液的制备取本品20片，除去包衣，精密称定，研细，取1.0g，置圆底烧瓶中，精密加入60%乙醇50ml，称定重量，加热回流提取40min，放冷，再称定重量，用60%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液25ml，蒸干，残渣加60%乙醇溶解并定容到5ml量瓶中，摇匀，以微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.5.3测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

2.6重复性试验取批号为050301的本品，按上述供试品溶液的制备方法，制备6份样品，按法测定，结果见表4。表4重复性试验结果

2.7回收率试验精密称取本品（批号：050301）测定量的半量按高、中、低取样品各3份，分别加入浓度为0.1510mg/ml的金丝桃苷对照品溶液1.2、1.0、0.8ml，按上述供试品溶液的制备方法，按法测定。见表5。表5回收率试验结果

2.8精密度和稳定性实验取批号为050301的样品1.0g，精密称定，按制备方法制成供试品溶液，同法测定6次，金丝桃苷的RSD为0.3%。见表6。表6精密度试验取同一样品分别在0、1、2、4、12、24h测定，金丝桃苷的RSD为0.4%，说明该成分在制剂中提取后较为稳定。见表7。表7稳定性试验

2.9样品测定取批号为050301、050302、050303的三批复方鱼腥草片样品，分别进行测定，结果见表8。表8样品测定表由上述结果可知，此含量测定方法可运用于复方鱼腥草片中金丝桃苷的含量测定。

3讨论

本品样品的制备条件，经按正交设计多因素提取比较，也进行了方差分析，结果几乎不呈显著性，说明金丝桃苷在所设的因素中互相影响较小，也说明它在甲醇和乙醇中溶解性都比较好。为此做了简单的计算得出了比较合理的样品溶液的制备方法。

对鱼腥草药材的含量也做了测定，鱼腥草药材含金丝桃苷为0.32mg/g,按制剂中每片含有鱼腥草的量来计算,计算金丝桃苷的转移率为80%以上。由于本品中含的鱼腥草大部分为生药粉，所以制剂中的转移率相对比较高，也使得本品在临床治疗感冒的效果比较好新晨