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【摘要】建立hplc法测定抗骨质增生丸中淫羊藿苷的含量。方法用DiamonsilC18（4.6mm×200mm，5μm）色谱柱，流动相：乙腈-水（26：74），流速：1.0ml/min，检测波长：270nm。结果淫羊藿苷在0.04052～0.5065μg范围内与峰面积线性关系好，r=0.99995，平均回收率为99.4%，RSD为0.6%（n=6）。结论本法测定简便，结果准确，重复性和分离度好，可用于抗骨质增生丸的质量控制。
【关键词】HPLC淫羊藿抗骨质增生丸含量测定
【Abstract】ObjectiveToestablishaHPLCmethodforthedeterminationoficariininKangguzhizengshengpills.MethodsADiamonsilTMC18column（200mm×4.6mm,5μm）wasusedwithamobilephaseofacetonitrile-water（26:74）.Theflowratewas1.0ml·min-1andthedetectionwavelengthwas270nm.ResultsThelinearrangewasat0.04052?g～0.5065?g（r=0.99995）andtheaveragerecoverywas99.4%withRSD0.6%（n=6）.ConclusionThedeterminationmethodissimpleandaccurateanditcanbeusedforthequalitycontrolofKangguzhizengshengpills.
【Keywords】HPLC;icariin;Kangguzhizengshengpills;determination
抗骨质增生丸为卫生部药品标准中药成方制剂第一册收载的品种［1］，由熟地黄、淫羊藿、肉苁蓉等九味中药组成，具有补腰肾、强筋骨、活血、止痛等功效。用于治疗增生性脊椎炎、颈椎综合征、骨刺等骨质增生症。原标准中无含量测定方法，方中淫羊藿为主要药味,其有效成分为淫羊藿苷。有关淫羊藿苷的含量测定方法，主要为HPLC法［2，3］。为能有效地控制药品质量，本研究用HPLC测定淫羊藿苷，建立质量控制标准。
1仪器与试药
ShimadzuHPLC色谱仪（ShimadzuLC-20ALiquidChromatograph,ShimadzuSIL-20AAutoSampler,ShimadzuSPD-M20ADiodeArrayDetector,ShimadzuCTO-10ASVPColumnOven）LCSolution色谱工作站。水为I级纯化水，乙腈为色谱纯，其他为分析纯。淫羊藿苷对照品购自中国药品生物制品检定所（批号：110737-200312）。抗骨质增生丸：山东临清华威药业有限公司生产（批号：20060507、20060601）。
2试验方法与结果
2.1色谱条件色谱柱：DiamonsilC18柱（4.6mm×200mm，5μm），柱温：35℃，流动相：乙腈-水（26：74），流速：1.0ml/min，检测波长：270nm。
2.2溶液的制备
2.2.1对照品溶液的制备精密称取淫羊藿苷对照品10.13mg，加甲醇制成每1ml含淫羊藿苷20.26μg的溶液，备用。
2.2.2供试品溶液的制备取本品，剪碎，混匀，取3g，精密称定，加等量硅藻土，置索氏提取器中，加氯仿40ml，加热回流2h，弃去氯仿液，药渣挥干，精密加甲醇50ml，称重，超声1h，加甲醇补足重量，摇匀，滤过，取续滤液。
2.2.3阴性对照溶液的制备取缺淫羊藿的处方，按供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液。
2.3系统适用性试验分别取对照品溶液、样品溶液、阴性对照溶液进样10μl，色谱图见图1。淫羊藿苷峰保留时间为20.9min，阴性对照色谱图在淫羊藿苷峰位置无干扰峰。
2.4线性关系考察精密吸取对照品溶液2、5、10、20、25μl，按上述色谱条件测定，以峰面积为纵坐标，以进样量为横坐标，进行线性回归，得方程：Y=-4.80×103+2.26×106X，r=0.99995，线性范围为0.04052～0.5065μg。
图1HPLC色谱图2.5精密度试验取对照品溶液连续进样7次，每次10μl，峰面积积分值RSD=0.8%
2.6重复性试验取同一批号（20060601）样品6份，按供试品液制备方法制备，依法测定，结果淫羊藿苷含量RSD=1.0%，表明本法重复性好。
2.7稳定性试验取同一样品溶液（20060601）在0、6、12、24h分别进样10μl，依法测定，淫羊藿苷峰面积RSD=0.5%，表明样品溶液在24h内稳定。
2.8加样回收试验取已知含量的样品（20060601），精密加入淫羊藿苷对照品适量，按样品测定方法测定含量，计算回收率，结果见表1。表1回收率试验结果
2.9样品测定取6批样品，按2.2.2项下方法制备样品溶液，依法测定淫羊藿苷的含量，结果见表2。表2&
nbsp;6批样品含量测定结果
3讨论
3.1考察流动相中乙腈对淫羊藿苷保留时间和分离度的影响曾采用抗骨增生胶囊中测定淫羊藿苷的流动相乙腈-水（30：70）［4］，乙腈-水（28：72）、乙腈-水（27：73），结果表明乙腈量增大，保留时间提前，但分离效果差，与杂质峰无法分离，以乙腈-水（26：74）较合适。
3.2本实验考察了供试品溶液的提取方法（索氏提取与超声处理）和提取时间，结果索氏提取2h，能除去大部分干扰杂质，超声处理1h后继续超声，含量不再增加，故采用此提取方法。
【参考文献】
1卫生部药品标准中药成方制剂，第一册，86.
2干国平,李水清,张莲萍,等.HPLC法测定更年灵胶囊中淫羊藿苷的含量.中国药师,2006,9（8）:743-744.
3洪行球,黄燕芬.HPLC测定乳腺康颗粒剂中淫羊藿苷的含量.中成药,2004,26（2）:165-167.
4国家药典委员会.中国药典，一部.北京：化学工业出版社，2005，470-471.新晨