HPLC法测定双黄消炎片中盐酸小檗碱含量范文

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【摘要】目的用hplc法测定双黄消炎片中盐酸小檗碱的含量。方法HPLC用外标一点法，DiamonsilODS1C18柱，乙腈-0.033mol/L磷酸二氢钾溶液（35:65）为流动相，流速为1.0ml/min，λ=265nm。结果盐酸小檗碱在13.525～108.20μg/ml范围内呈良好线性,回归方程为Y=63204.63X+4501.15，r=0.9993，平均加样回收率99.8%，RSD为1.59%（n=5）。结论方法简便、准确，专属性强，测定结果重复性好，为双黄消炎片中盐酸小檗碱的定量分析提供了科学有效的方法。

【关键词】双黄消炎片盐酸小檗碱HPLC

【Abstract】ObjectiveToestablishthemethodfordeteminingthecontentofBerberinehydrochlorideinshuanghuangxiaoyanPianbyHPLC.MethodsUsingDiamonsilODS1C18Column,acetonitrile-0.033mol/LPotassiumPhosphateMonobasicacid（35：65）asthemobilephase,detectionwavelengthas265nmandflowratewas1.0ml/min.ResultsThecalibrationcurvewaslinearatarangeof13.525～108.20μg/mlfortheBerberinehydrochlorideandlinearequationwasY=63204.63X+4501.15r=0.9993.Theaveragerecoverywas99.8%andtherelatedstandarddeviation（RSD）was1.59%（n=5）.ConclusionThismethodwassimpleandaccurateandproper,whichcanbeprovideforscientificquantitativeanalysismethodofBerberinehydrochlorideinshuanghuangxiaoyanPianandthereduplicationoftheresultwasgood.

【Keywords】shuanghuangxiaoyanPian；Berberinehydrochloride；HPLC

双黄消炎片收载于部颁药品标准中药成方制剂第二册中，功能主治：消炎，用于咽喉疼、腹泻、痢疾、慢性痢疾。处方由三颗针、黄芩组成，原标准中只鉴别项检查，没有含量控制项。为了更好地控制双黄消炎片的质量，笔者对双黄消炎片处方进行了分析，本处方中的君药三颗针为小檗科植物，小檗碱为三颗针的主要成分之一。为更好控制产品质量，提高药品质量标准，参照文献资料与《中国药典》2005年版一部复方黄连素片项下含量测定方法，对双黄消炎片中盐酸小檗碱的含量测定进行了实验研究［1，2］。采用高效液相色谱法测定盐酸小檗碱含量，方法简便快速，稳定可靠，专属性强。

1仪器与试药

仪器：高效液相谱仪：SPD-10A日本岛津；紫外分光仪：上海康化生化仪器制造厂；超声波清洗器：SK3200H上海科导超声仪器有限公司。试药：盐酸小檗碱对照品（批号110713-200208，供含量测定用）由中国生物制品检定所提供,其他试剂均为分析纯；双黄消炎片（批号：20070501、20070502、20070503）由河南百年康鑫药业有限公司提供,上市药品：通化某药业有限公司。

2方法与结果

2.1色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.033mol/L磷酸二氢钾溶液（35:65）为流动相；检测波长为265nm；流速为1ml/min；柱温为室温。理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于3000。

2.2溶液的制备对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得。供试品溶液的制备：取本品20片，研细，取0.5g，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇20ml，超声处理30min（功率：135W，频率：59kHz）,放冷，加甲醇至刻度，混匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液1ml置5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，即得。

2.3阴性样品的测试取缺三颗针的样品，按供试品制备法制备阴性样品后测定，在盐酸小檗碱相应位置无峰出现，说明阴性样品的其他成分无干扰。见图1～3。图1盐酸小檗碱对照品色谱图图2双黄消炎片色谱图图3阴性样品色谱图2.4线性关系的考察取盐酸小檗碱对照品适量,加甲醇配制不同浓度的对照品溶液，分别为13.525μg/ml、27.05μg/ml、54.10μg/ml、81.15μg/ml、108.20μg/ml，照上述色谱条件各进样10μl测定峰面积（结果见表1），以峰面积积分值为纵坐标，以不同浓度为横坐标绘制标准曲线，计算回归方程Y=63204.63X+4501.15r=0.9993（n=5）,表明盐酸小檗碱在13.525～108.20μg/ml之间呈良好的线性关系。表1线性关系的考察

2.5精密度试验精密吸取对照品溶液（54.1μg/ml）进样量10μl，连续进样6次，记录峰面积（结果见表2），测定结果RSD为1.26%，表明精密度良好。表2精密度试验

2.6重现性试验取本品（20070501）20片，称取平均处重，研细，取6份，每份0.5g，精密称定，照供试品溶液制备方法，制成供试品溶液，照上述色谱条件进行试验，进样10μl，测定每份盐酸小檗碱含量（结果见表3），结果RSD为1.54%，重现

性良好。表3重现性试验

2.7稳定性试验取同一供试品溶液（批号：20070501），分别在0、2、4、6、8h进样10μl，测定盐酸小檗碱峰面积（结果见表4），RSD为3.29%（n=5）。表明制备的供试品溶液在8h内稳定。表4稳定性试验

2.8加样回收率试验精密称取已知含量的同一批号供试品（批号：20070501）5份，取样量为0.25g，精密称定,分别加入浓度为2.861mg/ml的对照品溶液1ml，按照供试品溶液制备方法，制备供试品溶液，进样量10μl，测定盐酸小檗碱含量（结果见表5），平均回收率为98.2%，RSD为1.59%（n=6）。表5加样回收率试验

2.9样品测定按照供试品溶液制备方法对3批产品进行测定，测定结果见表6。表6含量测定结果

3讨论

3.1样品每片含三颗针以盐酸小檗碱（C20H18ClNO4）计，均不少于3.0mg，由于各地三颗针药材的差别较大，因此暂规定：本品每片含三颗针以盐酸小檗碱（C20H18ClNO4）计，不得少于3.0mg。

3.2参考《中国药典》2005年版一部复方黄连素片项下含量测定方法所用的流动相，分别采用乙腈：0.033mol/L磷酸二氢钾（40：60、25：75、35：65）为流动相，进行试验，结果以乙腈－0.033mol/L磷酸二氢钾（35：65）为流动相所得色谱图分离效果及出峰时间较为合适。因此选择流动相为乙腈-0.033mol/L磷酸二氢钾（35：65）。

【参考文献】

1孙雪妹，杨明华，戴影秋.良园枇杷叶膏中盐酸麻黄碱的HPLC测定.中国医药工业杂志，2006，37（11）：768-769.

2国家药典委员会.中国药典,2005年版一部.北京：化学工业出版社，2005，534.新晨