二次薄层色谱荧光法测定培坤胶囊中橙皮苷含量范文

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摘要建立了培坤胶囊中橙皮苷的二次薄层色谱—荧光分析法。即先以醋酸乙酯-甲醇-水(100∶17∶13)展开，再以甲苯-醋酸乙酯-甲醇-水(20∶10∶1∶1)上层溶液展开；荧光测定条件为λex＝310nm，λem＝510nm。该法可有效地排除共存组分的干扰，并提高检测的灵敏度。橙皮苷在1μg～11μg范围具有良好的线性，r＝0.9977。

关键词：培坤胶囊；橙皮苷；二次薄层层析；荧光分光光度法

培坤胶囊是在古方培坤丸的基础上由当归、黄芪、杜仲、白术、陈皮等21味中药制成，有补气血、滋肝肾等功效。为了更好地控制其质量，我们建立了二次薄层层析—荧光分析法测定其中橙皮苷含量。

1仪器与试药

1.1仪器ATTD型紫外灯；RF-540型荧光分光光度计(日本岛津)；TGL-16C型高速离心机(上海)。

1.2试药橙皮苷对照品(中国药品生物制品检定所)；硅胶G(青岛海洋化工厂)；培坤胶囊样品(西安正大制药有限公司，批号971101，971102，971103)。

2方法与结果

2.1对照品及供试品溶液的制备取橙皮苷对照品适量，用甲醇制成0.61mg/ml溶液作为对照品溶液。另称取培坤胶囊内容物3g，置锥形瓶中，加甲醇20ml超声处理30min，滤过，再用甲醇洗涤两次，合并，滤液浓缩并定容至10ml作为供试品溶液。同法制备缺陈皮空白样品溶液。

2.2薄层色谱条件〔1〕及定性鉴别取硅胶G适量，加0.3%CMC-Na溶液常规制板，用前105℃活化1h。吸取上述对照品溶液、供试品溶液及空白样品溶液各10μl，点于同一块薄板，首先以醋酸乙酯-甲醇-水(100∶17∶13)展开约4cm，取出，晾干，再以甲苯-醋酸乙酯-甲醇-水(20∶10∶1∶1)上层溶液展开，取出，晾干，喷以10%氯化铝甲醇溶液，放置30min，置365nm紫外灯下检视，橙皮苷呈现黄绿色荧光斑点(Rf＝0.19)，空白样品相应位置未见此斑点(图1)。

a-橙皮苷标准品b-供试品c-缺陈皮空白样品

2.3荧光条件的选择参考有关文献〔1〕，在激发波长为310nm，发射波长为500nm下进行测定，并考察了不同浓度盐酸(图2)及不同浓度三氯化铝显色液(图3)对橙皮苷荧光测定的影响。结果确定采用0.2%盐酸，1.5%三氯化铝溶液。

2.4标准曲线的制备精密吸取橙皮苷对照品溶液2，4，8，12，16，18μl点于同一块硅胶G板上，按2.2项下操作，刮取橙皮苷斑点，加入甲醇1ml，振摇10～20min后离心，取上清液0.8ml，加0.2%盐酸1ml，1.5%三氯化铝显色液5ml，放置5min，在激发波长为310nm、发射波长为500nm的条件下测定荧光强度，以荧光强度(I)对橙皮苷的量(m)回归得方程：I＝1.360m－0.041(r＝0.9977)，表明橙皮苷在1μg～11μg间有良好的线性关系。

2.5样品含量测定精密吸取上述对照品及供试品溶液各10μl，点于同一块硅胶G薄层板上，按2.2项下操作，以外标法计算橙皮苷的含量。结果培坤胶囊中橙皮苷的含量为0.32%～0.33%。将971103号样品连续测定6次，RSD为1.05%。

2.6回收率试验精密称取橙皮苷标准品约50mg，加甲醇50ml溶解后精密吸取5ml，加入已知浓度的样品中；挥去甲醇后依法处理、测定，结果平均回收率为99.0%，RSD＝1.04%。

3讨论

陈皮为培坤胶囊的主药，其主要有效成分为橙皮苷，文献报道橙皮苷的含量测定方法有薄层扫描法〔2〕、高效液相色谱法〔3〕、薄层-紫外分光光度法〔4〕等。TLC法较为经济实用，但培坤胶囊由多味药制成，通常TLC条件下橙皮苷不能很好地与其他成分分离。文中二次薄层层析能够有效地排除干扰，提高分析的准确度。

参考文献

〔1〕中国药典2000年版.一部，2000：148

〔2〕王宝琴.中成药质量标准及标准物质研究.北京：中国医药科技出版社，1994：140

〔3〕王静竹，陈定一，王晶.高效液相色谱法测定陈皮中橙皮苷的含量.中国中药杂志，1994，19(7)：424

〔4〕王云彩，李生正，张抗怀，等.乳消贴主要成分TLC鉴别及橙皮苷的含量测定.西北药学杂志，1996，11(6)：255新晨