碱性成纤维细胞因子对真皮下血管网皮瓣成活实验范文

本站小编为你精心准备了碱性成纤维细胞因子对真皮下血管网皮瓣成活实验参考范文，愿这些范文能点燃您思维的火花，激发您的写作灵感。欢迎深入阅读并收藏。

作者：尹刚贾堂宏刘志功孙炳卫龚维明刘淑恒郭淑亚张庆国

【摘要】目的：研究碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对促进随意型真皮下血管网皮瓣（SVNF）成活的作用。方法：分别在4只纯白色家猪两侧背部各形成6个SVNF，长16cm，宽4cm，将24个皮瓣随机分为bFGF组和对照组，于术后6d测量各组皮瓣成活率及皮瓣新生血管密度。结果：术后6d，bFGF组与对照组SVNF成活率分别为（81.2±1.7）%和（66.2±1.8）%(P＜0.05)，皮瓣近、中、远段皮瓣血管密度分别为（16.7±6.0）、(29.7±5.5)、（14.9±6.0）/mm2和（16.6±4.0）、（21.4±5.2）、（3.5±5.1）/mm2(P＜0.05)。大体观察和组织学观察bFGF组均优于对照组。结论：皮瓣下局部注射bFGF后，通过促进SVNF远端基底部和边缘部的血运，可以提高SVNF成活率，缩短皮瓣的断蒂时间，扩大皮瓣长宽比例。

【关键词】真皮・外科皮瓣・成纤维细胞生长因子2

BFGFimprovestheviabilityofsubdermalvascularnetworkflap

【ABSTRACT】Objective:ToinvestigatetheapplicationvalveofbFGFtoimprovetheviabilityofsubdermalvascularnetworkflap.Methods:Fourwhitehealthypigswereused,eachpighad6SVNFonback,16cm×4cm，totally24flapsweredividedrandomlyinto2groups:ThebFGFgroupsandthecontrolgroups.Onpostoperativeday6,weobservedtheappearanceoftheflaps.Thesurvivalareaofeachflapwasmeasuredandtheflapwasharvestedforhistologicalanalysisandthedensityofangiogenesiswasalsoexamined.Results:Onpostoperativeday6,thesurvivalratesofthebFGFgroupandthecontrolgroupwere(81.2±1.7)%and(66.2±1.8)%respectively,theangiogenesisdensityofthemiddleandthedistalsegmentinthebFGFgroupwas(16.7±6.0)/mm2,(29.7±5.5)/mm2,(14.9±6.0)/mm2respectively,while(16.6±4.0)/mm2,(21.4±5.2)/mm2,(3.5±5.1)/mm2respectivelyinthecontrolgroup.ThebFGFgroupwassuperiortothecontrolgroupintheappearanceandhistologicalanalysisoftheflaps.Conclusion:TheresultssuggestthattheinjectionofbFGFlocallycanpromotethesurvivalratebyacceleratingthebloodcirculationoftheSVNF’bottomandedge,shortenthedivisiontimeofSVNFandbroadentheratiooflengthandwidth.

【KEYWORDS】Dermis・Surgicalflap・Fibroblastgrowthfactor2

临床上经常见皮肤撕脱伤、热压伤、严重烧伤创面，早期良好的组织覆盖是外科修复的重要研究内容，对恢复患肢功能，保留良好的外观至关重要。随意型真皮下血管网皮瓣（subdermalvascularnetworkflap,SVNF）是近20年来新出现的一种皮瓣，此型皮瓣充分发挥了真皮下血管网的作用，广泛应用于创伤外科、烧伤整形美容外科，但其供血范围有一定限度，皮瓣长宽比例一般不超过2.5∶1，故而限制其推广应用。本实验采用碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）皮瓣下局部注射给药，探讨bFGF能否提高SVNF的成活率，为临床应用提供依据。

1材料和方法

1.1实验动物纯白色3个月龄健康家猪4只（由山东大学动物实验中心提供），体重（20±2.5）kg，雌雄不限。

1.2动物模型的建立在每只家猪两侧背部形成6个SVNF，切断从腹乳线处发出的轴型血管后形成随意型皮瓣，长16cm，宽4cm。皮瓣长轴与猪的纵轴垂直。

1.3药物及给药方法bFGF购自东大生物工程公司。SVNF形成后，即刻在皮瓣距蒂部12cm、14cm处及皮瓣最远端分别选择6个注射点，给予皮下注射。处理如下：bFGF组：每一位点真皮下层注射含有bFGF的肝素化生理盐水0.1ml，共0.6ml。对照组：每一位点皮下注射0.1ml肝素化生理盐水，共0.6ml。药物注射后，将皮瓣原位缝合，皮瓣远段1/3打包加压包扎。家猪麻醉清醒后，单笼饲养，每日肌肉注射青霉素400万U预防感染。

1.4检测指标及方法

1.4.1大体观察术后6d将家猪再次全麻后拆除打包线，肉眼观察各组皮瓣

颜色，质地及猪毛生长情况。

1.4.2皮瓣成活率术后6d，用透明硫酸纸标记出皮瓣坏死区域和成活区域。应用计算机图像分析仪计算出各组皮瓣成活面积占总面积之比，即皮瓣成活率。

1.4.3组织学观察分别在皮瓣近、中、远1/3处切取1cm×1cm×1cm的组织块，包括皮下脂肪组织和少量肌肉组织，10%福尔马林固定，常规脱水，包埋，HE染色，光镜下观察组织学变化。

1.4.4血管密度检测采用SP免疫组化染色显示真皮下层新生的血管，然后利用10倍光镜，随机计算出每个组织切片中选出的5个视野中血管断面的个数。利用计算机图像自动处理系统计算出相同视野下的组织面积，即为1mm2组织中血管断面的密度。

1.5统计学处理求出每组皮瓣成活率及血管密度的x±s。实验测得的数据组间采用单因素方差分析比较，进行t检验。

2结果

2.1大体观察两组皮瓣近端呈粉白色，猪毛生长良好，质地柔软，用刀切割出血活跃。两组皮瓣中段为淡紫红色。bFGF组皮瓣远段呈粉白色，局部淡红色，有猪毛生长，对照组皮瓣远段部分发黑、结痂，无猪毛生长，质地硬，切割时不流血。

2.2皮瓣成活率术后6dSVNF成活率bFGF组为（81.2±1.7）%，对照组为（66.2±1.8）%(P＜0.05)。

2.3组织学观察术后6d对照组远段皮肤表皮层变偏平，真皮层细胞排列紊乱，胶原组织有断裂现象，真皮层和真皮下层新生的血管生长不活跃，有大量的中性粒细胞和巨噬细胞浸润。bFGF组皮瓣远段皮肤各层结构无明显改变，复层上皮细胞排列整齐，真皮层胶原组织无肿胀及断裂，真皮层和真皮下层新生小血管生长活跃，无明显炎症细胞浸润。

2.4血管密度检测术后6d，两组皮瓣远段新生血管密度见表1和图1-3。表1术后6d两组皮瓣血管密度比较（略）

3讨论

创面愈合过程包括炎症反应、血管再生、细胞移行、细胞增殖以及细胞外基质的重建，创面愈合受多种肽类生长因子的调控，这些因子通过自分泌和旁分泌的机制影响着创面愈合的进程，其中碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）在创面愈合中起重要作用。bFGF不仅能促进皮肤成纤维细胞、内皮细胞等与组织修复有关的细胞生长增殖反应外，而且还能刺激成纤维细胞分泌胶原蛋白等合成新的细胞外基质［1］。本实验结果表明，bFGF能够通过促进皮瓣远段血运重建，改善真皮下血管网皮瓣血供，促进皮瓣成活，缩短断蒂时间，继而提高SVNF的成活率。bFGF广泛存在于体内所有细胞中，其中脑垂体含量最高，其他组织仅为其含量1/10~1/50，细胞外基质（ECM）是bFGF的贮存库，细胞合成的bFGF释放入ECM,与其中的硫酸肝素结合是非活性状态，活性形式bFGF的释放必须依赖于肝素酶的降解，一般以为，这些严格的调控机制对于bFGF随时调节靶细胞的增殖和分泌对创伤组织的修复极为有利。bFGF有广泛的生物活性，不仅能促进靶细胞的有丝分裂，还有非有丝分裂的激素样效应，包括改变细胞趋化性，诱导或者抑制细胞合成，分泌一些特殊蛋白质和调节细胞的分化。诱导毛细血管的生长是bFGF的一个非常重要的功能，几乎在所有富含血管的组织中均含有bFGF。真皮下血管网的血供包括［2］：（1）蒂部血供。血供通过蒂部较小的肌皮穿支的分支进入真皮下血管网，到达皮瓣远端。（2）创基创缘血供。真皮下血管网充分暴露，与受区紧密接触，有利于血管网与受区早期建立交通，随着血管网逐步调整，原来的干血管被选择性的部分保留下来，起着重要供血渠道的作用。bFGF能促进皮瓣早期断蒂［3］，因为bFGF不仅有利于新生血管从受区基底部向皮瓣快速生长，还能加强基底与皮瓣间血管断端的直接吻合。在皮瓣转移后，新生血管尚未长入皮瓣组织，直接血管吻合可改善皮瓣血供，特别有利于处于存活与坏死交界区内的细胞向好的方向发展，对于皮瓣存活率的提高是有较大益处的。bFGF以肝素结合物的形式存在［4］，并以此形式与受体结合而产生生物学效应。肝素可提高其生物学活性，并可保护其不被各种理化因素灭活，外源性肝素有利于bFGF结合到靶细胞表面受体上，促进bFGF生理作用的发挥，故临床应用时应加入肝素化生理盐水以增加其活性。

参考文献

［1］丁小邦，程宁新，陈兵，等.应用bFGF刺激的软骨细胞构建自体组织工程化软骨的研究［J］.中华整形外科杂志，2004，3：217.

［2］肖添有，司徒朴，赵吉森.真皮下血管网皮瓣的基础研究进展［J］.中华整形烧伤杂志，1997，4：292.

［3］张强，蔡锦方，刘立峰，等.bFGFPLGA微球促进随意皮瓣早期断蒂［J］.中国矫形外科杂志，2004，12（5）：353355.

［4］赵焕童，李湘洲，王歧刚，等.碱性成纤维细胞生长因子对大鼠真皮下血管网皮片愈合的影响［M］.中国临床康复，2003，7（23）：31683169.新晨