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【摘要】目的研究滴通鼻炎水对蛙口腔黏膜纤毛运动的影响。方法采用蛙黏膜纤毛运动实验,用肉眼观察给药后小木屑在蛙上颚黏膜表面移动一定距离所需要的时间；用显微镜观察生理盐水组和滴通鼻炎水组对离体蛙口腔上颚黏膜纤毛持续摆动时间的影响；蛙口腔上颚黏膜用生理盐水或滴通鼻炎水浸润30min后，分离蛙口腔上颚黏膜，用显微镜观察其纤毛持续摆动时间。结果①在整体动物实验中，滴通鼻炎水常用浓度、高浓度组给药前后对蛙黏膜纤毛运动均无明显影响（P>0.05）；②在离体实验中，滴通鼻炎水常用浓度、高浓度组对蛙黏膜纤毛运动亦无明显影响（P>0.05）；③在半在体法实验中，滴通鼻炎水对蛙纤毛运动持续时间有明显缩短作用（P<0.05），但作用强度显著弱于阳性对照药去氧胆酸钠。结论滴通鼻炎水在整体实验和离体实验中对蛙黏膜纤毛的功能无明显影响，但滴通鼻炎水浸润30min后对黏膜纤毛运动有抑制作用。
【关键词】滴通鼻炎水；纤毛运动；毒性
Abstract:ObjectiveToevaluatetheinfluenceofDitongnasitisdroponfrogpalatemucosaciliamovement.Methods①Recordthetimespanofthesmallchipsmovingonthesurfaceoffrogpalatemucosabyeyes;②Observationofthetimespanoffrogpalateciliumcontinuingsegmentalmotionindrugsolutionundermicroscope;③Observationthetimespanoffrogpalateciliumcontinuingsegmentalmotionaftersufficienteffectbydrugsolutionundermicroscope.Theabovewereusedasindicatorstoexaminetheeffectsofdifferentdrugconcentrationsonfrogpalatemucosaciliamovement.Result①Noapparenteffecthasbeenfoundonfrogmucosaciliummovementatthenormaldosageandhighdosage(theconcentrationofwhichare0.395gcrudedrug/mL&1.58gcrudedrug/mL)ofDitongnasitisdrophaddividedlyactedonfrogmucosacilia,withthedifferencesofnostatisticsignificance（P>0.05）inanimaltest;②NoobviouseffecthadbeenfoundonfrogmucosacilialmovementatthenormaldosageandhighdosageofDitongnasitisdroprespectively,withthedifferencesofnostatisticsignificance（P>0.05）invitro;③Effecthadbeenobservedonweakeningthecontinuingmovementoffrogmucosaciliainvitro,indicatingthatDitongnasitisdropinhibitscilialmovementwhenactingonfrogmucosaciliaforarelativelylongtime（P<0.05）.Buttheintensityismuchweakerthanpositivecontrolwithdeoxysodiumcholate.ConclusionDitongnasitisdrophadnoremarkableeffectoninjuringthefunctionoffrogmucosacilia.
Keywords:Ditongnasitisdrop;cilialmovement;toxicity
滴通鼻炎水由蒲公英、麻黄、黄芩、石菖蒲、苍耳子、辛夷等组成，具有消炎止痛、抗过敏功能，用于伤风鼻塞、急慢性鼻炎。理想的滴鼻剂或喷雾剂在治疗疾病的同时，不应对鼻黏膜纤毛运动产生抑制作用。为了评价滴通鼻炎水对鼻黏膜纤毛运动有无影响，本研究采用蛙黏膜纤毛运动实验，评价该药对鼻黏膜纤毛运动的影响，为临床安全用药提供参考。
1材料
1.1药物滴通鼻炎水，批号：M1004，规格：10mL/瓶，广州白云山制药股份有限公司白云山外用药厂生产。质量浓度为0.395g生药/mL，作为低剂量组用药。滴通鼻炎水浸膏（与配制上述成药同一批提取），按处方投料提取浓缩制成，广州白云山制药股份有限公司白云山外用药厂生产，质量浓度为4.266g生药/g。试验时用生理盐水配成质量浓度为1.58g生药/mL，为成药浓度的4倍，作为高剂量组用药。
去氧胆酸钠，Sigma产品，批号（lot）：61H0536。试验时，用生理盐水配成ρ=1%去氧胆酸钠溶液备用。
1.2动物蛙80只，体质量60~80g，雌雄兼用,粤监正字2006C081号。
2方法与结果
2.1滴通鼻炎水对蛙黏膜纤毛运动的影响取30只蛙，随机分成3组，即滴通鼻炎水低剂量组、滴通鼻炎水高剂量组、1%去氧胆酸钠组。
将蛙仰位固定于蛙板上，下颌扳开，用线贯穿，拉向下方并固定。并用图钉钉住上颌，使上颌的黏膜面得以充分暴露，不时用生理盐水少许湿润暴露的黏膜面。
于两眼窝前缘间的黏膜上置放芝麻大小的软木屑一粒。由于黏膜上皮的纤毛运动，将能看到小木屑逐渐向食道口方向移动。以上下颌角之间作为终点，用秒表记录木屑从起始线移动到终点线所需时间(s)，连试3次，求出其平均值。然后用滴管加供试液0.1mL于上颌的黏膜面，3min后再以同法测试木屑从起始线移动到终点线所需时间3次，求其平均值，并与加药前的结果比较，计算相对运动比。如给药后木屑移行所需时间超过360s，按360s计。
相对运动比=（给药前木屑移行所需平均时间/给药后木屑移行所需平均时间）×100%
Tab.1EffectoftheDitongnasitisdroponthenasalmucociliamovement
与去氧胆酸钠比较:*P<0.01（F检验）；给药前后对照:#P<0.01（t检验）
滴通鼻炎水低、高剂量对蛙黏膜纤毛运动无明显的影响，给药前后纤毛运动的差异无显著性。阳性对照药1%去氧胆酸钠能显著抑制蛙黏膜纤毛运动。
2.2离体法研究滴通鼻炎水对蛙纤毛运动的影响［1］取10只蛙，同2.1法将蛙仰卧固定在蛙板上，使口腔张开，用手术剪分离上腭黏膜。取约3mm×3mm黏膜，生理盐水洗净血块及杂物，黏膜面向上，平铺于载玻片上。于黏膜表面滴加0.2mL药液，轻轻盖上盖玻片，于40倍光学显微镜下观察黏膜纤毛的运动情况，随后搁置于加有少量蒸馏水的层析缸中，密闭。使水蒸气近饱和状态。实验室环境温度为25℃。此后每5min取出标本，显微镜观察，如纤毛继续运动，放回层析缸中，直至纤毛运动停止，记录从给药开始至纤毛运动停止所持续的时间。结果见表2。
以上试验中，取自同一蛙上腭的黏膜分成4小块，随机分到各试验组中，以减少试验误差。以给药组的纤毛持续运动时间除以对照组（给生理盐水）时间得纤毛持续运动时间（t）的相对百分率。百分率越接近100%，表示药物对纤毛运动的影响越小。
Tab.2EffectoftheDitongnasitisdroponthenasalmucociliamovementinvitrofrogpalatemodel
与生理盐水比较:*P<0.01(F检验);与1%去氧胆酸钠组比较:#P<0.01(F检验)
表2说明，滴通鼻炎水低、高剂量组与生理盐水组差异无显著性，但这两组与去氧胆酸钠组比较差异均有显著性。提示滴通鼻炎水对蛙黏膜纤毛运动无明显影响，不像1%去氧胆酸钠那样有显著抑制作用。
2.3半在体法研究滴通鼻炎水对蛙纤毛运动的影响［2,3］取40只蛙，随机分成4组，即生理盐水组、滴通鼻炎水低剂量组、滴通鼻炎水高剂量组、去氧胆酸钠组。同2.1法将蛙仰卧固定在蛙板上，使口腔张开，于上腭黏膜处滴加供试液0.5mL使完全浸没上腭，接触30min后用生理盐水洗净药物，分离上腭黏膜以供显微镜观察纤毛运动情况。黏膜分离后立即洗净，平铺于载玻片上，于黏膜表面滴加生理盐水，盖上盖玻片，参照2.2法（离体法）观察并记录纤毛运动的持续时间及恢复情况。并计算给药组纤毛持续运动的相对百分率。结果见表3。
Tab.3EffectoftheDitongnasitisdroponthenasalmucociliamovementinsitufrogpalatemodel
与生理盐水组比较:*P<0.01（F检验）；与1%去氧胆酸钠组比较:#P<0.01（F检验）
表3数据表明：滴通鼻炎水低、高剂量组与生理盐水组比较,纤毛运动持续时间差异有显著性，且与去氧胆酸组比较差异均有显著性。提示滴通鼻炎水对蛙纤毛运动有明显抑制作用，但显著弱于1%去氧胆酸钠。
3讨论
鼻腔表面衬以黏膜，黏膜表面是一层顶部长有纤毛的假复层柱状上皮，内有分泌黏液的杯状细胞，所分泌的黏液覆盖在纤毛上。在正常情况下，纤毛协调一致地摆动,清除鼻腔内异物,具有清除作用。在病理状态下,纤毛运动和黏液分泌受到影响,就很容易感染各种急慢性呼吸道疾病。正因为如此，近年来，关于滴鼻剂对黏膜纤毛的毒性评价越来越受到关注。对于滴鼻剂和喷雾剂等鼻腔给药制剂,特别是需要较长时间用药的,应研究其对鼻黏膜组织和黏膜纤毛的毒性，从而避免对鼻黏膜组织及黏膜纤毛产生毒性作用，妨碍鼻腔的正常生理功能,增加感染几率。
滴通鼻炎水对蛙黏膜纤毛运动的研究表明：在整体动物实验中，滴通鼻炎水低、高剂量（质量浓度分别为0.395g生药/mL和1.58g生药/mL）对蛙黏膜纤毛运动无明显的影响(P>0.05)，提示无明显纤毛毒性；在离体法研究滴通鼻炎水对蛙纤毛运动的影响实验中，滴通鼻炎水亦无明显毒性；用半在体法观察滴通鼻炎水对蛙黏膜纤毛运动的影响实验中，滴通鼻炎水对蛙纤毛运动持续时间有缩短作用，提示滴通鼻炎水较长时间（30min）浸润于蛙黏膜纤毛后，可能对纤毛运动有抑制作用。在临床用药中，滴鼻或喷雾后，药物难以长时间高浓度浸润于鼻黏膜上，动物实验与临床实际用药情况不尽相符，不可简单套用于临床，但可供临床用药参考。
从方法学来看，整体动物黏膜纤毛运动功能试验最为可靠。离体法试验由于黏膜离体后与实际用药情况不符，可供参考。本文所说的半在体法，在一些文献中称为在体法，本法虽然在给药期间，黏膜是在体的，但剖取口腔黏膜后，是离体的，因而只能算是半在体法。
综合整个实验，滴通鼻炎水对蛙黏膜纤毛运动无明显影响，如长时间持续用药要注意其对黏膜的抑制作用。
【参考文献】
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