组织病理形态学指标观察范文

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【摘要】目的：观察益肾通络方对实验性肾病综合征大鼠肾功能的保护作用。方法：采用尾静脉注射阳离子化牛血清白蛋白造模。将40只雄性SD大鼠随机分为模型组、益肾通络方组、肾炎四味片组、正常对照组，每组10只。造模后予以药物干预，共给药4w。采用化学比色法检测24h尿蛋白，光镜下切取肾组织进行病理形态学观察。结果：与模型组比较，肾炎四味片组和益肾通络方组大鼠24h尿蛋白量明显降低（P<0.01）；而2组之间比较，益肾通络方组大鼠24h尿蛋白量降低更显著（P<0.01）。病理形态学观察：模型组肾小球呈局灶性节段性硬化，肾小管上皮细胞水肿，部分小管腔内可见蛋白管型，肾间质纤维化；肾炎四味片组以上改变较同期模型组轻，而益肾通络方组显著减轻。结论：益肾通络方能降低大鼠尿蛋白，保护肾功能。

【关键词】肾病综合征益肾通络方尿蛋白大鼠

肾病综合征（nephroticsyndrome，NS）是多种病因引起肾小球基底膜通透性增高，使大量血浆蛋白由尿中丢失而导致的一种综合征，临床具有大量蛋白尿、低蛋白血症、高胆固醇血症、不同程度的水肿四大特点。肾病综合征是临床常见病、多发病，且治疗棘手，容易复发，难以巩固。本实验采用经典NS模型阳离子化牛血清白蛋白（C-BSA）造模大鼠，通过24h尿蛋白定量测定及病理形态学观察，研究益肾通络方降低大鼠尿蛋白、保护肾功能的作用。

1材料与方法

1．1实验材料

1．1．1实验动物40只普通级雄性健康SD大鼠，体重（150±20）g，购自广州中医药大学实验动物中心。合格证号：粤监证字2005A031SCXK（粤）2003-0001。

1．1．2药品与试剂益肾通络方汤剂，由湖南中医附一院药剂科制备。肾炎四味片，湖北亿雄祥瑞药业有限公司出品，批号：国药准字Z42021954。C-BSA，磷酸盐缓冲液（PBS），弗氏不完全佐剂。

1．2实验方法

1.2.1造模取30只大鼠参照参考文献［1］方法造模。预免疫：将60mgC-BSA用30mLPBS充分溶解，制成2mg/mLC-BSA溶液，再与等量（30mL）的弗氏不完全佐剂置乳钵内充分混匀为乳白色悬液，使乳化完全。取1mL乳白色悬液，分别一次性在每只大鼠的双侧腋下、腹股沟处作多点皮下注射，观察1w。免疫：预免疫结束1w后，每只大鼠隔日尾静脉注射1mL浓度为2.5mg/mL的C-BSA，共3w。整个造模时间共4w。

1.2.2分组与给药将造模后的30只大鼠，按24h尿蛋白定量结果分为3个区组，然后再随机分为模型组、益肾通络方组、肾炎四味片组，每组10只，将10只同批未造模大鼠作为正常对照组。造模4w分组后，益肾通络方组灌服益肾通络方汤剂（2.17g/kg），肾炎四味片组灌服肾炎四味片（2.45g/kg）混悬液，模型组和正常对照组每天灌服等容量（1mL/100g）的冷开水，每天灌胃1次，连续给药治疗4w。大鼠每周称重1次，根据体重调整给药剂量。

1.2.3指标观察及检测方法

1．2．3.124h尿标本检测用药前（第4w造模结束时）、用药后（第8w处死动物前）分别收集24h尿标本，采用化学比色法检测尿蛋白。

1．2．3.2肾组织病理形态学观察给药治疗4w后全部大鼠断头处死，剖腹取肾脏，切取肾组织分别做HE染色光镜检查。光镜检查：取大鼠肾脏约2mm大小的皮质，置于10％缓冲中性甲醛溶液中固定，逐级乙醇脱水、石蜡包埋、切片，常规HE染色，用Leica光学显微镜观察并拍照。

1．2.4统计学方法应用SPSS12.0医用统计软件包进行数据资料的统计学处理，计数资料用百分比（%）表示，计量资料用平均数±标准差（■±s）表示，组间比较用方差分析。

2结果

2.1大鼠死亡情况

第4w末，模型组和益肾通络方组各死亡大鼠1只。

2．224h尿标本检测

结果见表1。

2．3肾组织病理形态学观察

正常对照组：肾小球、肾小管及肾间质结构正常。模型组：肾小球呈局灶性节段性硬化，近曲小管上皮细胞水肿，管腔狭窄，部分小管腔内可见蛋白管型，肾间质纤维化。肾炎四味片组：部分肾小球呈轻度局灶性节段性硬化，近曲小管上皮细胞水肿，管腔狭窄，肾间质纤维化。益肾通络方组：部分肾小球扩张充血，近曲小管上皮细胞水肿，炎细胞浸润。

3讨论

肾病综合征是临床常见病，在药物治疗方面尽管西药糖皮质激素及细胞毒药物有一定的疗效，但副作用大、价格较贵、复发率高等缺陷影响了临床的应用。中药在该领域中占有非常重要地位，在中医药宝库中挖掘疗效确切的药物和方剂，通过动物实验，确定其疗效，探讨其作用机理和作用的物质基础，是使中药实现现代化的重要途径。本研究旨在通过动物实验对益肾通络方这一个在临床使用多年的有效验方的疗效予以进一步的确定，探讨该方降低蛋白、利尿的机制，为该方在临床方面的使用提供更确切的理论和实验依据。

大量蛋白尿是肾病综合征的必备特征，蛋白尿主要成分为白蛋白，肾小球基底膜通透性的变化是NS时产生蛋白尿的根本原因。大量白蛋白从尿中丢失，会引起严重低蛋白血症，而血浆白蛋白下降会导致胶体渗透压下降，从而引起水肿，致体内脂代谢异常，引起高脂血症。因此大量蛋白尿是引起肾病综合征其他症状的基础。

益肾通络方主要由黄芪、当归、芡实、白术、丹参、山药组成。现代药理研究证实黄芪、当归、芡实能够促进NS大鼠骨骼肌蛋白合成，改善整体蛋白质代谢紊乱，通过增强白蛋白mRNA转录活性，增加肝脏白蛋白mRNA表达，促进白蛋白的合成，提高血浆白蛋白水平；黄芪、当归可消除蛋白尿，促进肝脏白蛋白RNA的合成，并可直接扩张血管，降低血压；其中黄芪还可增加抗体，增强免疫，利尿消肿，使水湿之邪从小便排除，同时上调肝脏LDLR的基因转录和蛋白表达，减少脂质在血管壁的沉积。亦有研究表明黄芪、白术、当归、丹参有调节机体免疫功能的作用，其中党参能增加内脏血流量，抑制家兔血小板聚集，党参多糖能增加巨噬细胞吞噬功能；山药对实验性大鼠食醋脾虚模型有预防和治疗作用；柴胡多糖能提高小鼠体液和细胞免疫功能，并使免疫抑制状态有一定程度的恢复；丹参能活血化瘀，改善器官的微循环，增加血流量，减少血小板聚集，提高组织摄氧能力，并能清除自由基和超氧阴离子，对组织细胞有保护作用，同时还能抗炎、抗纤维化、降血脂［4］。益肾通络方治疗NS的作用机理可能与以上的药物作用有关，尚待进一步研究。