益肾养元合剂质量问题范文

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【摘要】目的建立益肾养元合剂的质量控制标准。方法采用薄层色谱法鉴别益肾养元合剂中的何首乌、金樱子、狗脊；采用高效液相色谱法测定益肾养元合剂中二苯乙烯苷的含量。结果在薄层色谱中检出了何首乌、金樱子、狗脊；二苯乙烯苷进样量在25.82～826μg范围内呈良好的线性关系（r＝1.0000），平均回收率为102.0%，RSD为0.83%（n＝6）。结论本方法操作简便、专属性强、准确、重复性好，可作为益肾养元合剂的质量控制标准。

【关键词】益肾养元合剂何首乌金樱子狗脊薄层色谱法二苯乙烯苷高效液相色谱法

益肾养元合剂收载于卫生部药品标准第二十册,具有补益肝肾、健脾益气、涩精止遗的功效，用于肝肾不足、脾气虚弱、面色萎黄、倦怠纳差、腰膝酸痛、遗精梦泄等［1］。

方中何首乌为主药，原药品标准中仅收载了化学鉴别、狗脊药材的薄层鉴别和2，3，5，4′?菜聂腔?二苯乙烯??2??O?拨陋?D?财咸烟擒眨ㄒ韵录虺啤岸?苯乙烯苷”）的含量测定方法。本文为进一步提高该品种的质量标准，增加了方中何首乌、金樱子的薄层鉴别，并对原标准中的狗脊薄层鉴别和二苯乙烯苷含量测定方法进行了改进，报道如下。

1仪器与试药

益肾养元合剂（批号：C08001A、C08002A、C08003A、F03001B）均为广州潘高寿药业股份有限公司产品；何首乌对照药材（批号：120934??200507）、金樱子对照药材（批号：1047??9701）、狗脊对照药材（批号：121071??200502）及二苯乙烯苷（批号：0844??200003）均购自中国药品生物制品检验所；硅胶G预制板由青岛海洋化工公司生产；乙腈为色谱纯；其余试剂均为分析纯。

Agilent1200高效液相色谱仪，色谱柱（AgilentEclipseXDB??C184.6mm×150mm,5μm），梅特勒十万分之一天平。

2薄层鉴别

2．1何首乌的鉴别

取本品20mL（批号：C08001A、C08002A、C08003A），加乙酸乙酯20mL，振摇提取，分取乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取何首乌对照药材0.25g，加乙酸乙酯50mL，超声处理15min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为对照药材溶液。再取不含何首乌的阴性样品，同法制成阴性对照溶液。吸取上述3种溶液各4μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯?惨宜嵋阴オ布姿幔ㄌ寤?比5∶5∶2）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。再喷以磷钼酸浓硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰，日光下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的蓝色斑点。阴性对照无干扰，见图1。

1～3.供试品溶液；4.对照药材溶液；5.阴性对照溶液

图1何首乌的TLC图（A.紫外光灯365nm下;B.日光下）（略）

Figure1TLCofRadixPolygoniMultiflori(A.underultravioletlightat365nm;B.underthesunlight)

2.2金樱子的鉴别

取金樱子对照药材7g，加水50mL，煎煮30min，滤过，滤液浓缩至20mL，另取不含金樱子的阴性样品20mL，按“2.1”项下的供试品溶液的制备方法分别制备对照药材溶液和阴性对照溶液。吸取“2.1”项下的供试品溶液及上述2种溶液各6～10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，使成条状，以乙酸乙酯?布状吉菜?（体积比9∶0.8∶0.6）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，日光下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的蓝色主斑点。阴性对照无干扰，见图2A。

2.3狗脊的鉴别

取狗脊对照药材3g，加水50mL，煎煮30min，滤过，滤液浓缩至20mL，另取不含狗脊的阴性样品20mL，按“2.1”项下的供试品溶液的制备方法分别制备对照药材溶液和阴性对照溶液。吸取“2.1”项下的供试品溶液及上述2种溶液各4μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷?脖?酮?布姿幔ㄌ寤?比4∶1∶0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%氢氧化钠乙醇溶液，置紫外灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。阴性对照无干扰，见图2B。

1～3.供试品溶液；4.对照药材溶液；5.阴性对照溶液

图2金樱子(A)和狗脊（B）的TLC图（略）

Figure2TLCofFructusRosaeLaevigatae（A）andRhizomaCiboth(B)

3含量测定

3.1色谱条件

色谱柱：AgilentEclipseXDB??C18（4.6mm×150mm,5μm），流动相：甲醇??4%(体积分数)醋酸溶液（体积比20∶80）；流速：1.0mL/min，检测波长：320nm，柱温：室温，进样量：20μL。理论塔板数以二苯乙烯苷峰计应不低于2000。

3.2溶液的制备

3.2.1对照品溶液的制备精密称取二苯乙烯苷对照品适量，加甲醇制成每1mL含0.2mg的溶液，精密量取1mL，置10mL棕色量瓶中，加流动相至刻度，即得。

3.2.2供试品溶液的制备精密量取本品2mL，置50mL棕色量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，上清液用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。

3.2.3阴性对照溶液的制备取不含何首乌的阴性样品，按“3.2.2”项方法制成阴性对照溶液。

3.3专属性试验

分别取供试品溶液、对照品溶液及阴性对照溶液，按上述色谱条件测定，结果阴性对照对二苯乙烯苷的测定无干扰，说明方法专属性强。见图3。

A.对照品；B.样品；C.阴性

图3HPLC图（略）

Figure3HPLCchromatograms

3.4线性关系的考察

精密称取二苯乙烯苷对照品适量，加流动相制成质量浓度为1.291、2.581、5.163、10.325、20.650、41.300μg/mL的溶液，分别吸取20μL，按上述色谱条件测定，以峰面积(A)对对照品溶液质量浓度（ρ）进行回归，得回归方程A=83.0053ρ+2.6012，表明二苯乙烯苷进样量在25.82～826μg范围内呈良好的线性关系（r＝1.0000）。

3.5稳定性试验

精密吸取同一批供试品溶液各20μL，按上述色谱条件，每隔1h测1次峰面积，结果其RSD值为1.20%，表明二苯乙烯苷在7h内稳定。

3.6重复性试验

取同一批样品（批号：F03001B）共6份，分别按上述方法测定二苯乙烯苷的含量，结果其RSD值为0.25%,表明方法重现性良好。

3.7回收率试验

分别精密吸取已知含量的本品1批（批号：F03001B，含量为0.2153mg/mL）1mL6份，分别精密加入二苯乙烯苷对照品溶液（0.2118mg/mL）1mL，按“3.2.2”项方法制得供试品溶液，测定二苯乙烯苷含量，计算平均回收率为102.0%，RSD为0.83%。结果见表1。

3.8样品的测定

取3批样品（批号：C08001A、C08002A、C08003A），分别按“3.2.2”项方法进行测定，结果样品中二苯乙烯苷的含量分别为：0.1821、0.1968、0.1547mg/mL。

4讨论

4.1本文采用的方法尽可能与药典中相应的药材薄层鉴别方法一致，并依据产品的实际情况进行了展开条件的优化。何首乌采用药典中的苯?惨掖颊箍?系统时，背景影响大，特征荧光斑点易被掩盖；经摸索发现，采用本文的方法，荧光斑点清晰，阴性无干扰。根据文献［2，3］中的狗脊药材的鉴别方法操作，发现特征斑点荧光较弱，易受干扰，经摸索发现，用质量分数5%NaOH乙醇溶液进行显色，其特征点荧光强度加强，利于观察，较原方法提高了特征斑点检出的灵敏度。新晨

表1回收率试验结果（略）

br1Recoveryresults

4.2薄层色谱法鉴别时,分别用自制板及预制板同时展开、不同的温度或湿度环境下展开，层析结果表明：自制板与预制板的层析结果差别无显著性，不同的温度和湿度的环境下展开均可检出何首乌、金樱子、狗脊等药材特征斑点。本方法采用同一供试品溶液进行了4种药材的薄层鉴别（补骨脂的鉴别条件与药典一致，本文不再报道），操作非常简便。

4.3由于二苯乙烯苷化学性质不稳定，需避光操作，原标准采用萃取和蒸干的操作［3］，操作步骤多，操作过程中二苯乙烯苷易损失，本文采用直接稀释法进行样品处理，操作简单、快速、准确。曾使用流动相甲醇?菜?（体积比25∶75）［4］，但有一小峰与主峰分离较差，采用本文所述的流动相，分离度符合药典要求。

4.4曾考察了Dikmakromasil、ApolloC18和AgilentEclipseXDB??C183种色谱柱对同一批号样品（批号：F03001B）的影响,结果3种色谱柱的测定结果基本一致，表明本法的耐用性好。

【参考文献】

［1］WS3－B－3971－98.国家药品标准:卫生部药品标准第二十册［S］.1998:290.

［2］李光喜.首乌补汁的薄层色谱鉴别［J］.广东药学院学报，2003，19（1）:10-11.

［3］国家药品监督管理局.国家中成药标准汇编(内科气血津液分册)［M］.北京：化学工业出版社，2002：573.

［4］国家药典委员会．中华人民共和国药典:一部［M］．北京：化学工业出版社，2005．122.