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1仪器与试药
1.1仪器
FA1104A电子天平(上海精天电子仪器有限公司);DF??20流水式高速中药粉碎机(温岭市大德中药机械有限公司);超声波清洗仪(东莞市三源超声波设备有限公司,频率80kHZ,功率200W);723E紫外?部杉?分光光度计(天津喀纳斯光学分析仪器有限公司);1600X生物显微镜(上海浦东物理光学仪器有限公司),HH??S2水浴锅(江苏省金坛市环宇科学仪器厂)。
1.2试药
无水葡萄糖为分析纯,于105℃烘干至恒重备用;薄层层析用硅胶G(青岛市市北区海化干燥剂厂);其余试剂均为分析纯。
光果金樱子于2009年12月下旬采自惠州市象头山国家自然保护区,经惠州学院生命科学系柴素芬副教授鉴定为蔷薇科植物光果金樱子Rosalaevigatavar.Leiocarpus的成熟果实,于烘箱中50℃干燥,粉碎。金樱子经惠州学院生命科学系柴素芬副教授鉴定为蔷薇科植物金樱子RosalaevigataMichx.的干燥成熟果实,于烘箱中50℃干燥,粉碎,来源见表1。
2方法与结果[1,4]
2.1性状鉴别
金樱子为花托发育而成的假果,呈倒卵形,长2~3.5cm,直径1~2cm。表面红黄色或红棕色,有突起的棕色小点,系毛刺脱落后的残基。顶端有盘状花萼残基,中央有黄色柱基,下部渐尖。质硬。切开后,花托壁厚1~2mm,内有多数坚硬的小瘦果,内壁及瘦果均有淡黄色绒毛。气微,味甘、微涩。与金樱子相比,光果金樱子外表光滑无刺,表面没有毛刺脱落后形成的棕色突起小点,其他同金樱子。
2.2粉末显微鉴别
金樱子①非腺毛:淡黄色,多单细胞,长505~1836μm,直径16~31μm,中央膨大呈囊状,有孔沟,表面常有螺旋状的斜条纹,胞腔内含黄棕色物。②表皮细胞:表面观多角形,壁厚,内含黄棕色物。③下皮细胞:表面观类方形或类多角形,直径15~36μm。④草酸钙方晶,多见,长方形或不规则棱状,直径16~40μm,簇晶少见。⑤导管:多为螺纹、环纹,少网纹、具缘纹孔导管,直径8~20μm。⑥薄壁细胞:多角形,木化,具纹孔,含黄棕色物。⑦纤维:黄色,长梭形或条形,多成束,壁木化,孔沟明显,长约1071μm,直径16~20μm。⑧树脂块:不规则形,黄棕色,半透明。⑨果实表皮刺纵切面:外表皮细胞1列,切向延长或类方形,小。下皮层细胞径向延长。光果金樱子①非腺毛:单或多细胞,长505~1840μm,直径10~30μm,壁厚或较薄,木化或微木化,表面常有略弯曲的斜条纹,胞腔内含黄棕色物。②导管:多为环纹。③纤维:长至1070μm,直径16~20μm,壁木化,多为条形,梭形少见。④表皮细胞、下皮细胞、草酸钙方晶、薄壁细胞、树脂块等同金樱子。
2.3薄层色谱鉴别
分别取光果金樱子、不同来源金樱子粉末2g,各加乙醇30mL,超声处理30min,滤过,滤液蒸干,残渣加水20mL使溶解,用乙酸乙酯振摇提取2次,每次30mL,合并乙酸乙酯液,蒸干,残渣加甲醇2mL使溶解,作为供试品溶液。参照薄层色谱法(2010年版《中国药典》附录ⅥB)试验,吸取上述溶液各2μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷?惨宜嵋阴オ布状吉布姿?(体积比5∶5∶1∶0.1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,于105℃加热至斑点显色清晰。光果金樱子与金樱子在相同的位置上显相同颜色的斑点,结果见图1。
2.4.1对照品溶液的制备取经105℃干燥至恒重的无水葡萄糖60mg,精密称定,置100mL量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀,即得(每1mL中含无水葡萄糖0.6mg)。
2.4.2线性关系的考察精密量取对照品溶液1.5、3.0、4.5、6.0、7.5mL,分别置50mL量瓶中,加水至刻度,摇匀。分别精密量取上述溶液2mL,置具塞试管中,各精密加4%苯酚溶液1mL,混匀,迅速精密加入硫酸7mL,摇匀,于40℃水浴中放置30min,取出,置冰水浴中放置5min,取出,以相应试剂为空白,照紫外?部杉?照分光光度法(2010年版《中国药典》附录ⅤA),在490nm的波长处测定吸光度,以吸光度(A)为纵坐标,无水葡萄糖质量浓度(ρ)为横坐标,绘制标准曲线。得回归方程为A=5.7×10-2ρ-5.4×10-3,r=0.9995,结果表明无水葡萄糖在0.00~18.00μg?mL-1之间线性关系良好。
2.4.3样品测定取光果金樱子及金樱子粗粉约0.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加水50mL,称定重量,静置1h,加热回流1h,放冷,再称定重量,用水补足减失的重量,摇匀,滤过,精密吸取续滤液1mL,置100mL量瓶中,加水至刻度,摇匀,精密量取25mL,置50mL量瓶中,加水至刻度,摇匀,精密量取2mL,置具塞试管中,按照“2.4.2”项下的方法,自“各精密加4%苯酚溶液1mL”起,依法测定吸光度,从标准曲线上读出供试品溶液中多糖的质量(μg),计算,即得。光果金樱子多糖质量分数为(36.42±0.05)%,来源不同的金樱子多糖含量稍有不同,平均质量分数为38.46%,结果见表1。表1金樱子中多糖含量测定结果
3讨论
光果金樱子果实表面光滑无刺,金樱子果实表面有皮刺。采收加工后,光果金樱子表面无突起的棕色小点,而金樱子表面有突起的棕色小点,可以作为二者的外观性状鉴别的依据。金樱子的“刺”为植物体表皮向外突起形成的皮刺,由外表皮细胞1列切向延长和下皮细胞径向延长而成[5-6]。由于金樱子在采收加工时进行了除刺处理,并且粉碎后与果实花托壁的表皮细胞和下皮细胞混合,在普通显微镜下难以分辨,故皮刺难以作为二者的显微鉴别依据。
薄层色谱结果显示,光果金樱子与金樱子在相同的位置上,显6个相同颜色的斑点,说明在所选用的薄层色谱条件中,光果金樱子与金樱子显示了相似的化学性质,进行多种色谱条件鉴别研究或系统的化学成分分析有助于了解二者化学成分的异同。
多糖含量是金樱子质量优劣的一个重要指标,实验结果显示光果金樱子和金樱子多糖含量均高于药典要求的25.00%[1,4],质量较好。
光果金樱子是广东省新发现的植物资源,分布在海拔大约800m的惠州市博罗县国家象头山自然保护区内。资源分布较少,样品采集较困难,因此本实验光果金樱子仅采集到一个样品,实验样本较少,有待于收集更多的样品进行深入研究。新晨
致谢:
感谢广东省惠州市象头山国家自然保护区在提供光果金樱子实验材料等方面提供帮助,感谢惠州市南天生物科技有限公司在采集样品时提供帮助。
【参考文献】
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典:2010年版一部[M].北京:中国医药科技出版社,2010:206.
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[4]周日宝,陈胜璜,陈希平,等.金樱子中多糖含量动态变化的研究[J],中药研究与信息,2005,9(7):16-18.
[5]张涛.怎么识别被子植物的刺[J].生物学教学,2009,8(34):8.
[6]张丽娟,李家实,魏璐雪.中药金樱子形态组织学研究[J].河南科学,1996,6(17):18-19.