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1生物安全防护岗前教育
传染病医院区别于一般综合性医院的最大特点就是传染患者密集,传染源密度高。因此,生物安全防护对医护人员显得异常重要,尤其是实习学生。出于对传染病的恐惧心理,实习学生从一踏入医院开始就显得过于担心,心理负担重,再加上环境的改变、工作要求的改变等,学生的精神压力比在综合医院要大得多。解除学生的心理负担是岗前教育的首要任务,其次才是具体防护教育。做好这两项教育对将来在工作中防止职业暴露的发生至关重要。要让学生们懂得,传染病医院听起来可怕,其实很安全,这是由传染病的特殊性决定的。因为对每一位进到医院就诊的患者,医护人员就按照“标准预防”的原则去处理,防护非常到位。很多在医院工作大半辈子的医护人员也未见被感染,相反,如果在其他综合医院工作降低了个人防护标准,也会有被感染的可能,甚至可能性更大。因此,意识和态度是做好各项工作的前提。要求学生阅读科室制定的关于生物安全管理的各项规章制度和技术操作规范,关键的制度有实验室工作制度、生物安全管理制度、消毒隔离制度、人员准入制度、意外事故处理及报告制度、安全保卫制度等;技术操作规范有标本采集运送规范、血清(浆)分离操作规范、生物安全设备操作规范、消毒和灭菌操作规范、实验室废弃物处理规范等。使学生们知道人体污染、物体表面污染、水污染、空气污染等是实验室污染的主要种类。
熟悉实验室的感染途径,包括经口传播如食入性,直接传播如黏膜接触、针刺或划伤引起,经空气传播如吸入气溶胶和实验物品,经节肢动物媒介传播如蚊、跳蚤、蜱叮咬等。而在日常工作中的操作,如震荡、混匀、离心和打开装有传染源的容器盖等应在生物安全柜内操作,因为这样的操作极易产生气溶胶或喷溅伤害人,离心操作时,如标本是采用真空管或带有防护罩的离心杯,就可在开放性的场所如实验室内离心,打开采血管盖要在生物安全柜中进行,敞开式离心杯要在离心机内静置30min后才能打开离心机盖。在传染病医院,患者大都患有传染性疾病,其血液、体液及废弃物中均可能含有传染性的病原体。因此在样本的采集、运送、操作及高压消毒时,除了要做好个人防护外,还必须严格遵守相应的其他操作规范。如选择采集标本的容器材质最好使用塑料制品;标本容器应当坚固,有盖子或塞子,确保无泄漏,血液标本使用真空采血管采集;标本运送的盒子除必须坚固外,还必须可耐受消毒剂或高压消毒,并由接受过培训的专门人员运送;转运第一类、第二类病原微生物菌(毒)种或样本,要按照卫生部《可感染人类的高致病性病原微生物菌(毒)种或样本运输管理规定》进行;有条件的二级以上医院实验室,可设立标本统一接收处,以便于生物安全管理;不得手持利器(包括针头、刀片、金属品和玻璃)随意走动或徒手传递,不回套针帽,应直接弃置于一次性使用的利器盒内;所有实验室检测过的样本、培养物和被污染的物品,需交由专门有资质的人员高压消毒后方可运走等等。当发生意外暴露时,应当及时和正确进行处理,把风险降到最低。如皮肤接触到患者的血液、体液等标本,应立即用流水和肥皂搓洗干净;如患者的血液、体液溅入眼睛、口鼻等处,应立即用清水或生理盐水冲洗干净;如皮肤被污染的锐器刺伤或割伤,应立即用流水和肥皂冲洗伤口,同时由近心端向远心端挤兑出伤口的血液,然后用碘伏等消毒液消毒、无菌敷贴包扎伤口,并按相关规定流程上报和跟踪调查,包括立即采集血样作病毒血清学检查、尽早采取相应的治疗措施等。通过以上的学习教育,使学生对标准预防的目的、内容、方法及意义有所掌握,对隔离衣、护目镜、防护面罩及洗眼器等防护用品的使用和发生职业暴露发生后的处理和报告程序有所熟悉。同时,对医疗废物的分类和处置原则要有所了解。
2保护患者隐私教育
保护患者隐私是作为医护人员的应具有的职业道德,贯穿医学领域的各个专业和环节,临床检验也是如此。传染病是一类特殊的疾病,具有危害性大、防治困难等特点,普通民众心理上容易产生恐惧,其次,由于某些些传染病的传播途径与同性恋、静脉吸毒及性乱等行为有相似之处,因此,常常会引起人们对传染病患者的误解。其中艾滋病感染者及其亲属所受歧视最为明显,由于歧视伴随耻辱,使有潜在感染危害的人不愿意接受抗体咨询检测,乃至拒绝接受采取进一步预防措施的方案和手段,对自己的感染状况尽可能地隐瞒,希望知道的人越少越好,及时规范的治疗无法获得,艾滋病流行和扩散便成为必然。因此,患者隐私保护各国均有明确规定。根据我国最新的《传染病防治法》内容:医务工作者未得到患者同意,不可将传染病患者和其家属的相关信息如姓名、个人病史及家庭住址等以任何形式向社会散布。各级CDC或相关医疗机构要为患者保密相关隐私。学生入岗前,首先学习相关的法律法规,如卫生部颁布的《医务人员医德规范及实施办法》,以及本实验室相关的规章制度,如保护患者隐私制度等:患者的所有信息不得随意泄漏,主要表现在患者的化验单不能外挂、医务人员不能口头传播患者检查信息等,特殊情况需科主任甚至医务部门批准;艾滋病、梅毒、肝炎、淋病、结核等传染病的检测报告单均由专人送到各个病区,由护士进行管理和发放,另外,对门诊HIV抗体初筛、淋病奈瑟氏菌和疟原虫检查的阳性结果要进行录入登记,内容包括患者的相关资料、所在科室、送检医生姓名、送检时间、报告单送出后签收者签字等。
3岗位工作要求教育
学生进岗后,要求他们首先了解所在专业组开展什么项目,有什么仪器设备,项目的临床意义是什么,采用何种方法学检测等问题。工作中强调要尊重老师和爱护仪器设备,在征得老师的同意方能操作仪器设备,对手工操作的项目必须亲自动手,务必熟练掌握,提倡多提问,让他们知道提出问题要比解决问题更重要;要求学生规范操作,上机和操作前先阅览各个项目和仪器的标准操作程序(SOP)文件再进行操作,发现问题要及时报告;要求学生不能擅自签发报告,签发报告必须征得老师同意并有老师盖章签字;要求学生做好日记和读书笔记,以便自己懂得哪些是学了与未学、掌握与未掌握的内容。除此之外,还要教会学生如何处理与医护、患者的关系,如何避免医疗纠纷,沟通和服务的技巧等等,为将来走上工作岗位打下基础。
4艾滋病、结核病实验室诊断能力的培养
艾滋病和结核病诊治是我院的专科特色,具有较强的实力,实验诊断项目齐全先进。HIV的检测项目主要有抗体筛查和确证、T淋巴细胞功能测定(CD4/CD8)、病毒载量检测等。结核分枝杆菌(MTB)的检测项目主要有传统涂片法、抗体测定和分离培养鉴定,以及分子生物学核酸检测、耐药基因位点检测等。将这两种传染病的实验室检测技术作为重点传授给学生,以提高学生就业的竞争能力。
4.1教授学生全面掌握HIV抗体筛查技术的工作流程
HIV抗体初筛试验的目的归根结底就是为了尽可能把所有受到HIV病毒感染的患者检测出来,这要求实验室对该筛查试验必须具备高度的敏感性,以防发生一些不确定或假阳性的实验结果。根据2009年卫生部出台的《全国艾滋病检测技术规范》(以下简称规范)颁布了新的HIV抗体筛查工作流程。规范要求首先用一种试剂对标本进行抗体筛查试验,检测结果为阴性者报告阴性;检测结果为阳性者,重新采集一份新鲜标本使用之前的试剂和另外一种试剂进行复检,若复检结果均为阴性,则报告阴性;若结果均呈阳性或“一阴一阳”者则进一步做确证实验,确证实验主要采用免疫印迹法(WB)进行,是终裁实验。
4.2教授学生如何正确判读HIV抗体初筛试验结果
一般来说,HIV病毒感染人体后,HIV抗原的相关特异性抗体将会在1~3个月内产生,而HIV病毒抗体产生之前的则称为感染窗口期。值得说明的是,部分AIDS晚期的患者,由于其免疫功能极度缺陷导致HIV抗体浓度极低或缺失,可能出现HIV抗体检测发生阴性反应。因此,对于这部分患者的异常结果需慎重报告。必须结合患者病史、T淋巴细胞亚群计数及功能、HIV病毒载量以及临床表现等方面进行综合分析来解释阴性结果。对为可疑窗口期而HIV抗体筛查阴性结果的患者,建议在最后一次可能发生的暴露时间之后,3、6个月分别筛查1次,如6个月以后HIV抗体筛查结果仍为阴性的,HIV感染的可能性不大。对于HIV感染母亲所生的新生儿血中检测到的HIV抗体阳性并不能证明新生儿已受到HIV病毒感染,因为新生儿的IgG抗体是被动通过胎盘或乳汁获得,新生儿的自身免疫性抗体只有到出生18个月后从自身免疫系统中产生。
4.3懂得流式细胞仪和病毒载量仪检测标本的采集、保存和运送要求
T淋巴细胞亚群检测采用2mL规格内含ED-TA2K或EDTA3K的真空采血管采集静脉血2mL,采血后立即握住试管两端,垂直颠倒混匀数次,防止血液凝固。采血管上注明样本编号、采集日期等信息。保存温度要求在18~25℃,采集后48h内检测。溶血、凝血或结冰的样品应视为不合格样品,超过检测时限的样品不可检测;病毒载量检测采用10mL规格内含EDTA-2K或EDTA-3K的真空采血管采集静脉血10mL,采血后的处理与T淋巴细胞亚群检测标本一样,但要求采血后6h之内分离血细胞和血浆,因为HIV在全血中快速降解,6h之内降解速率为9%(0.04log),最大的降解速率是在采血后的6~8h,采血30h后可能减少0.5log(约3倍)。分离好的血浆置于-70℃保存。如果无-70℃冰箱,可短时间保存于-20℃以下冰箱,保存期勿超过30d。
4.4了解流式细胞技术的工作原理和临床意义
流式细胞术是目前常用来评价T淋巴细胞功能的方法,利用荧光染色技术对淋巴细胞亚群CD3、CD4、CD8进行计数,测定各种T淋巴细胞亚群的绝对值,从而用于评价集体的免疫系统,正常情况下,CD4、CD8绝对数的和与CD3计数绝对值的水平相当,当CD4与CD8绝对数比值发生异常时,机体免疫力发生较大的变化,而CD4T淋巴细胞亚群在维持机体的细胞免疫及体液免疫中都发挥了重要的纽带作用。通常情况下,HIV病毒主要以体内CD4细胞作为感染的靶细胞。HIV病毒感染人体后,CD4细胞的数量逐渐受到破坏,其免疫功能的逐步下降,各种病毒、病原菌侵袭机体,进而导致机体免疫功能缺陷,发生免疫缺陷综合症。由此可知,CD4细胞的计数在疾病诊断、治疗用药、病情发展及预后判断等均发挥了重要的作用,是HIV感染者疾病发生发展、疗效观察、转归判断较为良好的检测指标。
4.5教授学生了解结核分枝杆菌
了解MTB的生物学特性,全面掌握结核菌的抗酸染色技术和原理、显微镜下观察抗酸杆菌的形态学特性及常规结核杆菌的分离培养鉴定方法,熟悉MTB核酸及耐药基因检测的工作流程及判断标准。MTB抗酸染色是实习生必须掌握的一门技术,把握好染色的技巧对染色质量以致鉴别起很大作用,好的技巧需要反复练习。
4.6要求熟悉本实验室结核分枝杆菌的检测方法、工作流程、检测原理、检测所需时间,临床意义及检测结果的正确判读
掌握结核病的诊断金标准即从临床标本中分离培养出MTB,结核病常规的固体培养大多需要8周才能得到培养出完整的菌落,而快速培养法即液体培养最早只需5d就能提示有MTB生长,在液体培养中生长的结核菌需转种到固体培养基上进行分离鉴定。而痰液、肺泡灌洗液的核酸及耐药基因检测却能准确快速鉴定MTB,前后仅需6h,但不能区分是否为活菌。
作者:罗晓璐韦善求苏国生梁娟英许美蓉谢宁单位:南宁市第四人民医院广西壮族自治区艾滋病临床治疗中心南宁检验科