ICA对鼠免疫效能的影响范文

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作者：刘婧言莹史冰楠王德海单位：华中农业大学动物医学院武汉

方法

1试验设计及指标检测

根据预试验结果进行设计。将100只6周龄健康SPF级昆明系小鼠随机分为2组:对照组50只，灌服生理盐水0．4mL/d;试验组50只，灌服含ica的生理盐水0．4mL/d，ICA的终浓度为100mg/kg，连续灌服。在试验开始后第0，1，4，7，10，13，16，19天每组分别随机选取5只小鼠采血。采血后一部分血液立即进行红细胞、白细胞分类计数的测定，另一部分血液加入溶血剂后进行血红蛋白含量的测定。血液涂片采用酸性α－醋酸萘酯酶(ANAE)染色法进行T淋巴细胞活性的测定。

2组织学观察

将浸泡于10%甲醛固定液中的小鼠胸腺、脾脏和肠系膜淋巴结修整标号，制备石蜡切片，H．E．染色，在光学显微镜下进行组织学观察，照相。

3数据处理

应用SPSS统计学分析软件处理试验数据，并用t检验进行差异显著性分析。

结果与分析

1ICA对小鼠血液学指标的影响(结果见表1，2)

由表1可见:试验组小鼠在灌服ICA后，血液中白细胞数量一直呈现升高趋势，并在试验后第7天达到最高值，随后维持在较高水平，在试验结束时(试验后第19天)略有下降，其中在试验后第13天显著高于对照组(P＜0．05)，在试验后第7，10，16，19天极显著高于对照组(P＜0．01)。血液中的红细胞数也一直呈升高趋势，在整个试验期内都高于对照组，并在试验开始后第16天达到最高值，其中在试验后第13，16天显著高于对照组(P＜0．05)。

由表2可见:试验组小鼠在灌服ICA后，血红蛋白浓度在试验初期变化并不明显，直到试验后第16天才显著高于对照组(P＜0．05)，在试验后第19天极显著高于对照组(P＜0．01)。ANAE+T淋巴细胞的认定以淋巴细胞中有红色颗粒为指示指标(见164页彩图1A)，经统计后发现，ANAE+T淋巴细胞比率与对照组相比一直处于较高的水平，并于试验后第4天达到最高值，与对照组相比差异极显著(P＜0．01)，随后略有下降，但显著高于对照组水平(P＜0．05)，并直至试验结束。

2ICA对小鼠免疫器官影响的组织学观察

组织学观察发现，在整个试验周期内，对照组小鼠淋巴结的被膜完整，结构清晰，皮质区可见较多淋巴小结和淋巴窦，髓质区的髓索和髓窦清晰完整，淋巴窦内有大量淋巴细胞和巨噬细胞;胸腺中可见散在的大量胸腺小体，皮质部可见各种分化程度的淋巴细胞，髓质部淋巴细胞少而稀疏;脾脏被膜完整，脾脏巨噬细胞和淋巴细胞较多，脾小梁和脾小体结构清晰(见164页彩图1B)，并可见到较多的血窦。试验组小鼠的胸腺、脾脏和淋巴结在整个试验周期内与对照组相比无明显眼观差异(见164页彩图1C)。

讨论

ICA作为传统补益类中药淫羊藿黄酮类提取物，其免疫功能已被研究证实。赵连梅等［6］通过灌服方法对环磷酰胺所致的免疫抑制小鼠给予ICA。结果发现，ICA能极显著提高小鼠脾脏指数和胸腺指数，使脾淋巴细胞的数量增加和增殖反应提高，促进小鼠脾自然杀伤和细胞毒性T淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤活性和脾细胞肿瘤坏死因子(TNF－α)的产生，并增加脾脏CD4T淋巴细胞和自然杀伤T淋巴细胞的比率，表现为明显的逆转化疗小鼠免疫抑制状态的作用，同时也说明ICA对机体的免疫调节作用主要表现为激活T淋巴细胞。

汪海东等［7］利用流式细胞仪技术检测了脾CD4T淋巴细胞的凋亡率，利用电泳迁移率(EMSA)技术检测了细胞NF－κB的活性，并利用Western－blot印迹法检测了细胞P65蛋白的表达水平，认为ICA可经NF－κB信号通路提高NF－κB的活性和诱导P65蛋白的高表达，进而抑制机体淋巴细胞的过度凋亡，延缓动物免疫衰老。而本试验的结果也表明，小鼠灌服ICA后可明显提高其外周血中红细胞和白细胞的数量，并可使血红蛋白浓度升高，这一结果与赵连梅等［8］的结论相同。同时本试验也发现，ICA引起外周血ANAE+T淋巴细胞比率的增加要早于对机体淋巴细胞数量的提升，这表明ICA在体内首先发挥激活T淋巴细胞的功能，并继而表现为刺激机体产生大量的免疫细胞，但本试验对小鼠免疫器官的组织学观察发现，ICA对机体免疫器官的作用并不明显，免疫组织的淋巴细胞数量并未见眼观变化，这一结论与王洪武等［5］的研究结果并不一致，产生这种不一致的原因可能是试验检测方法的不同。

灌服ICA可明显增强小鼠免疫功能，但对机体免疫组织结构的影响不显著，可见ICA对机体免疫功能的调节是以刺激、激活机体内原有免疫细胞为主的，此种作用及其机制有待进一步研究。