牛副流感病毒的研究范文

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摘要：

我国牛群中普遍存在牛副流感病毒3型（BPIV3）的感染，严重危害着我国养牛业的发展。本文简要介绍了BPIV3的临床表现、流行病学、病原学、致病性、诊断技术和疫苗研发以及防控技术7个方面的内容。研究表明，开发出有效疫苗是控制BPIV3的理想手段，对预防由BPIV3引起的牛呼吸道疾病具有重要意义。

关键词：

牛副流感病毒3型；呼吸道疾病；研究进展

牛副流感病毒3型（Bovine.parainfluenza.virus.3,.BPIV3）属于单分子负链RNA病毒目（Mononegavirles）副黏病毒科（Paramyxoviridae）副黏病毒亚科（Paramyxovirinae）呼吸道病毒属（Respirovirus）的成员，是引起犊牛呼吸道疾病的主要病原之一。1959年Reisinger等[1]和Hoerlein[2]等在美国的牛体中首次分离到BPIV3，同时在这些动物中查出了该病毒的抗体。目前，BPIV3广泛流行于世界各国，在美洲、欧洲、亚洲各国均不断发生或流行。研究表明牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）、BPIV3、牛病毒性腹泻病毒（BVDV）和牛呼吸道合胞体病毒（BRSV）是目前已知的引发牛呼吸道传染病的主要病毒性病原[3,4]。近年来，我国山东、黑龙江、辽宁和内蒙古等多个省份发生了严重的犊牛呼吸道疾病综合征，造成很大的经济损失。经流行病学调查和病原学检测，表明BPIV3在犊牛呼吸道疾病综合征中起重要作用。2008年，我国首次从病牛鼻拭子中分离出BPIV3，并进行了全基因组序列测定，进化树分析表明该分离株为一新的基因型，定义为BPIV3基因C型，此为世界首次报道[5]。随后南美的阿根廷及亚洲的韩国亦报道了BPIV3基因C型的存在[6,7]。血清流行病学调查显示，我国部分地区BPIV3的血清阳性率高达77.6%(1936/2489)[8]，应引起行业的高度重视，否则将危害我国养牛业的发展。本文就我国BPIV3的研究进展做一介绍。

1临床表现

牛体感染BPIV3后的潜伏期一般为2~5d。病牛出现体温升高、食欲不振、精神萎靡等症状，体温最高可达.41℃以上，流泪、流鼻液、咳嗽，严重病例表现为呼吸困难。随着病情的加重而继发细菌或支原体感染，如多杀性巴氏杆菌、溶血性曼氏杆菌、牛支原体感染等，从而引起严重的肺炎，导致呼吸道疾病综合征，致使死亡率大大增加[9]。

2流行病学

据王海军等[8]报道，从黑龙江、辽宁、新疆、云南、贵州、广西、河北、山东、河南、江西、湖南和福建12个省（区）采集牛血清样品2.489份，用血清中和试验进行BPIV抗体检测，显示BPIV3抗体阳性率为77.6%(1936/2489)。其中江西省牛血清抗体阳性率为27.8%，其他省份阳性率均高于50%，2/3的省份样品阳性率超过80%，福建省样品阳性率高达100%。朱远茂于2014年用中和试验检测黑龙江省BPIV3血清抗体阳性率为97.06%（463/477）（未发表）。

3病原学

2008年，朱远茂等[5]从山东采集的病牛鼻拭子中分离出4株BPIV3，对其中的一株BPIV3.SD0835进行了全基因组序列测定，进化树分析表明与国内2008年黑龙江分离的DQ1株（属于基因A型）和2009年内蒙古分离株NM09株（属于基因A型）差异较大[10,11]，与国外已经公开发表的BPIV3基因A型和基因B型序列亦有较大差异，表明我国分离株为一新的基因型，定义为BPIV3基因C型，属于世界上首次报道基因C型。随后在黑龙江省、辽宁省和江苏省亦分离或检测到了BPIV3基因C型。近两年，朱远茂等[12]从发病现场送检样品中多次检测到BPIV3，主要为基因A型和C型，未检测到基因B型，基因B型在我国是否存在还有待进一步研究。

4致病性

将BPIV3接毒Balb/c.小鼠，24h后即可从小鼠肺及气管中检出病原。肺组织中病毒RNA的拷贝数明显高于气管组织。组织病理学变化主要以肺泡间隔增宽、局灶性纤维素性肺炎为主。豚鼠接毒BPIV3后表现出呼吸道相关的临床症状，解剖学可见肺脏暗红、实变。组织病理学变化包括肺泡间隔增宽和纤维素性肺炎。利用病毒分离滴定、实时RT-PCR.和免疫组化在接毒24h呼吸道组织中检测到了病毒复制。IHC染色揭示了肺脏和气管是BPIV3主要复制的组织部位[13]。奶牛经BPIV3攻毒后表现精神沉郁、流鼻液、眼有分泌物、咳嗽、呼吸困难等临床症状，有的表现体温升高并且可从鼻腔排毒。病理变化表现为肺泡壁毛细血管扩张、淤血，肺泡腔内有少量红细胞散在，伴有少量浆液析出；气管黏膜层消失；淋巴小结内淋巴细胞有轻微减少，部分淋巴细胞出现凋亡；肝脏、脾脏、肾脏和心脏无明显病理变化[12]。

5诊断技术

病原学诊断：董秀梅等[14]基于BPIV3.M基因建立了TaqMan实时荧光定量RT-PCR，用于快速定量检测BPIV3。该方法特异性强、敏感性高、重复性好，可用于人工感染样本的检测。牛呼吸道疾病大多呈现多病原感染，一般先由病毒感染，引起机体免疫抑制，再继发细菌感染，最终导致牛呼吸道疾病综合征，引起牛严重呼吸道疾病，使养牛业蒙受重大的经济损失，严重危害养牛业的健康发展。所以，很有必要建立同时检测牛呼吸道病多病原的诊断方法。目前已建立了同时检测牛病毒性腹泻病毒、牛副流感病毒3型和牛呼吸道合胞体病毒3种病毒的多重RT-PCR诊断方法，该方法具有特异、快速、准确的特点，可用于对这3种病毒的同时检测和鉴别诊断[15]。血清学诊断：中和试验是该病常用的血清学诊断方法，同时是该病血清学诊断的“金标准”，具有很高的可信度。血凝试验和血凝抑制试验因为成本低、操作方便、能在短时间内获得结果等优点也是该病常用的检测方法，所用红细胞多为豚鼠或鸡红细胞[16]。

6疫苗研发

BPIV3经细胞培养并灭活后与油佐剂乳化可制成BPIV3灭活疫苗。实验室试验证实了BPIV3灭活疫苗对牛是安全的，可诱导接种牛产生较高滴度的中和抗体。牛经BPIV3灭活疫苗免疫后，可抵抗强毒株的攻击[2]。但该疫苗目前尚未上市。

7防控技术

由于有关疫苗尚未上市，目前尚无BPIV3特异性防控手段。据报道，沙冬青总生物碱具有较强的体外抗牛副流感病毒3型的作用。采用综合作用方式给药时，其对BPIV3感染的治疗指数高达25.76，表明沙冬青总生物碱的作用效果与其毒性之间的相对距离较大，说明沙冬青总生物碱对BPIV3有宽广的安全质量浓度范围[17]。

8结束语

调查表明，我国牛群中已经普遍存在BPIV3的感染，严重危害着我国养牛业的发展。现阶段我国对该病的研究还处于对病原的分离、检测等初级阶段，在临床预防和治疗中还没有安全、高效的疫苗。随着我国养牛业的集约化发展，不少牛舍养殖密度大、空气质量差，这些因素的存在为该病的传播和流行提供了可能，所以深入开展BPIV3的研究，尽快开发出有效疫苗是控制BPIV3的理想手段。BPIV3的控制对预防牛呼吸道疾病的发生具有重要意义。

作者：徐子晟 朱远茂 单位：农业部农业机械试验鉴定总站 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所牛羊传染病创新团队