华蟾素宫颈癌细胞论文范文

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1材料与方法

1．1实验方法

1．1．1MTT法检测华蟾素对宫颈癌HeLa细胞生长的影响根据参考文献提供方法［6－7］，将宫颈癌HeLa细胞培养至对数生长期，调整其细胞密度后接种于96孔细胞培养板中，200μl／孔，分组为：调零孔组（只含RPMI1640培养液，无细胞）、对照组（含RPMI1640培养液、细胞）、华蟾素组（浓度分别为1、10、100、1000μg／ml），待细胞贴壁后加入药物，其中对照组加入等体积的培养液，然后置于细胞箱内继续培养24、48、72h后弃掉上清，加入MTT（5mg／ml）20μl／孔，继续于细胞培养箱中培育4h后，每孔加入200μlDMSO，在振荡器上震荡使结晶充分溶解。用酶标仪检测各孔的吸光度值（OD，其中波长为570nm），按以下公式计算细胞的增殖抑制率：抑制率＝（1－实验组平均OD值／对照组平均OD值）×100％。

1．1．2流式细胞术检测华蟾素对宫颈癌HeLa细胞周期的影响宫颈癌HeLa细胞培养至对数生长期，将细胞用胰酶消化后，重新接种，分组同步骤1．3．1，其中药物组每组加入华蟾素（浓度分别为1、10、100、1000μg／ml），对照组加入等体积培养液，培养48h后收集细胞，用固定液固定细胞过夜后，离心弃上清，PBS洗涤，用含0．1％TritonX－100、50μg／mlRNAse的PBS混合液将细胞重悬，加入90μlPI（0．5mg／ml）避光孵育半小时后，用尼龙网过滤，然后流式细胞仪进行检测分析。

1．1．3划痕实验检测华蟾素对宫颈癌HeLa细胞侵袭能力的影响根据参考文献划痕实验方法［8］，将宫颈癌HeLa细胞接种于6孔细胞培养板中，分组为：对照组以及药物华蟾素组（10、100、1000μg／ml）。将细胞于细胞培养箱中培养24h后，用20μl加样枪头于细胞层中竖向划一宽度均匀、一致的细胞伤口模型，每孔划3条伤口，然后药物组加入含有相应浓度的华蟾素培养液，而对照组加入等体积培养液，分别在细胞培养箱中孵育0、24、48h后，于光学显微镜下测算各划痕的宽度（每条划痕各取3个固定位置计算距离，取其平均值）。细胞迁移能力以迁移率表示：细胞迁移率＝（原划痕宽度－现划痕宽度）／原划痕宽度×100％。

1．2统计学方法应用SPSS13．0统计软件分析，所有数据均用（珋x±s）表示，行单因素方差分析、重复测量方差分析以及t检验。

2结果

2．1华蟾素抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖MTT法测定结果示：当1、10、100、1000μg／ml华蟾素作用于宫颈癌HeLa细胞24、48、72h后，可见细胞生长显著变缓。且随着华蟾素药物浓度的增加以及作用时间的延长，这种抑制作用有增强趋势，具有时间、剂量效应关系，各药物组与对照组比较，差异有统计学意义（P＜0．01）。

2．2华蟾素对宫颈癌HeLa细胞周期的影响流式细胞术结果示：当1、10、100、1000μg／ml华蟾素作用于宫颈癌HeLa细胞48h后，与对照组相比较，华蟾素各浓度组G0／G1期细胞所占比例不断增加，S期细胞比例减少，G2／M期细胞比例无显著变化，各药物组与对照组比较，差异有统计学意义（P＜0．05）。

2．3华蟾素抑制宫颈癌HeLa细胞的迁移细胞划痕实验结果示：当10、100、1000μg／ml华蟾素作用于宫颈癌HeLa细胞24、48h后，划痕宽度均大于对照组，通过上述公式计算各组细胞的迁移率发现：华蟾素组作用于宫颈癌HeLa细胞24、48h后，迁移率均小于对照组，差异有统计学意义（P＜0．01），见表3。显示药物华蟾素对宫颈癌HeLa细胞的迁移有一定的抑制作用，能够降低宫颈癌HeLa细胞向远处转移的能力。

3讨论

随着医学技术的发展，传统中医药材逐渐成为当今治疗肿瘤的重要手段以及新的策略之一，中药材的优势主要在于不仅对肿瘤具有显著的抑制作用，不易产生耐药性，且对机体的损伤以及不良反应小。因此，研究中药材抗肿瘤效应具有广阔的临床应用价值。华蟾素系传统中药中华大蟾蜍皮的水制剂，其主要成分是蟾毒灵及吲哚生物碱等，具有消炎、止痛、抗肿瘤以及提高宿主免疫力等多种作用。近年来研究表明，华蟾素对如乳腺癌、骨肉瘤、前列腺癌等多种肿瘤细胞具有抑制作用并可诱导其凋亡。且动物实验显示华蟾素具有升白细胞的作用，具有安全有效、不良反应小的优点，已被广泛应用于多种肿瘤的辅助治疗。但是其对于宫颈癌的作用还未见有相关文献报道，因此，我们进行了相关研究，希望为华蟾素在宫颈癌的临床应用提供一定的理论依据和基础。

本实验用不同浓度的华蟾素作用于宫颈癌HeLa细胞后，通过MTT法观察发现，华蟾素作用于宫颈癌HeLa细胞后，可显著抑制细胞的生长，且对细胞的抑制作用随着药物浓度的增加及作用时间的延长而逐渐增强，这说明华蟾素对HeLa细胞生长的抑制作用具有一定的量效、时效性，表明华蟾素可显著抑制HeLa细胞的增殖。我们通过流式细胞术结果发现，不同浓度华蟾素作用于宫颈癌HeLa细胞48h后，华蟾素各浓度组将细胞周期主要阻滞在G0／G1期，使细胞S期所占比例明显减少，从而抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖。而有研究显示，华蟾素能将肿瘤细胞阻断在S期，从而抑制肿瘤的增殖。这表明华蟾素能够通过阻滞细胞周期的进展进而发挥其抗肿瘤效应，但对不同类型肿瘤细胞周期的具体机制还有待深入的研究和探讨。另外，华蟾素还可抑制宫颈癌HeLa细胞的迁移能力。

综上所述，我们通过细胞增殖、细胞周期及侵袭这些生物学行为的研究初步证明了华蟾素对宫颈癌HeLa细胞生长的影响，为中药化疗研究提供了新的思路和相应的实验依据，但是对于华蟾素抗肿瘤作用的具体机制等还有待更进一步的深入研究，为华蟾素发挥其抗肿瘤作用提供相应基础。

作者：黄美华朱晨宇商远方单位：恩施土家族苗族自治州中心医院妇产科三峡大学第一临床医学院胃肠外科