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作者:张文婧单位:华南师范大学附属中学
实验过程组织
1实验材料选择
1.1观察叶绿体如果这个实验用菠菜的叶片作为实验材料,在实验过程中需要撕取带有少许叶肉的下表皮。因为菠菜叶片属于异型叶,上部是栅栏组织,下部是海绵组织。栅栏组织的叶绿体数量较海绵组织多,不利于对叶绿体形态的观察,因此在实验观察中用附着在下表皮的海绵组织。笔者在教学过程中使用黑藻作为实验材料。黑藻是一种单子叶沉水植物,叶片结构比较简单,有时只有一层细胞,便于制作临时装片。对许多刚上高一的学生而言,撕取下表皮的操作还是比较困难的,因此使用黑藻对课堂教学来说更加方便。
1.2观察线粒体为了防止叶绿体线粒体的掩盖和颜色的干扰,一般采用动物细胞进行线粒体观察。人口腔上皮细胞易于取得,观察方便,在课堂教学中应用广泛。
2实验器材及试剂
准备实验器材准备(2人一小组的用量):显微镜2台(最好是内置光源显微镜)、载玻片4块、盖玻片4块、尖头镊子2把、吸水纸若干、消毒牙签若干、滴管1支。试剂:清水、1%健那绿染液。健那绿染液需现配现用,配制方法如下:称取0.5g健那绿溶解于50mL生理盐水中,加温至30~40℃,使其充分溶解。
3实验操作及易出现的问题
3.1观察叶绿体在载玻片上滴加1滴清水,用尖头镊子撕下一片黑藻叶片,放入水滴中,盖上盖玻片,吸去多余水分,将装片放置在载物台上,先用低倍镜观察到清晰的细胞结构,再转成高倍镜,观察叶绿体的形态和分布。这步实验操作较为简单,学生容易出现的问题多在盖盖玻片的步骤上,需要教师巡堂过程中不断提醒并示范。
3.2观察线粒体在载玻片上滴加1~3滴健那绿染液,将消毒牙签的一侧尖头掰断,用钝的一头在口腔内侧壁上刮几下。把牙签上附着的碎屑浸入染液中,并轻轻涂抹开,盖上盖玻片。制作好的装片放在载物台上,先在低倍镜下找到完整的细胞,再用高倍镜观察染上色的线粒体。
因为线粒体体积较小,而光学显微镜的分辨率最低为0.2μm,线粒体的大小几乎接近光学显微镜的最低分辨率,所以在观察上难度较叶绿体更大。
学生在观察装片时,会错把细胞残片当成细胞,或者根本分辨不清细胞和气泡以及杂质。在实验之前,教师可以用酒精彻底清洁载玻片和盖玻片,去除玻片上的杂质,防止其在显微镜下干扰学生的观察。在用牙签刮取细胞之前,教师可以让学生用清水漱口,尽量去除口腔中的杂质和食物残渣。在教学当中,最好利用实物投影,将显微镜下的细胞形态直接展示在投影上,并标明线粒体,方便学生寻找及分辨在显微镜下的细胞结构。
课时建议
本实验较为简单,建议1课时结束。在实验结束教师总结时,可以讲解一下生物绘图的要求并示范,让学生在撰写实验报告的时候开始尝试生物绘图。
能观察到叶绿体流动的学生并不多,为了让更多的学生观察到流动的叶绿体,建议事先用25℃左右的温水在有光亮的地方浸泡黑藻,或在实验过程中提醒学生用尖头镊子在叶片上制造一个伤口,这样操作后比较容易看到流动的叶绿体。
如果实验课时较为充裕,可以另起1课时观察叶绿体的流动,并且更换不同的溶液(如强电解质、弱电解质、非电解质等)制作装片来观察溶液浓度、离子强度对叶绿体流动速度的影响。这样不仅拓展了教学内容,也更能激发学生的实验兴趣。